实验十二-平板菌落计数.ppt

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,目的要求,掌握平板菌落计数的基本原理和方法；,学习并巩固倒平板及稀释过程中的无菌操作技术。,基本原理,平板菌落计数法是将一定量的含菌样品用无菌水经一系列,梯度稀释,后与培养基混合制成平板，样品中所含的单细胞微生物（菌体、芽孢、孢子）各自被分散固定在平板的不同位置上，经培养后，每个具有生命力的细胞均可繁殖成一个肉眼可见的菌落。因此，通过平板上的菌落计数就可推算出样品中活菌含量的多少。故平板菌落计数法又称,活菌计数法,。,1、梯度稀释,3、菌落计数,计数时一般选择每个平板上长有,30,300,个菌落的稀释度最为合适。同一稀释度的,3,个重复的菌数不能相差太悬殊。由,10,-4,、,10,-5,、,10,-6,稀释度计算出的总活菌数也不能相差悬殊，如相差较大，表示试验不精确。另外，所选择倒平板的稀释度是很重要的，一般以,3,个稀释度中第二个稀释度倒平板，所出现的平均菌落数在,50,个左右为最好。,活菌数/ml同一稀释度3次重复菌落平均数稀释倍数5,实验器材,活材料：变形杆菌悬液；,培养基：牛肉膏蛋白胨培养基；,器材：无菌培养皿，移液器，试管架，盛有,4.5ml,无菌水的试管，记号笔，酒精灯，火柴，恒温培养箱。,实验步骤,1、编号,取无菌培养皿6套，分别用记号笔标明10,-4,、10,-5,、10,-6,各2套。另取6支盛有4.5ml无菌水的试管，排列于试管架上，依次标明10,-1,、10,-2,、10,-3,、10,-4,、10,-5,、10,-6,。,2、稀释,用移液器精确吸取0.5ml变形杆菌悬液放入10,-1,标号的试管中，换1支枪头插入该管液体中反复吹吸3次，使其混合均匀，然后再准确吸取0.5ml移入10,-2,标号的试管中，混合均匀依次类推。,3、加样,取1支无菌枪头，用移液器分别从10,-6,、10,-5,、10,-4,管中吸取菌液各0.2ml，对号放入编号的无菌培养皿中。,4、倒平板,于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入熔化后冷却至50左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基约1015ml，置水平位置，迅速摇匀。,5、培养,待凝固后，倒置于37恒温箱中培养。,6、计数,培养24小时后计数，左手拿培养皿，右手拿笔，点数每皿中的菌落数，并作好记录。,下次实验自带镊子,注意事项,稀释菌液与取样时，每支移液管只能用于一个稀释度；,倾注平板时的培养基温度要合适；,混匀样品时，注意勿用力过猛，以免培养基与含菌混合液溅到培养皿盖与皿壁上；,样品要充分混匀，操作熟练快速（,15,20min,完成），严格无菌操作，尽量减小操作误差；,该法适用范围：中温、好氧和兼性厌氧、能在营养琼脂上生长的微生物。,移液器的使用；培养皿拿法。,清理工作。,实验报告,请,将计数结果记录于下表中。,稀释度,10,-4,10,-5,10,-6,菌落数,1,2,3,平均值,1,2,3,平均值,1,2,3,平均值,活菌数/ml,思考题,根据你的实验体会，请说说如何才能减少平板菌落计数的误差？,