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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。感谢,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。感谢,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。感谢,动物细胞培养和核移植技术,专题2 细胞工程,1/34,植物组织培养,植物体细胞杂交,1.动物细胞培养,2.动物细胞融合,3.单克隆抗体,4.胚胎移植,5.核移植,回顾：,动物细胞工程惯用技术伎俩：,植物细胞工程惯用技术伎俩有哪些？,2/34,（一）动物细胞培养,就是从动物机体中取出,相关组织,，将它分散成,单细胞,，然后,放在,适宜培养基,中，让这些细胞,生长和繁殖,。,1,、动物细胞培养应用和概念：,3/34,动物,胚胎,或,幼龄,动物组织、器官,胰蛋白酶,剪碎,单个细胞,加培养液,制成,细胞悬浮液,10,代,细胞,部分细胞“癌变”，无限传代,动物细胞培养不能,最终培养成动物体,50,代细胞,原代培养,传代培养,细胞贴壁,剥离、分瓶,细胞株,细胞,细胞系,2.,动物细胞培养过程：,增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，轻易培养,去掉组织间,蛋白,4/34,3,、动物细胞培养过程中几个主要概念,1.,细胞贴壁：,悬液中分散细胞很快就贴附在瓶壁上（,单层,）。要求：,培养瓶或培养皿内表面光滑、无毒、易于贴附。,2.,接触抑制：,当贴壁细胞分裂生长到,表面相互接触时,，细胞就会停顿分裂增殖，这种现象称为细胞接触抑制。,动物细胞培养特点,：,贴壁生长、接触抑制：,5/34,3.,原代培养,(primary culture),定义：,把第,1,代细胞培养与传,10,代以内细胞培养统称为,原代培养,。,过程：从动物机体中取出组织,剪碎,加胰蛋白酶 细胞游离 加培养液 将细胞,接种到培养瓶内,培养（,1-2,天换一次培养液）,细胞贴壁生长,长成单层细胞,6/34,定义：,当原代培养,细胞生长停顿,，这时假如要使细胞继续生长，就要及时用,胰蛋白酶,等,，使细胞从瓶壁上解离下来，然后加入新培养液，将,细胞分离稀释，并从原培养瓶内转接到新培养瓶内，这个过程称传代培养,4.,传代培养,(subculture),7/34,细胞株：,从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养细胞，能传到,40-50,代，其,遗传物质没有发生改变。,细胞系：,传到,40-50,代后有,部分细胞遗传物质发生了改变,，带有癌变特点，可能在培养条件下无限制传代下去，这种传代细胞称为细胞系。,细胞株和细胞系区分：,细胞系遗传物质改变，含有癌细胞特点，失去接触抑制，轻易传代培养。,8/34,细胞悬浮液,10代细胞,50代细胞,无限传代,原代培养,传代培养,细胞株,细胞系,知识点小结：各个新名词之间联络,多数组织细胞固定在表面生长和分裂。,随细胞增多，细胞就会停顿分裂增殖,遗传物质改变,9/34,1,、无菌、无毒环境,（添加一定量抗生素，定时更换培养液）,2,、营养,（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等,）,3,、温度和,PH,温度,36.5,+,0.5,度，,pH7.2,7.4,4,、气体环境,O,2,和,CO,2,（,95%,空气和,5%CO,2,）,4,、动物细胞培养条件,确保细胞顺利生长增殖,离体培养细胞对微生物和有毒物质没有防御能力,能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？,10/34,5,、动物细胞培养技术应用,（1）生产蛋白生物制品：,病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体,等。,（3）用于,检测有毒物,质,（2）取得大量本身,皮肤细胞,，用于植皮。,（4）用于生理、病理、药理等方面研究，为治疗和预防疾病提供理论依据,（,5,）作为基因工程受体细胞,11/34,取得细胞,细胞全能性,细胞株、细胞系,植物体,培养结果,或细胞分泌蛋白,快速繁殖、培育无病毒植株等,培养目标,葡萄糖、动物血清,促生长因子,蔗糖、植物激素,培养基特有成份,液体培养基,固体培养基,培养基性质,细胞增殖,原理,动物细胞培养,植物组织培养,比较项目,6,、植物细胞和动物细胞培养比较,12/34,本节内容小结,1,、动物细胞培养过程包括概念,细胞贴壁、细胞接触抑制、原代培养、传代培养、细胞株、细胞系,3,、植物细胞和动物细胞培养比较,4,、动物细胞培养技术应用,2,、动物细胞培养条件,13/34,2,、为何选取动物胚胎或幼龄个体器官或组织做动物细胞培养材料？,1,、动物细胞培养液主要成份是什么？较植物组培培养基有何独特之处？,3,、为何培养前要将组织细胞分散成单个细胞？,4,、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？,主要成份：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。,独特之处有：,1,、液体培养基,2,、成份中有动物血清等,因为这些组织或器官上细胞生命力旺盛，分裂能力强,成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养,不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新动物个体,练一练,14/34,1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变细胞是-（）,A,细胞系,B,细胞株,C,原代细胞,D,传代细胞,2、动物细胞工程技术基础是-（）,A.,动物细胞融合,B.,单克隆抗体,C.,胚胎移植,D.,动物细胞培养,A,D,15/34,3、用于动物细胞培养组织和细胞大都取自胚胎或出生很快幼龄动物器官或组织，其主要原因是这么组织细胞（）,A.,轻易产生各种变异,B,含有更强全能性,C.,取材十分方便,D,分裂增殖能力强,D,16/34,4.