高中生物选修一--分解纤维素的微生物的分离.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,分解纤维素的微生物的分离,纤维素酶,纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即,C,1,酶,(,外切酶,),、,C,X,酶,(,内切酶,),和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。,纤维二糖,C,1,酶、,Cx,酶,葡萄糖苷酶,葡萄糖,纤维素,取二支,20mL,的试管,实验：纤维素酶分解纤维素的实验,各加入一张滤纸条,各加入,pH4.8,，物质量为,0.1mol/L,的醋酸醋酸钠缓冲液,11ml,和,10ml,甲 乙,在乙试管中加入,1mL,纤维素酶,两支试管固定在锥形瓶中，放在,140r/min,的摇床上振荡,1h,结果：乙试管的滤纸条消失,讨论,：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？,提示：,本实验的,自变量,是,纤维素酶的有无,自变量的操纵方法是：,在,一支试管,中,添加适量（,1mL,）的纤维素酶溶液,，,另一支试管,不添加纤维素酶，但需,加入等量的缓冲液,，不能加入蒸馏水，否则会影响溶液的,pH,。,实验分析：,P,27,的小实验是如何构成对照的？,可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌,培养基成分分析,培养基组成,提供主要的营养物质,纤维素粉,5g,碳源（能源）,NaNO,3,1g,氮源、无机盐,KCl 0.5g,Na,2,HPO,4,7H,2,O 1.2g,KH,2,PO,4,0.9g MgSO,4,7H,2,O 0.5g,无机盐,酵母膏,0.5g,生长因子、,氮源,、,少量碳源,水解酵素,0.5g,氮素、生长因子,溶解后，蒸馏水定容至,1000mL,水,比较项目,分解尿素的细菌,纤维素分解菌,选,择,培养,基,原理,培养基类型,目的,鉴,定,培养基,原理,现象,方法,将细菌涂布在只有,尿素做氮源的选择,培养基上,将细菌涂布在只有,纤维素粉做碳源的,选择培养基上,固体培养基,液体培养基,筛选菌株,选择培养,思考：本实验的流程与课题,2,中的实验流程有哪些异同？,课题,2,是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素为唯一氮源的选择性培养基上，直接分离得到菌落。,本课题通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在选择培养基上。其他步骤基本一致。,按照课题,1,的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释,10,1,10,7,倍。,3.,梯度稀释,10,1,10,2,10,3,10,4,10,5,10,6,4.,将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养,基上,（,1,）制备鉴别培养基,:,（,2,）涂布平板：,将稀释度为,10,4,10,6,的菌悬液各取,0.1ml,涂布到平板培养基上，,30,倒置培养。,培养基组成,提供的主要营养物质,CMC-Na 510g,碳源,酵母膏,1g,碳源,、氮源、生长因子,KH,2,PO,4,0.25g,无机盐,土豆汁,100mL,碳源,、生长因子,琼脂,15g,凝固剂,上述物质溶解后，加蒸馏水定容至,1000mL,氢元素、氧元素,鉴别纤维素分解菌,的培养基,(,水溶性羧甲基纤维素钠,),方法一：先,，再加入刚果红进行颜色反应。,方法二：在,时就加入刚果红。,培养微生物,倒平板,5.,刚果红染色法,挑选产生透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。,这两种方法各有哪些优点与不足？,染色法,优点,缺点,方法一,方法二,颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用,操作繁琐,刚果红会使菌落之间发生混杂,操作简便不存在菌落混杂问题,1.,产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈,2.,有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。,比较,项目,分解尿素的细菌,纤维素分解菌,选,择,培养,原理,培养基类型,目的,鉴,定,培养基,原理,现象,方法,在细菌分解尿素的化学反应,中，细菌合成的脲酶将尿素,分解成了氨，氨会使培养基,的碱性增强，,pH,升高。在培,养基中加入酚红指示剂，如,果,pH,升高指示剂会变红,刚果红可以与纤维素形成,红色复合物，当纤维素被,纤维素酶催化分解后红色,复合物无法形成，培养基,上就会出现以纤维素分解,菌为中心的透明圈,观察菌落周围是否有,着色的,环,带出现来鉴定尿素分解菌,观察菌落周围是否出现,透明圈,来筛选纤维素分解菌,脲酶检测法,刚果红染色法,在产生明显的透明圈的菌落，挑取并接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在,30,0,C,37,0,C,培养，可获得纯化培养。,6,、纯化培养,为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行,_,实验，纤维素酶的发酵方法有,_,发酵和,_,发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的,_,含量进行定量测定。,发酵产纤维素酶,液体,固体,葡萄糖,五、课题延伸,