基因工程概念PPT文档.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,DNA重组技术的基本工具,1,1、原理：,2、操作水平：,3、又称：,4、优点：,基因重组,DNA分子水平,DNA重组技术或基因拼接技术,定向改造生物性状,克服远缘杂交不亲和的障碍,育种周期短,2,基因工程的别名,操作环境,操作对象,操作水平,基本过程,实质,结果,基因拼接技术或DNA重组技术,生物体外,基因,DNA分子水平,人类需要的基因产物,剪切,拼接,导入,表达,基因重组,一、基因工程的概念,3,二、基因工程的基本工具,看书，思考以下问题：,1、基因工程中三种基本工具的作用分,别是什么？,2、工具酶的作用部位分别在哪？,3、具备什么条件才能充当“分子运输,车”？,4,解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？,关键步骤一的工具：,关键步骤二的工具：,关键步骤三的工具：,基因的,剪刀限制酶,基因的,针线DNA连接酶,基因的,运载工具运载体,5,（一）“分子手术刀”限制性核酸内切酶,1、来源：,主要来自原核生物,2、特点：,具有专一性（,特异性,）,表现在两方面：,(1)识别双链DNA中,特定,核苷酸序列,(2),从,特定,部位的两个核苷酸之间切开,3、作用：,特定部位的两个核苷酸之间的,磷酸二酯键断开,4、结果：,产生黏性末端或平末端,6,7,Sma,平末端平末端,8,EcoR,黏性末端,黏性末端,9,黏性末端和平末端,10,限制酶所识别的序列有什么特点,限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是,反向对称重复排列,的。,11,（二）“分子缝合针”DNA连接酶,1、种类：,Ecoli DNA连接酶,T4 DNA连接酶,2、作用：,12,可把黏性末端之间的,缝隙“缝合”,起来，,Ecoli DNA连接酶或T,4,DNA连接酶,即,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的,磷酸二酯键,13,DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？,T,4,DNA连接酶,还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低,14,DNA连接酶,DNA聚合酶,连接DNA链,双链,单链,连接部位,在两DNA片段之间形成,磷酸二酯键,将单个核苷酸加到已存在的核酸片段上，形成,磷酸二酯键,15,常用的运载体：,质粒、,噬菌体和动、,植物病毒等,（三）“分子运输车”运载体,16,载体必须具备的条件,如果载体对受体细胞有害将怎样？,目的基因是否进入受体细胞，没有标记基因我们能否鉴定？,假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？,作为载体没有切割位点将怎样？,17,作为载体的必要条件,1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；,2、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；,3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等）,4、对受体细胞无害,18,（三）“分子运输车”运载体,2、种类：,1、需要具备的条件：,（1）在受体细胞中稳定存在，能自我复制,（2）有一个或多个切割位点,（3）有标记基因,（4）对受体细胞无害,质粒、噬菌体、动植物病毒等,19,以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，试分析：,GC AATTC GC CTTAA,CG G CG G,(1)其中和,是由一种限制酶切割形成的,末端，,（2）,和,是由另一种限制酶切割形成的,末端，,反馈练习：,20,在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（）,同种限制酶,B.,两种限制酶,同种连接酶,D.,两种连接酶,基因工程常用的受体细胞有（）,(1),大肠杆菌 （,2,）枯草杆菌,（,3,）支原体 （,4,）动植物细胞,A.,（,3,）（,4,）,B.,（,1,）（,2,）（,4,）,C.,（,2,）（,3,）（,4,）,D.,（,1,）（,2,）（,3,）,21,不属于质粒被选为基因运载体的理由是,A、能复制 (）,B、有多个限制酶切点,C、具有标记基因,D、它是环状DNA,D,22,1、下列不适合用于基因工程的运载体,是（）,A、质粒 B、噬菌体,C、细菌 D、病毒,选我,C,2、下列说法正确的是,：（）,A、限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列,B、质粒是基因工程中唯一的运载体,C、重组技术所用的工具酶是限制酶、,连接酶、运载体,D、利用运载体在宿主细胞内对目的基因,进行大量复制的过程可称为“克隆”,选我,D,审题,23,3、下列黏性末端属于同种内切酶切割而成的,是（）,A、B、C、D、,T C G,A G C T T A A,A G,G T T C C A,A G C T T C,A G,A A T T C,G,4、下列哪一种酶是基因工程的工具酶（）,A、DNA连接酶 B、DNA酶,C、RNA酶 D、运载体,选我,A,选我,A,记住了,24,25,基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （）,A、人工合成目的基因,B、目的基因与运载体结合,C、将目的基因导入受体细胞,D、目的基因的检测和表达,C,26,