动物细胞培养与植物细胞培养主要区分在于-（）,A.,培养基不一样；,B.,动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；,C.,动物细胞能够传代培养，而植物细胞不能；,D.,动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培,养成植株。,D,17/34,二、克隆技术,1,、概念：克隆就是,无性繁殖,，详细地说，是指一个共同祖先，经过无性繁殖方法产生出来一群遗传特征相同,DNA,分子、细胞或个体,。,a.,分子水平上：,普通指,DNA,克隆。,b.,细胞水平上：,指一个单一细胞分裂所形成,细胞群体,。,c.,细胞水平上：,指基因型完全相同两个或一个群体。,18/34,2,、克隆条件：,a.,含有包含五种完整基因组细胞核活细胞,（,乳腺上臂细胞,）,b.,能有效调控细胞核发育细胞质物质（,去核卵细胞质,）。,c.,完成胚胎发育必要地环境条件（,诱导核,-,质重组细胞生长、分化试验条件和怀胎母体子宫环境,）。,3,、技术基础：,1.,植物克隆技术基础是,组织培养,2.,动物克隆技术基础是,动物细胞培养,19/34,动物细胞特点？,分化潜能变窄,：伴随细胞分化程度提升而逐步受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而言。,细胞核仍含有全能性,：细胞核，它含有保持物种遗传性所需全套基因，而且并没有因细胞分化而丢失基因，所以高度分化细胞,细胞核,仍含有全能性,想一想,20/34,依据动物细胞核仍含有全能性特点,怎样将动物细胞全能性表示,?,再想一想,利用动物体细胞核移植技术,21/34,1.,概念：,将动物一个细胞细胞核，移入一个已经去掉细胞核,卵母细胞,中，使其重组并发育成一个新胚胎，这个新胚胎最终发育成动物个体。,核移植,（难度高）,受体细胞：,M,期卵母细胞,三、动物体细胞核移植技术,胚胎细胞核移植：,体细胞核移植：,细胞分化程度低，恢复全能性轻易,用核移植方法得到动物,称为克隆动物,22/34,卵母细胞,黑面母绵羊,白面母绵羊,乳腺细胞,细胞质,细胞核,细胞核移植,早期胚胎,卵裂,C,母绵羊子宫,胚胎移植,多莉羊,分娩,妊娠,融合后卵母细胞,2.,体细胞核移植过程,电脉冲刺激,23/34,供体细胞（供核）,细胞培养,体细胞,卵巢卵母细胞（,M,中期：供质）,去核,无核卵母细胞,注入,细胞融合,重组细胞,构建重组胚胎,胚胎移植,代孕母体,生出与,供体,奶牛遗传基础相同犊牛,归纳,:,1.,共分成两大阶段：,核移植和胚胎移植,2.,取卵母细胞作受体细胞,原因,是,:,它是最大细胞,易操作；含有激发细胞核全能性物质,3.,严格来说新个体有卵母细胞细胞质所以有,两个亲本性状,2.,体细胞核移植过程,24/34,供体细胞培养,（,M,卵母细胞）,减数第二次分裂中期,去核卵母细胞,供体细胞注入去核卵母细胞,受体细胞激活，完成减数分裂、发育,胚胎移植,25/34,核移植图片,26/34,多莉与“母亲”,27/34,(1),遗传素质完全一致克隆动物将更有利于开展对动物,(,人,),生长、发育、衰老和健康等机理研究；,(2),有利于大量培养品质优良家畜,;,(3),经转基因克隆哺乳动物，将能为人类提供源源不停廉价药品、保健品以及较易被人体接收移植器官；,(4),科学家将很快地从当前同种克隆技术推进到异种克隆,即借腹怀胎新领域,这无疑将大大促进对濒临灭种哺乳动物保护工作。,克隆技术将对,21,世纪产生重大影响,28/34,四、体细胞核移植技术应用前景,1,、加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育,2,、保护濒危物种，增加存活数量,3,、克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白,4,、能够作为异种移植供体，能够用于组织器官移植,29/34,五、体细胞核移植技术存在问题,胚胎移植动物幼体产出 概率,10,克隆动物存在着健康问题,克隆动物食品安全性问题存在争议,30/34,知识点小结,动物体细胞核移植技术和克隆动物,1.,克隆动物概念,2.,体细胞核移植技术过程,3.,体细胞核移植技术应用前景,4.,体细胞核移植技术存在问题,31/34,1.,动物细胞培养要经过脱分化吗？为何？,2.,体细胞核移植方法生产克隆动物是对体细胞供体动物进行了,100%,复制吗？为何？,课后习题,3.,胰蛋白酶真不会把细胞消化掉吗？为何？,胰蛋白酶除了能够消化细胞间蛋白质外，长时间作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，所以必须控制好胰蛋白酶消化时间。,32/34,5.,什么叫单层细胞培养,1957,年，科学家采取胰蛋白酶消化处理和应用液体培养基方法，取得了单层细胞培养。单层培养法出现，对细胞培养发展起了很大推进作用。,4.,为何对动物细胞进行培养时通常要添加血清？,血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质为白蛋白和球蛋白；氨基酸有各种，是细胞合成蛋白质基本成份，有些动物细胞不能合成，必须由培养液提供；激素有胰岛素、生长激素等促进细胞生长、增殖、贴附。所以，细胞培养要确保细胞能顺利生长和繁殖，普通要添加,10%-20%,血清。,33/34,6.,去核方法有哪些？,当前核移植技术中普遍使用去核方法是,显微操作去核法,。还有些人采取其它方法，如梯度离心、紫外光短时间照射、化学物质处理等。,这些方法是在没有刺破透明带或卵母细胞质膜情况下，去除细胞核或使卵细胞核,DNA,变性，从而到达去核目标。,34/34,
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