本科寄生虫实验五课件.ppt

*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验 五,-,疟原虫,Malaria Parasite,-,弓形虫,Toxoplasm,a,-人芽囊原虫,Blastocystis hominis,.掌握间日疟原虫(P.v)红细胞内期的形态特点。,.掌握恶性疟原虫(P.f)早期滋养体和配子体的形态特点。,.认识疟原虫在肝细胞内(即红外期)及在蚊体内发育阶段的形态特点。,.练习血片的制作及染色。,.熟悉弓形虫滋养体及包囊的形态特征。,.熟悉隐孢子虫卵囊形态特征，了解改良抗酸染色法。,.熟悉肉孢子虫卵囊、孢子囊形态特征。,.了解人芽囊原虫形态特征。,.拷贝“标本复习”文件夹，做好考前复习。,.班长在下次实验课前2-3天，到106馆一楼准备室领取玻片和透明胶。,the Purpose and Requirements,间日疟原虫,(,Plasmodium vivax,P.v,),在人体内发育:,在雌性按蚊体内发育:,红细胞外期,红细胞内期,疟原虫生活史发育包括：,红细胞外期,Exoerythrocytic stage,-在肝细胞内进行裂体增殖；,-间日疟原虫和卵形疟原虫速发型子孢子红外期发育的时间分别是6-8天和9天，而迟发型子孢子为数月至年余；恶性疟原虫6天，三日疟原虫11-12天。,红内期,Erythrocytic cycle,早期滋养体/环状体,Early trophozoit/Ring form,晚期滋养体/大滋养体,Large trophozoite,裂殖体,Schizont,裂体增殖周期,配子体,Gametocyte,(Early trophozoit/Ring form,R),P.v,早期滋养体/环状体,.核1个,.胞质环形,胞质与核之间有空泡,呈戒指状,.大小约为红细胞直径的1/3.,.被寄生红细胞无明显改变.,(Large trophozoite,T),P.v,晚期滋养体/大滋养体,.核1个,.胞质增多变形,形状不规则，有空泡，,.胞质内出现棕褐色烟丝状的疟色素.,.被寄生红细胞体积稍增大,色淡,出现鲜红薛氏小点.,(Young schizont,YS),P.v,未成熟裂殖体,.核分裂,数目12个,.胞质分裂,围绕核,形成裂殖子,数目12-24个,.疟色素集中成1-2团，位于虫体中央或一侧.,.被寄生红细胞体积增大,色淡,出现鲜红薛氏小点.,疟色素,疟色素,疟色素,雄配子体,雌配子体,.核1个,疏松,近中央,.核1个,致密,偏向一侧,.细胞质几乎充满胀大的红细胞，疟色素均匀分布于其中.,.被寄生红细胞体积增大,色淡,鲜红薛氏小点明显.,P.v,配子体,(Gametocyte,G),恶性疟原虫,Plasmodium falciparum,P.f,P.f,红细胞内期发育,36-48 h,外周血中不易见到！,P.f,早期滋养体/环状体,(Early trophozoit;Ring form,R),.核1个,.胞质环形,胞质与核之间有空泡,呈戒指状,.大小约为红细胞直径的1/5.,多虫型,双核型,边缘型,P.f,配子体,(Gametocyte,G),疟色素集中于核的周围。,疟色素散于核的周围。,-被寄生的红细胞因破裂而不见或仅见一部分。,一个红细胞被,P.f,and,P.v,同时感染,P.f,P.v,一个红细胞有多个疟原虫寄生,注意与裂殖体鉴别。,In female,anopheline,:,在雌性按蚊体内发育,雄配子体出丝,Exflagellation of macrogametocyte,蚊胃上囊合子（卵囊）,卵囊,子孢子,-,子孢子,Sporozoite：,-子孢子为感染阶段；,-,间日疟,原虫和,卵形疟,原虫子孢子具有两种类型：速发型和迟发型。,-Thin blood film/thick blood film stained with Giemsa or Wrights stain.,-Thick blood film,-Thin blood film,Laboratory diagnosis,-具体操作见后面实验操作。