GBT18932.24-2005蜂蜜中呋喃它酮呋喃西林呋喃妥因和呋喃唑酮代谢物残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法国家标准规范.pdf

I C S 6 7.1 8 0.1 0X 3 1中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GB/T 1 8 9 3 2.2 4-2 0 0 5蜂蜜中吠喃它酮、吠喃西林、吠喃妥因和吠喃哇酮代谢物残留量的测定方法 液相色谱一 串联质谱法M e t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f t h e me t a b o l i t e r e s i d u e s o f f u r a l t a d o nn i t r o f u r a z o n e,n i t r o f u r a n t o i n a n d f u r a z o l i d o n e i n h o n e y-L i q u i d c h r o ma t o g r a p h y 一t a n d e m ma s s s p e c t r o me t r y me t h o d2 0 0 5-0 2-0 4发 布2 0 0 5-0 8-0 1 实施中 华人民 共和国 国 家质量 监督 检验 检疫 总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会发 布GB/T 1 8 9 3 2.2 4-2 0 0 5月q舀GB/T 1 8 9 3 2本部分的附录 A、附录 B为资料性附录。本部分由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本部分由中华全国供销合作总社归口。本部分起草单位:中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。本部分主要起草人:庞国芳、张进杰、曹彦忠、郭彤彤、范春林、李学民、刘永明、曹亚平。本部分系首次发布的国家标准。GB/T 1 8 9 3 2.2 4-2 0 0 5蜂蜜中吠喃它酮、肤喃西林、吠喃妥因和 映喃哇酮代谢物残留量的测定方法 液相色谱一 串联质谱法范围 G B/T 1 8 9 3 2 的本部分规定了蜂蜜中峡喃它酮的代谢物 5 一 甲基吗琳-3-氨基一 2-哇烷基酮、吠喃西林的代谢物氨基脉、峡喃妥因的代谢物 1-氨基一 2 一 内酞脉和吠喃哇酮的代谢物 3-氨基一 2-哇烷基酮残留量液相色谱一 串联质谱的测定方法。本部分适用于蜂蜜中5 一 甲基吗琳-3-氨基一 2-哩烷基酮、氨基脉,l-氨基一 2 一 内酞脉,3-氨基一 2-哩烷基酮残留量的测定。本部分的方法检出限:5 一 甲基吗琳-3-氮基-2-哇烷基酮和 3-氨基一 2-哩烷基酮为0.2 f g/k g;氨基脉和1-氨基一 2 一 内酸脉为0.5 E 9 9%.4.1 0 磷酸氢二钾溶液,0.1 m o l/I。称取 1 7.4 g磷酸氢二钾(4.4)，用水溶解，定容至 1 0 0 0 mL,4.1 1 盐酸;0.2 mo l/L。量取 1 7 ml浓盐酸(4.7)用水定容至 1 0 0 0 mL.GB/T 1 8 9 3 2.2 4-2 0 0 54.1 2 氢氧化钠溶液:1 mo l/L。称取 4 0 g氢氧化钠(4.8)，用水溶解，定容至1 0 0 0 mL,4.1 3 衍生剂:含2-硝基苯甲醛0.0 5 m o l/L。称取0.0 7 5 g 2 一 硝基苯甲醛(4.9)溶于1 0 m L二甲亚矾(4.6)，现用现配。4.1 4 样品定容溶液:乙睛(4,2)+0.4%乙酸(4.5)水溶液(1+9),4.1 5 O a s i s HL B固相萃取柱或相当者:6 0 mg,3 m1。使用前分别用 5 m L甲醇(4.1)和 1 0 mL水预处理，保持柱体湿润。4.1 6 0.4 5 p m滤膜。4.1 7 5 一 甲基吗琳-3-氨基一 2-哇烷基酮、氨基脉,1-氨基一 2 一 内酞脉和3-氨基一 2-哩烷基酮标准物质:纯度9 9 环。4.1 8 5 一 甲基吗琳一 3-氨基一 2-哇烷基酮、氨基脉,1-氨基一 2 一 内酞脉和 3-氨基一 2-哩烷基酮标准储备溶液:1.0 mg/m工称取适量的四种硝基吠喃代谢物标准物质(4.1 7)，分别用甲醇配成 1.0 mg/m1的标准储备液。储备液避光贮存在一1 8 冰柜中，保存期为三个月。4.1 9 5 一 甲基吗琳-3-氨基一 2-哇烷基酮、氨基腮,1-氨基一 2 一 内酞脉和 3-氨基一 2-哇烷基酮混合标准工作溶液:1.0 V g/mL。吸取适量四种硝基峡喃代谢物的标准储备溶液(4.1 8)，用甲醇配成 1.0 l a g/mL的混合标准工作溶液，标准工作溶液避光贮存在-1 8 冰柜中，保存期为三个月，使用前回温到室温。4.2 0 5 一 甲基吗琳-3-氨基一 2-哇烷基酮、氨基脉,1-氨基一 2 一 内酞脉和 3-氨基一 2-哇烷基酮混合基质标准校准溶液:称取七个蜂蜜空白样品(称样量为 4g)于5 0 m L徐色离心管中，其中六个空白样品中分别加人适量四种硝基峡喃代谢物的混合标准工作溶液(4.1 9)，按照样品操作步骤同步操作。