农药残留检测技术.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,农药残留检测技术,山 东 省 农 药 检 定 所,农业部农药质量监督检查测试中心（济南）,农药残留检测技术,NY/T 761-及质量控制,仪器维护,气相色谱维护,液相色谱维护,NY/T 761-措施的特点,长处：与GB 5009.20和德国S19措施相比，该措施明显简便，环节少，操作简朴，明显缩短了前处理的时间，明显提高农药残留检测效率。,缺陷：“双刃剑”其长处也正体现了局限性之处，由于前处理过程简朴，样品没有通过充足的净化，尤其是有机磷检测,分取吹干后直接定容上机检测,轻易污染衬管，给仪器维护提出了更高的规定。,样品前处理,农药残留检测中样品前处理技术是检测过程中耗时最长,最轻易出现误差的环节，对细节规定很高。重视对样品前处理技术的研究能提高农药残留检测的效率和精确率。,NY/T 761-前处理环节,称量,样品称量时应注意有代表性，尽量使用较大的称量勺，减少样品间的差异。,称量时样品应注意不要过度解冻。,样品称量时应充足搅匀。,称量时应尽量使用开口比较大的容器，如烧杯，防止样品粘到容器壁上。,提取,根据分析的对象来说，一般有水样、气样、土壤、作物等之分，它们的提取也不完全相似。提取措施重要有匀浆提取法、振荡提取法、超声提取法等等。,残留分析试样中农药含量甚微，提取效率的高下直接影响成果的精确性。故应根据试样类型、农药种类、试样中脂肪、水分含量和最终测定措施等来选择提取措施和提取溶剂，以便尽量完全地提取出试样中所含的农药，而尽量少地提取出干扰物质。,提取,我们对同同样品同步采用匀浆、振荡和超声措施三种不一样提取措施进行了添加回收试验，成果表明不一样的提取措施回收率成果没有明显差异。提取完毕后要注意对匀浆机的清洗次序（先丙酮后再用水）。,我们目前重要针对的是蔬菜和水果，NY/T 761-采用的是组织捣碎法：又称匀浆提取法，长处是简便、迅速、效果好。,提取,深绿色样品：如菠菜、菜心、青花菜和青椒等，可在均质前加石墨化炭黑先除去大部分色素，再提取。,汁液样品：如橙汁、桃汁、菠菜汁等，此类样品含水多、显酸性，在称样后要先调整酸度至近中性，再提取。,含水少的干样：如稻米、大豆、花生、茶叶等，可在均质前先加超纯水湿润膨胀样品，然后提取。,提取剂,1惰性,所选用的溶剂不能与待测物有化学反应。同步也不能对测定期采用的仪器有影响。如采用电子捕捉检测器进行测定期，其前处理包括提取、净化等环节尽量防止使用含氯试剂。,2溶剂的纯度,农药残留分析中所使用的溶剂是有特殊规定的，一般纯度到达在气相色谱的电子捕捉检测器上不具有杂峰（杂质一般在109克如下）。,提取剂,目前国内试剂的纯度达不到规定，使用进口试剂价格较贵，可对国产试剂进行净化处理。,正己烷：将市售试剂在氢氧化钠存在下回流20min，再进行重蒸，一般还规定去掉10前馏分和10最终馏分。正己烷也可以用6090石油醚替代，同上处理后，搜集6075馏分。,丙酮：加高锰酸钾回流到紫色不褪，再用碳酸钾干燥，过滤，重蒸搜集56馏分。,提取剂,乙腈：4L乙腈中加入1mL磷酸、30g五氧化二磷，进行蒸馏，搜集81 82馏分。,乙酸乙酯：1L乙酸乙酯，加入100mL乙酸酐和10滴硫酸，加热回流4h。蒸出后，再用碳酸钾干燥，过滤，再蒸馏，搜集77馏分。,提取剂,通过以上处理的溶剂，有时还不符合规定，再可以用高活性的中性氧化铝柱层析进行提纯。,最终用气相色谱仪的电子捕捉检测器对溶剂作一次检查。取溶剂300mL500mL，浓缩到3mL5mL，取2L微升进入色谱柱，以不出现杂峰为合格。,提取过程中注意事项,样本在提取过程中，应保证样品提取时间、提取过程与质控样品尽量相似，使质控更清晰的反应前处理操作的精确性。,某些样品由于含水量大（如番茄），冷冻样会在表面上有一层冰层，一般状况下应对这样的样品重新用食品料理机打碎，然后进行提取。,提取过程中注意事项,残留分析试样中农药含量甚微，提取效率的高下直接影响成果的精确性。选择合适的固液比直接影响提取效率。由于多残留检测措施考虑的是多组分的同步提取，所规定的固液比对某种组分就不一定合适，假如只检测某些组分，应通过试验确定合适的固液比。,提取过程中，应对农药检测有关的化学性质（挥发性、极性、PKa）加以关注。,盐析,盐析过程中振荡频率和振幅应一致，保证样品的平行性。,盐析过程中，要充足摇匀后再静置。