外周血染色体核型分析培训课件.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。,2017,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。,背景知识（,Background information),染色体与遗传病：,Genetic Disease,染色体的多变性：,Variability,染色体的畸变：,Aberration,多达,300,多种因染色体异常而导致的遗传疾病,46,条染色体在不同的人体内存在恒定的微小变异（无表型效应,or,病理学意义）,一定条件刺激下（,Eg.,药物、射线、病毒或母亲年龄），染色体会发生数目或结构畸变。,背景知识,(Cont.),染色体畸变,数目改变：,Quantity changes,染色体畸变,结构异常：,Unusual structure,多倍性：体细胞染色体数目成倍增加。原因：双雄受精，双雌受精，核内复制。,非整倍性：体细胞染色体数目增加或少一条或数条。原因：减数分裂染色体不分离或丢失。,缺失：染色体臂中段或末端丢失。,倒位：某一染色体中间片段发生两个断裂，断片倒转,180,后重接。,易位：转位，平衡易位，罗伯逊易位,简介,(Introduction),染色体核型分析是分析生物体细胞内染色体的长度、着丝点位置、臂比、随体大小等特征，其分析以体细胞分裂中期染色体为研究对象。,外周血染色体核型分析可直接在染色体上显示带型，不仅可以检测染色体数目上的变化，而且可以观察到缺失、重复、倒位、异位等结构上的异常，因而其检测可用在遗传病以及产前婚前孕前的诊断上。,概念：,Concept,目的：,Purpose,染色体核型技术检测,（遗传病诊断）：,Eg.,唐氏综合症,(21-3,体,),，,Patau,综合症,(18-3,体,),，,Edwards,综合症,(13-3,体,),。,明显体态异常，智力低下，发育障碍，多发畸形或皮纹明显异常，性情异常,第二性征异常或外生殖器两性畸形。,女性原发性闭经、继发性闭经或男子无精,长期接触,X,线、电离辐射、有毒物质的人员,恶性血液病患者,简介,(Cont.),染色体核型技术检测,（产前婚前孕前诊断）：,Eg.,猫叫综合症,（,5P,综合症,),特纳综合症，先天性睾丸发育不良综合症，超雄综合症,(XYY,综合症,),，超雌综合症,(XXY,综合症,),。,多发性流产，死胎和不孕不孕的夫妇,35,岁以上高龄孕妇,已生育过染色体异常患儿的夫妇，或双方或一方具有遗传病家族史,夫妇双方或一方为可疑或已知的染色体数目或结构异常的患者,婚前孕前检查希望进行优生优育检查的人群,简介,(Cont.),项目介绍,(Project)-,外周血染色体核型分析,临床应用：,Application,检测方法：,Method,样本量：,Sample,染色体异常是导致自然流产、胚胎停止发育，不良孕产史和不孕不育及发育异常的重要原因，对优生优育门诊就诊的患者进行染色体分析，在临床诊断和优生优育方面有重要意义。,培养法,G,显带,肝素抗凝全血,2.0ml,实验原理：,Test,Principal,外周血中淋巴细胞在含有,植物血凝素,(PHA),的培养基中培养,68-72,小时,，进入生长旺盛的,有丝分裂期,；,之后加入,秋水仙素,抑制纺锤体形成，使其停留在,细胞分裂中期,；,再经过,氯化钾溶液,低渗、固定、滴片制片、,胰酶,消化、,姬姆萨染色,，在油镜下可观察到每个分裂期的染色体形态及数量。,项目介绍,(Project)-,外周血染色体核型分析,(Cont.),实验操作：,Test,Procedure,1.,接种：先在每瓶含有,PHA,的,5ml,培养基的培养瓶中接种,0.5ml,的外周血，接种,2,瓶。,2.,培养：,37,全封闭式培养,68-72h,。在细胞收获前加入,0.1ml,浓度为,20ug/ml,秋水仙素培养,1-1.5h,。,3.,细胞的收获：,1,）用离心机以,2200,转,/,分钟离心,5,分钟后弃上清液。,2,）加入,0.075M,的,KCl,溶液,10ml,，充分混匀，低渗时间为,15-18,分钟。,3,）预固定：低渗后加入固定液,1ml,充分混匀（固定液是甲醇与冰乙酸按,3,：,1,混匀），以,2200,转,/,分钟离心,7,分钟。,4,）吸弃上清液，加入,10ml,的固定液，混匀。,项目介绍,(Project)-,外周血染色体核型分析,(Cont.),5,）用离心机以,2200,转,/,分钟离心,7,分钟，吸弃上清，加入,10ml,固定液轻轻混匀（两管合一），,2200,转,/,分钟离心,7,分钟。,6,）弃上清，加入适量的固定液轻轻混匀使成细胞悬液。,7,）取出在,4,冰水中预冷的清洁玻片，对玻片进行标识，每标记完一块滴片板上的玻片,就回顾一下是否编号准确。,8,）用吸管吸取细胞悬液在适当的高度滴于预冷的清洁玻片上，玻片的头体尾各一滴即可。,9,）每滴完一张片后，用纸轻轻将底面擦干，放至滴片柜中，,10,分钟后拿出贴上细胞遗传小标签。,4.,烤片：置于,75,摄氏度烤箱烤,3,小时。,5.,染片：在胰酶中消化,20-25s,，在生理盐水中漂洗，在吉姆萨溶液中染色,1-2,分钟即可。,项目介绍,(Project)-,外周血染色体核型分析,(Cont.),实验操作：,Test,Procedure,离心,5mins,PHA,秋水仙素,弃上清液,细胞增殖,KCL,氯化钾溶液,0.075,固定,3x,甲醇,1x,冰乙酸,离心,7mins,离心,7mins,弃上清液,滴入载玻片,吸管吸取,烘烤,75,摄氏度，,3hours,染色,胰酶消化,25s,生理盐水漂洗,吉姆萨溶液染色,1-2mins,外周血,淋巴细胞,G,显带评判标准：,Evaluation,Score,目的：,对不同级别条带水平进行评判，便于染色体的操作分析,0,：无条带,1,：鉴定同一条染色体的形态和主要标志,2,：低,(,小于,300,条,),3,：,300,条带,4,：适中,(400,条带,),5,：,500,条带,6,：好,(600,条带,),7,：,700,条带,8,：优良,(850,条带,),9,：,900,条带,10,：条带决定高于,9,级的额外带能在,900bphs,水平看到，一致视为双方同源。,项目介绍,(Project)-,外周血染色体核型分析,(Cont.),谢谢,Thanks,