使最终样液中5 一 甲 基吗琳-3-氨基一 2-噢烷基酮和 3-氨基一 2 噢烷基酮的浓度均分别为 0 n g/m L,0.5 n g/m I-,1.0 n g/m 1.,2.0 n g/m L,5.0 n g/m L,1 0.0 n g/m L,2 0.0 n g/m L;氨基脉,1-氨基 一 2 一 内酞脉的浓度均分别为0 n g/m L,1.0 n g/m L,2.0 n g/m L,5.0 n g/m I,1 0.0 n g/m L,2 0.0 n g/m L,5 0.0 n g/m L 作为基质标准校准溶液，该基质标准校准溶液即配即用。5仪器5.1 液相色谱一 串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。5.2 分析天平:感量0.1 m g 和。.0 1 g 各一台。5，3 液体混匀器，5.4 固相萃取装置。5.5 氮气吹干仪。5.6 恒温箱。5.7 真空泵:真空度应达到 8 0 k P a o5.8 微量注射器:2 5 p L,1 0 0 p L,5.9 棕色具塞离心管:2 5 m L,5 0 m L,5.1 0 p H计:测量精度土0.0 2.5.1 1 贮液器:5 0 mL o6试样的制备 与保存51 试样的制备 对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的 样品，在密闭情况下，置于不超过6 0 的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。分出。.5 k g 作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记6.2 试样保存 将试样于常温下保存。GB/T 1 8 9 3 2.2 4-2 0 0 57测定步骤7.1 水解和衍生化 称取4 g 试样(精确到。.0 1 g)于5 0 m L 棕色离心管中(5.9)，加人5 m L 0.2 m o l/L盐酸溶液(4.1 1)和 0.1 5 mL衍生剂(4.1 3)，涡旋混合 1 m i n,置于 3 7 恒温箱(5.6)中保持 1 6 h a7.2净化 将上述衍生溶液(7.1)取出放置至室温，加人3 mL 0.1 mo l/L磷酸氢二钾溶液(4.1 0)，用1 m o l/L氢氧化钠溶液(4.1 2)调节溶液 p H约 7.4，倒人下接 O a s is HL B固相萃取柱(4.1 5)的贮液器(5.1 1)中，在固相萃取装置(5.4)上使样液以小于2 m L/mi n的流速通过O a s is HL B柱，待样液全部通过固相萃取柱后用6 m L 水洗固 相萃取柱，弃去全部流出液。用真空泵(5.7)在6 5 k P a 负压下抽干O a s i s H L B 固相萃取柱1 0 m i n。再用4 m L乙酸乙酷(4.3)洗脱被 测物，洗脱液全部收集于2 5 m L 棕色离心管中，并在氮气吹干仪(5.5)上4 0 水浴吹干，1 m L样品定容液(4.1 4)定容。定容液混匀后过。.4 5 Ia m滤膜(4.1 6),滤液供液相色谱一 串联质谱测定。7.3测定7.3.1 液相色谱条件 a)色谱柱:Z O R B AX S B-C 1 8,3.5 p m,1 5 0 m m X2.1 m m(内径)或相当者;b)柱温,3 0 0 C;c)进样量:4 0 p L;d)流动相及流速见表 1,表 1 液相色谱梯度洗脱条件时间/min流速/(K L/min)。.4%乙酸水溶液/(%)乙腑/(%)0.0 02 0 07 03 03.0 02 0 07 03 03.0 12 0 02 08 08.0 02 0 02 08 08.0 12 0 07 03 01 5.0 02 0 07 03 07.3.2 质谱条件 a)离子源:电喷雾离子源(E S D;b)扫描方式:正离子扫描;c)检测方式:多反应监测(MR M);d)电喷雾电压(I S);5 5 0 0 V;e)雾化气(N E B)压力:0.0 7 6 MP a;f)气帘气(C U R)压力:0.0 6 9 MP a;g)碰撞气(C A D)压力:0.0 3 0 M P a;h)辅助气(A UX)流速:7 L/m i n;i)辅助气温度(T E M):5 0 0 0C;J)聚焦电压(F P):2 0 0 V;k)碰撞室出口电压(C X P):I I V;1)Q 1,Q3 均为单位分辨率(UN I T);m)定性离子对、定量离子对、采集时间(D w e l l)、去簇电压(D P)及碰掩能量(C E)见表 2,G B/T 1 8 9 3 2.2 4-2 0 0 5表 2四种硝基 味喃代谢物 的质谱 参数硝基峡喃代谢物名称定性离子对/(-/0定量离子对/c m/z)采 集 时 间/n 1s去 簇 电压/v碰撞 能 量/v5甲基吗嗽-3-氨基-2-哇烷基酮 衍 生 物3 3 5/2 9 1;3 3 5/1 2 83 3 5/2 9 11 0 06 03 2;1 8氨基服衍生物2 0 9/1 9 2;2 0 9/1 6 62 0 9/1 6 62 0 05 51 7;1 5卜氨基 2 一 内酞服衍生物2 4 9/1 3 4;2 4 9/1 7 82 4 9/1 3 42 0 07 02 2;1 93氨基一 2噢烷基酮衍生物2 3 6/1 3 4;2 3 6 八9 22 3 5 门 3 41 0 06 51 9;2 07.3.3 液相色谱一 串联质谱测定7.3.3.1 定性测定 在相同试验条件下，样品中待测物质与同 时检测的 基质标准具有相同的保留时间，并且所选择的离子相对丰度比相一致，则可判定为样品中存在该残留。