,刚地弓形虫,Toxoplasma gondii,弓形虫滋养体-速殖子,Tachyzoite,(吉氏染色),弓形虫包囊,Tissue cyst of,Toxplasma gondii,缓殖子,Brachyzoite,弓形虫卵囊,Oocyst,of,Toxplasma gondii,孢子囊和4个子孢子,子孢子,残留体,改良抗酸染色法,.卵囊,Oocyst,隐孢子虫,Cryptosporidium,猪人肉孢子虫,Sarcocystis suihominis,卵囊,Oocyst,孢子囊,Sporocyst,肉孢子囊,Sarcocyst,：包囊,：空泡型,：颗粒型,：分裂状态,人芽囊原虫,Blastocystis hominis,-碘染色,患者女性，47岁，因外伤于1997年4月5日入院手术。术前血常规，血红蛋白10.3g/L，红细胞3.3510,12,/L，白细胞21.610,9,/L。术中输血400ml，术后第9天起不规则发热，实验室检查血红蛋白8.6g/L，红细胞2.710,12,/L，白细胞15.210,9,/L，晚幼红细胞30/100个白细胞。成熟红细胞易见破碎红细胞，红细胞内查见疟原虫小滋养体，确诊为恶性疟。经三联抗疟治疗后痊愈。,Case discussion 1,思考题：1.该患者有可能经什么方式感染恶性疟原虫？,2.本病的诊断依据是什么？,3.恶性疟与间日疟的治疗一样吗？,患者男性，30岁，因头痛高热3天入院治疗，刚援非回国。血常规检查：血红蛋白15g/L，红细胞4.5410,12,/L。入院后第2天出现昏迷，持继高热，反复多次镜检，于入院后第4天在红细胞内查见疟原虫小滋养体，同时在骨髓涂片中查见疟原虫小滋养体，确认为恶性疟原虫，会诊后确诊为恶性脑型疟。,Case discussion 2,思考题：1.从疟疾流行区（如非洲）工作、旅游、学习归国的人员，如发现原因不明的高热，应考虑其可能患了什么病？应该做什么检查？,2.试述脑型疟的临床表现及致病机制？,女，48岁，因右眼突然失明20余天入院。病人无诱因突然出现右眼失明，无眼部红、痛、闪光症状。入院后查：右眼视力：光感、外眼无异常，玻璃体出血。静脉点滴血栓通，口服活血化疲、软坚散结中药，右眼视力无提高。局麻下行“右眼玻璃体切割术”，手术顺利。术后第1天，右眼视力0.2，结膜充血，角膜透明；瞳孔药物性散大，玻璃体清亮，眼底见视盘界清，色正常，C/D=0.2，视网膜动脉稍红，A:V=1:2，颞下方视网膜可见陈旧性出血灶，考虑玻璃体出血即为此处出血灶渗入，局部伴色素沉着，脉络膜萎缩；术后第3天视力0.5；术后两次抽血查弓形体阳性（PCR法）。追问病史，病人儿童时期视力正常，近来病人有养猫史4年，最后诊断：右眼玻璃体出血；弓形体性视网膜脉络膜炎。,Case discussion 3,思考题：结合病例分析感染弓形虫的可能途径有哪些？,1.临床疟疾发作与疟原虫的繁殖有何关系？,2.试讨论引起疟疾暴发性流行的原因。,3.简述如何诊断疟疾？,4.刚地弓形虫感染为何分布很广？试述弓形虫致病的特点？,5.什么叫机会致病性原虫？有哪些常见的机会性致病原虫？,6.引起贫血的寄生虫有哪些？致病机理？,Questions:,实验内容,（一）示教内容：,1.间日疟原虫红细胞内期各期，恶性疟原虫早期滋养体和配子体、疟原虫囊合子、子孢子以及红外期标本：油镜下观,2.弓形虫速殖子（吉氏染色）：油镜下观,3.隐孢子虫卵囊（改良抗酸染色）：图片示教,4.猪人肉孢子虫肉孢子囊：高倍镜下观,实验内容,（二）实验操作：薄血涂片制作与染色,1.鼠疟原虫（,Plasmodium bergheri,伯氏疟原虫）接种小白鼠：取液氮保种的伯氏疟原虫，解冻后用生理盐水稀释。在无菌操作的条件下，给健康小白鼠作腹腔内注射，每只1ml，感染后3-5天，外周血即可查到原虫（由老师完成）。,2.薄血片制作：用剪刀剪去鼠尾未端少许，取洁净玻片一张，从鼠尾取血一小滴置玻片中部，另取一张玻片作推片，将推片的短边接触血滴，待血液向两侧扩散后，以两玻片呈30-40角，将推片自右向左匀速快捷向前推进，即成薄血膜。理想的薄血膜应是血量和宽度适中，平滑不起波浪，未端成舌形。