植物组织中蛋白含量和POD酶活力的测定.doc

三叶草和草坪草中蛋白含量和POD酶活力的测定
摘要：本实验以三叶草和草坪草为材料，测定了其蛋白含量和POD酶活力的测定。结果表明，三叶草中的POD酶活力比草坪草的酶活力？

关键词： 三叶草、草坪草、蛋白含量、POD酶活力、对比
引言：过氧化物酶是存在于各种动物,植物和微生物体内的一类氧化酶.催化由过氧化氢参与的各种还原剂的氧化反应.
过氧化物酶是由单一肽链与一个铁卟啉辅基结合构成的血红蛋白.多数植物过氧化物酶与碳水化合物结合成为糖基化蛋白.糖蛋白有避免蛋白酶降解和稳定蛋白构象的作用. 过氧化物酶的作用机理
过氧化物酶催化过氧化氢氧化酚类的反应，产物为醌类化合物，此化合物进一步缩合或与其他分子缩合，产生颜色较深的化合物。本实验以邻甲氧基苯酚（即愈创木酚）为过氧化物酶的底物，在此酶存在下，H2O2可将邻甲氧基苯酚氧化成红棕色的4-邻甲氧基苯酚。红棕色的物质可用分光光度计在470nm处测定其吸光度，即可求出该酶的活性。

1材料、试剂及实验器材
1.1材料：三叶草和草坪草，于2009.10.20日采自河西学院北区草坪中，于生化实验室冰箱中冷藏一周。
1.2试剂：0.1mol/l磷酸缓冲液、愈创木酚、酶液
1.3实验器材： 研钵、5ml离心试管、冰袋、试管、量筒、分光光度计
2、方法
2.1、POD的提取
准确称取三叶草，草坪草。加适量石英砂充分研磨（冰浴），分别加入1ml缓冲液（0.05ml/lNa2HPO4，pH7.0），12000r/min，40C离心20min，取上清液，并量出上清液的体积，用于蛋白质和酶活力的测定。
2.2、过氧化物酶活性的测定
取4支试管，分别进行编号并按表1加入相应的试剂。
表1

试剂

对照管0

样品液1

样品液2
0.01mol/l磷酸缓冲液/ml

2.4

2.3

2.3
0.02mol/l愈创木酚/ml

0.5

0.5

0.5
酶液/ml

0

0.1

0.1

加好反应物后，摇匀 ，在470nm处读出A470值，为t=0时的读数。立即加入0.01ml0.04mol/l新配制的H2O2后，即刻摇匀并计时，每隔30s读数1次，共计6个数值。
3、结果与分析

表2

表2

表3
三叶草和草坪草中POD酶活力的比较

三叶草

草坪草

POD酶活性

0.003

0.047

POD酶比活力

还有个图形、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、？

由图可知、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、？
4、讨论
本实验以三叶草和草坪草为材料，测定了其POD酶活性，研究了两种植物蛋白质含量与POD酶活性的状况，实验结果表明三叶草中蛋白质含量比草坪草中的多，而其POD酶活性要小，不同来源的POD具有不同的耐热性..过氧化物酶在最适作用温度上存在着很大的差别.例如,马铃薯和花菜(均浆)中过氧化物酶的最适温度分别为55℃和35～40℃.一般来说,植物的过氧化物酶活力越高,它的耐热性也越高.
比如马铃薯和花菜匀浆中的过氧化物酶在95℃加热10min就完全而不可逆地失活.
而甘蓝中的过氧化物酶在120℃加热10min仍然有0.3%活力保存下来.. 低水分含量, POD耐热性增加:
例如:水分含量低于40%时,谷类中过氧化物酶的热稳定性与水分含量成反比.
从研究结果中我们可以得到草坪草的耐热性较高。
【参考文献】： 1. 何亚丽,沈剑,王惠林. 冷地型草坪草耐热机理初探——Ⅰ.草地早熟禾(Poa pratensis L.)在热境胁迫下叶片叶绿素含量和POD酶活性的变化[J]. 上海农学院学报, 1997, (02) .
2. 徐国明,张桂银,褚卓栋,薛培英,张桃红,毕淑琴. 铜污染土壤上施用氮磷肥对小麦POD酶活性及铜吸收的影响[J]. 土壤, 2008, (03) .
3. 朱建华,刘武定,曹享云,耿明建. 缺硼对棉花不同品种苗期叶片POD、SOD同工酶的影响[J]. 植物营养与肥料学报, 2001, (03) .
4 郭海军，董志强，林永增，李振山，李俊兰，黄国存，崔四平，潘学标. 黄萎病对棉花叶片SOD、POD酶活性和光合特性的影响[J]. 中国农业科学, 1995, (06) .