四种硝基吠喃代谢物的参考保留时间和离子相对丰度比见表 3.表 3 四种硝基吠喃代谢物参考保留时间和离子相对丰度比硝基吠喃代谢物名称定 性 离 子 对/(m/z)离子相对丰度比/(%)保 留 时 间/n 11 n5 一 甲基吗嗽-3-氨基一 2 一 哩烷基酮衍生物3 3 5/2 9 1;3 3 5/1 2 8 1 0 0;5 3l2.84氨基脉衍生物2 0 9/1 9 2;2 0 9/1 6 69 3;1 0 04.4 01-氨基 2 一 内酞服衍生物2 4 9/1 3 4;2 4 9/1 7 81 0 0;4 04.9 23氨基 2哇烷基酮衍生物2 3 6/1 3 4;2 3 6/1.9 21 0 0;1 26.827.3.3.2 定f X 19 定 在仪器最佳工作条件下，对四种硝基峡喃代谢物的混合基质标准校准溶液(4.2 0)分别进样，以峰面积为纵坐标，混合基质校准溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。四种硝基吠喃代谢物的标准物质总离子流图参见图A.1。四种硝基吠喃代谢物的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见表 B.l o7.4 平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.5空 白试验 除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。8结果计 算结果 按(1)式计 算:_10 0 01 0 0 0 .。.。，(1)V一m C -一 X式 中:X 一 试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(u g/k g);c 从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(n g/m L);V样品溶液最终定容体积，单位为毫升(mL);。样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克 9)。注:计算结果应扣除空白值GB/T 1 8 9 3 2.2 4-2 0 0 59精密度 本部分的精密度数据是按照 G B/T 6 3 7 9的规定确定的，重复性和再现性的值以 9 5%的可信度来计算。9.1 重复性 在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(r)，蜂蜜中四种硝基吠喃代谢物的含量范围及重复性方程见表 4,如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2 再现性 在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，蜂蜜中四种硝基吠喃代谢物的含量范围及再现性方程见表 4.表 4 含f范围及重复性和再现性方程硝基吠喃代谢物名称含 量 范 围/(P g/k g)重 复 性 限 r再 现 性 R5 一 甲基吗琳-3-氨基 2 一 哇烷基酮0.2-4Ig r=0.9 6 5 6 I g vn-1.0 8 9 7Ig R=O.9 6 2 5 Ig m-0.7 1 2 8氨 基 脉0.5-1 0Ig r=0.9 6 6 0 I g m-1.1 4 4 5Ig R=0.9 1 5 2 Ig m一0.6 5 1 31-氨基一 2 一 内酞脉0.5-1 0Ig r=0.9 8 4 4 I g m-1.0 9 3 5R=O.2 0 5 8 m-1-0.0 1 1 93-氨基 2唆烷基酮0.2-4r=0.0 7 3 5 m+0.0 0 1 6Ig R=1.0 8 1 3 I g m-0.7 9 8 2注:，为两次测定结果的算术平均值。G B/T 1 8 9 3 2.2 4-2 0 0 5 附录A (资料性附录)四种硝基映喃代谢物标准物质总离子流图四种硝基峡喃代谢物标准物质总离子流图见图A.1,曲舫的曲5通J丹0R-0.46-O.44.0 e 42.0 e 41 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 t/mi n2.8 4 min为5 一 甲基吗啡-3-氨基-2-哇烷基酮;4.4 0 min为氛基脉;4.9 2 mi n 为 1-氨基-2 一 内酞服;6.8 2 mi n 为 3-氨基一 2-哇烷基酮。图 A.1 四种硝基映喃代谢物标准物质总离子流图GB/T 1 8 9 3 2.2 4-2 0 0 5 附录B(资料性 附录)回收率本方法中四种硝基吠喃代谢物的添加浓度及其平均回收率的试验数据见表 B.1,表 B.1四种硝基映喃代谢物的添加浓度及其平均回收率的试验数据硝基吠喃代谢物名称添加浓度/(P g/k g)回收率/(%)5 一 甲基吗琳-3-氨基-2-哇烷基酮0.20.4 2 49 6.79 3.09 0.98 9.5氨 基 服0.51.05.01 09 6.49 3.38 8.78 8.91-氨基 2 一 内酞脉0.51.05.01 09 7.59 3.89 1.98 7.33-氨基一 2 一 哇烷基酮0.20.4 2 49 2.99 2.68 9.68 8.1