,Preparation of blood film and stain,-血涂片制作和染色,-血 涂片 制 作,Preparation of blood film and stain,1-3为薄血片制作；4-6为厚血片制作,实验内容,（二）实验操作：薄血涂片制作与染色,玻璃板,橡皮筋,滴加染液,3.固定：待血片阴干后，用甲醇固定薄血膜，自然晾干。,4.染色：按,1毫升水加4滴吉氏原液,的比例配制染液。将涂有血膜的玻片血膜面朝下，一端架在铁丝上，用吸管滴注染液于玻板与血片之间，使染液与血膜完全接触，染色20min。,5.自来水轻轻冲洗血膜，晾干镜检。,-镜下观察血片的操作步骤及注意事项,1.10倍镜下经过观察后选择一较好的视野作为油镜下观察野，避免红细胞严重重叠或太稀少的视野.,-镜下观察血涂片的操作步骤及注意事项,2.油镜下观察时按固定方向，如从左到右或从右到左，将整张片观察完(约30min)，以避免在同一部位重复看。,1.10倍镜下经过观察后选择一较好的视野作为油镜下观察野，避免红细胞严重重叠或太稀少的视野.,-镜下观察血片的操作步骤及注意事项,2.油镜下观察时按固定方向，如从左到右或从右到左，将整张片观察完(约30min)，以避免在同一部位重复看。,1.10倍镜下经过观察后选择一较好的视野作为油镜下观察野，避免红细胞严重重叠或太稀少的视野.,3.发现目标时，判断是否为疟原虫，注意与血小板、白细胞、淋巴细胞、细胞碎片、染液颗粒等鉴别。,-镜下观察血片的操作步骤及注意事项,2.油镜下观察时按固定方向，如从左到右或从右到左，将整张片观察完(约30min)，以避免在同一部位重复看。,1.10倍镜下经过观察后选择一较好的视野作为油镜下观察野，避免红细胞严重重叠或太稀少的视野.,3.发现目标时，判断是否为疟原虫，注意与血小板、白细胞、淋巴细胞、细胞碎片、染液颗粒等鉴别。,4.肯定为疟原虫后，再依据形态特征分析是R、T、YS、MS or G。,4.形态典型的拍片，存图。,实验内容,附：,伯氏疟原虫,(,Plasmodium berghei,)分布于非洲扎伊尔的加丹山区森林中，自然宿主为丛林鼠，蚊媒为杜氏按蚊。,红内期裂体增殖周期约24h，早期滋养体为典型的环状体，偶见双核型，晚期滋养体近似圆形，阿米巴样外形不典型，成熟裂殖体含裂殖子数在小鼠为6-10个，配子体形状类似人间日疟原虫。疟色素细小，黑色或金黄色。,多虫寄生在同一红细胞极为普遍(注意与裂殖体鉴别)。被寄生的红细胞胀大。,实验室里长期用红内期原虫转种，不易见到配子体。,实验内容,（三）自已操作观察：,1.,间日疟原虫(,P.v,)薄血片,：油镜下观察环状体(R)、晚期滋养体(T)、未成熟裂殖体(YS)、成熟裂殖体(MS)和配子体(G)；,2.,恶性疟原虫(,P.f,)薄血片,：油镜下观察环状体(R)、配子体(不要求区分雌雄)；,3.弓形虫滋养体：油镜下观察；,4.油镜下观察自已制做的鼠疟原虫薄血片：,下课前特别要求：,一定要用擦镜纸蘸二甲苯擦拭油镜头和高倍镜头！,将标本归回到标本架上！要注意左右槽对齐插入！,将自已制做的鼠疟原虫玻片放入铝锅内！,实验报告要求:,-拍摄图片包括:,P.v,的滋养体T、未成熟裂殖体YS、成熟裂殖体MS,、配子体,G,中任选2个,(如果找不到，可在自己做的鼠疟血片上观察拍片代替);,P.f,的R和G,;,弓形虫滋养体.,-标注虫期名称（不需标注结构名称），如下图。,环状体,速殖子,特别强调：一定要用擦镜纸沾二甲苯擦拭干净油镜头和高倍镜头后，再离开教室。,附:本次课使用的缩写符号,-间日疟原虫,Plasmodium vivax,P.v,-恶性疟原虫,Plasmodium falciparum,P.f,-早期滋养体/环状体,Early trophozoit/Ring form,R,-晚期滋养体/大滋养体,Large trophozoite,T,-未成熟列殖体,Young schizont,YS,-成熟列殖体,Mature schizont,MS,-配子体,Gametocyte,G,-雄配子体,Microgametcyte，,G,-雌配子体,Macrogametocyte，,G,-雄性,-雌性,-红细胞,RBC,