GBT38475-2020色素中生物毒素检测胶体金快速定量法国家标准规范.pdf

书 书 书犐 犆犛 犃?犌犅犜?犇犲 狋 犲 犮 狋 犻 狅 狀狅 犳犿狔 犮 狅 狋 狅 狓 犻 狀 狊犻 狀狆 犻 犵犿犲 狀 狋犚犪 狆 犻 犱狇 狌 犪 狀 狋 犻 狋 犪 狋 犻 狏 犲犿犲 狋 犺 狅 犱狅 犳犮 狅 犾 犾 狅 犻 犱 犪 犾犵 狅 犾 犱狊 狋 狉 犻 狆狋 犲 狊 狋?书 书 书前言本标准按照 给出的规则起草。本标准由中国标准化研究院提出并归口。本标准起草单位：中国计量大学、中国标准化研究院、江南大学、北京萨姆伯科技有限公司。本标准主要起草人：崔海峰、叶子弘、马爱进、刘丽强、张明洲、俞晓平、许益鹏、申屠旭萍、张雅芬、匡华、郝帅。犌犅犜 色素中生物毒素检测胶体金快速定量法范围本标准规定了用胶体金快速定量法检测天然色素产品中生物毒素的方法。本标准适用于基于天然产物提取及发酵制备的天然色素产品中黄曲霉素、桔青霉素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素的快速定量检测。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。粮食、油料检验扦样、分样法 分析实验室用水规格和试验方法原理试样提取液中的生物毒素在层析过程中与检测试剂条中胶体金微粒标记的特异性抗体竞争结合并发生呈色反应，颜色深浅与试样中生物毒素含量相关。用读数仪检定检测条上检测线和质控线颜色深浅，根据颜色深浅和读数仪内置曲线自动计算出试样中生物毒素含量。试剂或材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯。水 ，二级水。黄曲霉毒素犅纯度。桔青霉素纯度。玉米赤霉烯酮纯度。呕吐毒素纯度。犌犅犜 苯乙腈混合液量取 苯，加 乙腈，混匀。稀释缓冲液称取 三羟甲基氨基甲烷，加水溶解，调；加入 氯化钠、，用水定容至 ；或采用商品化的同类产品。（体积分数）甲醇溶液提取液取 的甲醇加水 ，混匀。犘犅犛缓冲溶液称取 氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钾，用水溶解，调节至，用水定容至 。（体积分数）吐温 犘犅犛溶液移取吐温，以缓冲溶液定容至 。（体积分数）磷酸溶液准确移取磷酸，加水定容至 。犿犵犔的生物毒素标准储备液分别准确称取一定量的生物毒素标准品，用苯乙腈（）溶液溶解，容量瓶定容至，配制 的生物毒素标准储备液，保存于备用，可保存年。仪器设备 天平：精度 和 。粉碎机：转速不低于 。离心机：转速不低于 犵。涡旋振荡器。读数仪：可测定并显示胶体金免疫层析试纸条的检测结果。胶体金免疫层析检测试纸条：性能要求见附录。微量移液器。免疫亲和柱：柱体积规格或，柱容量不低于 ，或等效柱。样品制备 试样取样按照 执行。犌犅犜 试样制备 固体样品天平称取有代表性的固体或样品 ，其中 用粉碎机粉碎至全部通过 目筛，混匀，分两份密封冷冻保存。取一份保存样品准确称取 试样于 具塞锥形瓶中，加入 甲醇溶液提取液，密闭，用涡旋振荡器振荡 ，静置后用滤纸过滤，或取 混合液于离心管中，用离心机离心。取滤液或离心后上清液 于另一离心管中，加 于稀释缓冲液，充分混匀待测。如样品为特殊材料，需将稀释后的混合液用针头过滤器过滤，即为待测液。液体样品液体待测样品用均质器，处理不少于，充分混匀后，用微量移液器分别吸取 加入个 离心管中，一份密封冷冻保存，一份用于检测。从待测离心管中吸取 离心液体样品于另一离心管中，加入 稀释缓冲液，充分混匀待测。净化将免疫亲和柱连接在 玻璃针筒下，准确移取 上述样品滤液过免疫亲和柱，以滴滴的流速全部通过亲和柱；加入 吐温 溶液，以滴滴的流速淋洗柱子，直至空气进入到亲和柱中，弃去全部流出液。准确加入 洗脱液进行洗脱，洗脱流速为滴滴。收集全部洗脱液于离心管中备用。注：净化处理仅针对红曲红等对胶体金反应结果产生严重背景干扰的色素产品。测定 低温保存的检测试纸条取出后，室温放置 。胶体金试剂条：将试纸条浸入含 待测溶液的离心管中，室温孵育。胶体金检测卡：将 待测溶液加入到检测孔中，室温孵育。宜选择胶体金检测试纸条或检测卡生产厂家的读数仪配套使用。结果分析 反应结束后，取出胶体金免疫层析检测试纸条或检测卡观察线（质控线）和线（检测线）的显色情况。若出现线不出现，或线出现但弥散或严重不均匀，或线出现但线弥散或严重不均匀，均视为无效检测。调整读数仪参数，固定好胶体金检测试纸条或检测卡，对目标毒素进行检测，测定需要在 内完成，重复测定次，读数仪根据内置拟合曲线自动计算并显示样品中相应生物毒素的含量，单位为微克每千克（）或微克每升（）。在相应生物毒素的检测范围内，基于阴性对照样品，设置空白样品添加的不同浓度梯度，其中黄曲霉毒素浓度范围为 ；桔青霉素浓度范围为 ；呕吐毒素浓度范围为 ；玉米赤霉烯酮浓度范围为 。基于标准样品浓度值与代表线强度光密度值的积分面积检测数据，采用四参数 拟合算法建立标准曲线，拟合程度犚值应在 以上。犌犅犜 重复性在重复性条件下获得的次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的。其他本方法检出限黄曲霉毒素 ，桔青霉素 ，玉米赤霉烯酮 ，呕吐毒素 。犌犅犜 附录犃（规范性附录）胶体金快速检测试纸条性能要求犃 准确性采用最低检测限倍、倍、倍浓度水平的实物标准样品，每个浓度水平测定不低于次。计算检测条检测结果与实物标准样品的偏差，个浓度水平的偏差均应控制在 之间。犃 精密度采用最低检测限倍浓度水平的实物标准样品，测定不低于次，计算检测条批次内变异系数，变异系数。犃 检测限测定 份阴性样品，计算平均值加倍标准差，其结果应小于或等于产品灵敏度标示值。犃 批间稳定性采用约 浓度水平的实物标准样品进行检测，不得低于个批次，每个批次测定不低于次，批内测定取平均值，计算检测条批间变异系数，变异系数应小于或等于。犃 特异性选取阴性待测样品，加入与目标检测生物毒素可能存在交叉反应的其他生物毒素，除目标检测生物毒素添加样品检测结果为阳性外，其余添加样品测定结果均为阴性。犌犅犜