QB∕T 5601-2021 口腔清洁护理用品 牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的测定[轻工].pdf

ICS 71.100.40 CCS Y43 D 中华人民共和国轻工行业标准QB/T 5601-2021 口腔清洁护理用品牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的测定Oral care and cleansing products -Determination of the antibacterial activity 。fenzymes in toothpastes and oral rinses 2021-05-17发布2021-10-01实施中华人民共和国工业和信息化部发布QB厅5601一2021刚吕本文件按照GB厅1.1一2020(标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由中国轻工业联合会提出。本文件由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会(SACrrC492/SC 1)归口。本文件起草单位:江苏雪豹日化有限公司、黑龙江省轻工科学研究院、广州质量监督检测研究院、浙江方圆检测集团股份有眼公司。本文件主要起草人:陈新宇、徐志良、李鑫宇、刘文玉、谈红、税锢、张劲松、夏泽敏、杨铭。本文件为首次发布。QBrr 5601一2021口腔清洁护理用品牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的测定1 范围本文件描述了牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性测定的术语和定义、方法要点、试剂与标准物质、仪器与设备、测定步骤和结果表示。本文件适用于牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的定性测定。j主:本文件所指牙膏和口腔清洁护理液指以二氧化硅为基质或者以二氧化硅为主复配其他摩擦剂的牙膏和口腔清洁护理液产品，不包括以月桂醇硫酸醋纳为发泡剂的产品。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件:不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单适用于本文件。GB!f 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB!f 35919 口腔清洁护理用品分类和术语3 术语和定义GB!f 35919界定的术语和定义适用于本文件。4 方法要点利用溶菌酶专一性水解敏感菌(溶壁微球菌)细胞壁的特点，以活性染料共价标记的细菌细胞壁为底物，用琼脂扩散法进行鉴定。当细菌细胞壁完整性遭到破坏时，琼脂板上会形成清晰的透明圈，从而定性鉴定在膏体及溶液中的溶菌酶活性的存在。5 试剂与标准物质5.1 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB!f6682规定的三级水。5.2 溶菌酶标准品:蛋清lysozyme，酶活力二三20000 U/mg, CAS号12650-88-305.3 冻干色源底物:按照附录A规定的方法制备。5.4 琼脂粉BR级生物试剂。5.5 氢氧化锅。5.6 磷酸二氢铀CNaH2P04.2血0)。5. 7 磷酸氢二纳CN皿HP04. 12H20 )。5. 8 0.1 mol/L磷酸盐缓冲液CpH6.5) : QBIT 5601-2021 一一溶液A(0.2 mollL磷酸氢二纳)称取71.46g磷酸氢二锅(5.7)，用水溶解并定容至1000mL; 一一熔液B(0.2 mollL磷酸二氢纳)称取31.21g磷酸二氢纳(5.6)，用水溶解并定容至1000mL; -J悔32mL溶液A与68mL榕液B混合，使用时用去离子水稀释1倍，即为0.1mollL pH 6.5磷酸盐缓冲液。5.9 1%冻干色源底物溶液:称取0.1g冻干色源底物，加入10mL磷酸盐缓冲液(5.8)中，充分混匀后各用。5.10 2%琼脂溶液:称取2g琼脂粉于250mL三角烧瓶中，加入100mL水，备用。6 仪器与设备6. 1 高速离心机:转速不小于8000r/mino 6.2 电子天平:精度0.001g。6.3 恒温培养箱。6.4 灭菌锅。6.5 电炉。6.6 冰箱。6. 7超净工作台。6.8 微量移液器两支20L200L、100L1000L。6.9 移液枪头20L200L移液器配套枪头、100L1000L移液器配套枪头。6.10 打孔器:10mm。6. 11 培养皿z90mm。6.12 离心管5mL、50mL。6.13 三角烧瓶250mL。6. 14容量瓶1000mL。6. 15 精密试纸pH6.4，.，8.0。7 测定步骤7. 1 灭菌将培养皿、打孔器、离心管、移液枪头分别用牛皮纸包好放入灭菌锅;将配制好的2%琼脂溶液，0.1 mollL pH 6.5磷酸盐缓冲液放入灭菌锅，1210C，灭菌20min。7. 2 色源底物琼脂平板的制备取2%的琼脂溶液100mL，灭菌处理后室温放置，冷却至约650C，加入1%冻干色源底物溶液10mL，混匀后小心倒入培养皿内(90mm，每块平板约25mL30 mL) ，水平放置。待凝固后，置于洁净工作台内约2h，或置于40C冰箱存放至次日使用。使用前用无菌打孔器在平板上打出所需的孔洞(孔洞的间距不小于10mm) ，弃去孔中琼脂块，形成完整空穴备用。2 7. 3 样品的前处理7. 3. 1 称取含酶产品1g于需轻缓摇晃至完全溶解。7.3.2 水剂样品用7.3.3 根据试样中7.4 加样7.5 恒温培养8 结果表示QB厅5601-2021 ，室温下放置过夜，期间(5.肘，混匀后备用。用标准酶溶液作)作为空白对照。3 QBrr 5601一2021A.1 试剂A. 1. 1 藤黄微球A. 1.2 活性A. 1.3 磷酸盐A.1.4 牛肉膏:A. 1.5 膜蛋白陈:A.1.6 氯化锅。A. 1.7 氢氧化铀。A. 2 试验步骤A. 2.1肉a.- . 附录A(规范性冻干色源底物的制备牛肉膏0.5%，蛋白陈1.0%，氯化铀0.5%，用0.1N氢氧化制调mm。4 21 oc，灭菌20附录B(资料性标准酶溶液色源底物琼脂平板中的透明圈图例标引序号说明:1一-0.02%标准溶菌酶溶液:2一一0.01%标准溶菌酶溶液:3一-0.005%标准溶菌酶溶液;4一-0.001%标准溶菌酶溶液:5一一0.0001%标准溶菌酶溶液;-PBS (O.lmo1JL磷酸盐缓冲液)。图B.1标准酶溶液色源底物琼脂平板中的透明圈QB厅5601一20215 FNON-FOAUmH筒。中华人民共和国轻工行业标准口腔清洁护理用晶牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的测定QBrr 5601-2021 * 中国轻工业出版社出版发行地址:北京东长安街6号邮政编码100740发行电话[phone] 网址http:/Emai1: 轻工业标准化编辑出版委员会编辑地址t北京西城区月坛北小街6号院邮政编码100037电话[phone] * 版权所有侵权必究书号1550195682 定价22.00元印数1-200册