微生物实验培养检测保存.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,霉菌实验相关知识,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,霉菌的实验材料,谭跃,2012 9.20,（1）培养基制备的一般程序,e.,加棉塞，包装。,鉴定是否有菌可将培养基置于,37,培养,24,小时，然后观察,注意,因高压之后,pH,值会下降,0.1,左右，所以矫正,pH,时应比所需的,pH,高,实验室常用培养基,肉膏蛋白胨培养基：,牛肉膏,3g,，蛋白胨,10g,，,NaCl5g,，琼脂,15-20g,，水,1000ml,，,pH7.0-7.2,；,淀粉琼脂培养基（高氏,1,号培养基）：,可溶性淀粉,20g,，,KNO,3,1g,，,NaCl0.5g,，,K,2,HPO,4,0.5g,，,FeSO,4,0.01g,，琼脂,20g,，水,1000ml,，,pH7.0-7.2;,PDA,培养基：,马铃薯（去皮）,200g,，蔗糖或葡萄糖,15g,，琼脂,15-20g,，水,1000ml;,实验原理,二 消毒、灭菌及倒平板,步骤,半固体培养基：穿刺接种,液体培养基接种,普通琼脂培养基：涂布平板，平板划线接种，斜面划线接种,浅盘固体接种,（2）接种,划线分离,划线接种注意要点,划线时接种环与平皿约成,30-40,度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂,.,第一次划线应占平皿面积的,1/10,以后每次划线约占面积的,1/4,1/5.,划线为连续划线,不能间断,.,应占满平皿,.,划线不能交叉重复,.,每次划完后接种环应灭菌,.,稀释分离涂布平板,稀释分离倾注平板,真菌分离、纯化,利用低碳氮比的培养基可使真菌生长菌落分散，利于计数，分离和鉴定。这里主要是利用营养成分的减少而使生长减慢，并由此限制真菌的迁涉生长。,一般采用,PDA,培养基,改变培养温度将有利于不同嗜温区真菌的分离。,有时，真菌子实体形成必须有光线，这在分离培养时应加以考虑。,将分离得到的单菌落分别接种到单个平板上,颜色反应：分离特定的菌株；,牛奶平板：分离蛋白酶产生菌；,待分离的微生物的生长特征明显不同,菌落观察,霉菌,放线菌,要求：,每种微生物选择典型菌落,1-2,个，列表描述细菌、霉菌、酵母、放线菌的菌落形态特征,种类及编号,大小,颜色,边缘,隆起程度,挑起难易,气味,细菌,A,不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般,都具有稳定的特征（形状、颜色等），可以成为对该微,生物进行分类、鉴定的重要依据。,（,4,）菌种保藏,最常见的保藏方法：斜面,细菌的保藏：甘油保藏,真菌的保藏：石蜡油保藏、孢子保藏,几种常用菌种保藏方法的比较,方法名称,主要措施,适宜菌种,保藏期,评价,冰箱保藏法（斜面）,冰箱保藏法（半固体）,石蜡油封藏法*,沙土保藏法,冷冻干燥法,低温,低温,低温、缺氧,干燥、无营养,干燥、无氧、低温、有保护剂,各大类,细菌、酵母菌,各大类*,产孢子微生物,各大类,36,月,612,月,12,年,110,年,515,年以上,简便,简便,简便,简便有效,简便有效,1,比浊计数法,浊,细菌悬浮液的浊度,细菌不完全透光，一定范围内,菌溶液的混浊度与菌数量成,正比,（一）实验原理,2.,酵母的血球计数板计数,0.05,2,cm,2,25,0.1ml,菌液,提问：,数了,125,个小格中有,90,个细菌，样品中的细菌浓度是多少？,(90,个,125)*400/0.1ml=2880,个,/ml,适用范围：酵母及较大细菌，如细菌个体太小、过多，由于每一小格中细菌层层叠加，相互遮挡，难以准确计数。,数酵母,数目，（,一般数,125,个小格,），,折算,样品酵母菌浓度；,酵母菌悬液,显微镜、血球计数板、分光光度计等。,（三）实验器材,1,了解血球计数板构造,显微镜下找到血球计数板的各种格子,（四）实验步骤,2,、目测酵母菌大致浓度。,3,、稀释酵母菌悬液，直至其个数在计数范围内：每小格,2-5,个。,4,、计算出酵母浓度，同时采用分光光度计测定其,OD,。,5,、将原酵母菌液稀释至,5-7,个梯度，分别测定其浓度。,以,OD,值为横坐标，浓度为纵坐标，做标准曲线。,（五）数据处理,霉菌形态及培养方法,1,培养基的选择,目前国标方法中使用的培养基有,:,马铃薯葡萄糖琼脂,(PDA),孟加拉培养基,(RBC),、高盐察氏培养基,(CAO),其中,PDA,和,RBC,适合于一般的霉菌和酵母菌生长,而,CAO,则适合于高渗性霉菌生长,酵母菌几乎不长。,霉菌菌落,有菌丝,可在显微镜下观察到,孢子 菌丝均可繁殖,水浸片制作 视频,10,分钟,霉菌检测操作视频,