假如摇匀过程中发生乳化现象，则长时间静置或者加少许蒸馏水，直到分层清晰。,静止时间应足够，一般不应不不小于0.5小时。在静止过程中，应不时轻摇容器，使器壁上的水珠下落。,浓缩,旋转蒸发器,其特点是可以边减压边旋转，故温度变化不大时，热量传递较快，使蒸馏能快而平稳地进行，而不发生暴沸；在使用中还可根据浓缩液体积，更换多种容量（10毫升l升）的烧瓶。旋转蒸发器的特点是浓缩速度快，且回收率高。,气流吹蒸浓缩装置,运用空气或氮气流吹带出溶剂的浓缩措施，合用于体积小、易挥发的提取液，但对于蒸汽压较高的农药就比较轻易损失。,浓缩注意事项,使用旋转蒸发器时，应注意水浴温度不适宜过高，一般不超过40，待浓缩的溶剂多数状况是二氯甲烷。有时也用丙酮或甲醇，但水浴温度要合适提高。在浓缩过程中，要注意不能蒸干。,使用旋转蒸发器时，应尽量选择冷却循环系统，冷却温度控制在5 如下，以保证回收率。,浓缩注意事项,使用氮吹浓缩时，加热温度不适宜过高，一般控制在80 如下。氮气流量不能过大，不能将样品吹干，在近干状态下取离水浴锅，自然晾干，若一定要干涸时，则操作必须细心，可以用橡皮球慢慢吹入干燥空气。,若易氧化的样品，还必须使用氮气，否则会导致某些农药回收率偏低。,氮吹时，氮吹管不能离液面太近，更换样品后一定要对针头进行清洗，防止污染。,浓缩注意事项,浓缩过程是样品比较轻易损失的环节，因而为了考察样品的浓缩过程，也可以单独进行原则农药的浓缩回收率试验，一般应在90以上为宜。,对于要浓缩净化后的溶液必须愈加警惕，由于提取物中油脂等杂质已经很少，必要时可以加入几微升不干扰分析的抑蒸剂（keeper），如乙二醇、硬酯酸等，以保证农药在蒸干时防止遭到损失。（例如甲拌磷假如吹的太干，其回收率就会偏低，一定要氮吹近干，或加入几微升不干扰分析的抑蒸剂，而一般用旋转蒸发仪进行浓缩就不会出现这个问题。）,净化,使用有机溶剂提取样本中的农药时，样本中的油脂、蜡质、蛋白质、叶绿素及其他色素、胺类、酚类、有机酸类、糖类等会同农药一起被提取出来，提取液中既有农药又有许多干扰物质，这些物质亦称共提物，会严重干扰残留量的测定。故必须将农药与上述杂质进行分离，然后才能对痕量农药进行分析测定。这一操作环节就是所谓净化。,净化,净化的规定与措施在很大程度上取决于农药和样本的性质、最终检测措施、对分析时间和对分析成果精确度的规定。,如采用专一性强的火焰光度检测器测定有机磷或有机硫农药时，不需复杂的净化环节。,使用抗干扰能力差的电子捕捉检测器测定有机氯或菊酯类农药和使用氮磷检测器时，对净化规定必须严格，否则杂质会影响测定成果，还也许污染检测器。,农残分析中常用的净化措施有：液-液分派法、柱层析法、固相萃取法、吹扫蒸馏法、磺化法、凝结剂沉淀法和薄层色谱法等。,GPC,样品净化系统,从样品中除去,大分子物质,提高分析成果,的精确度,延长进样口和分,析柱的使用寿命,固相萃取四个环节,1、柱子预处理（固定相活化）,活化的目的是发明一种与样品溶剂相容的环境并清除柱内所有杂质。一般需要两种溶剂来完毕上述任务，第一种溶剂（初溶剂）用于净化固定相，另一种溶剂（终溶剂）用于建立一种合适的固定相环境使样品分析物得到合适的保留。,固相萃取四个环节,注意：终溶剂不应强于样品溶剂，若使用太强的溶剂，将减少回收率。此外，在活化的过程中和结束时，固定相都不能抽干，由于这将导致填料床出现裂缝，从而得到低的回收率和重现性，样品也没得到应有的净化。假如在活化环节中出现干裂，所有活化环节都得反复。,固相萃取四个环节,2、上样,上样环节指样品加入到固相萃取柱并迫使样品溶剂通过固定相的过程，这时分析物和一批样品干扰物保留在固定相上。,为了保留分析物，溶解样品的溶剂必须较弱。假如溶剂太强，分析物将不被保留，成果回收率将会很低，这一现象叫穿漏。尽量使用最弱的样品溶剂，可以使溶质得到最强的保留或者说最窄的谱带。,固相萃取四个环节,3、淋洗,分析物得到保留后，一般需要淋洗固定相以洗掉不需要的样品组分，淋洗溶剂的洗脱强度是略强于或等于上样溶剂。淋洗溶剂必须尽量地弱以洗调尽量多的干扰组分，但不能强到可以洗脱任何一种分析物的程度。,注意：淋洗时不适宜使用太强溶剂，否则会将强保留杂质洗下来。使用太弱溶剂，会使淋洗体积加大。可改为强、弱溶剂混用；但混用或前后使用的溶剂必须互溶。,固相萃取四个环节,4、洗脱,淋洗过后，将分析物从固定相上洗脱。溶剂必须进行认真选择，溶剂太强，某些更强保留的不必要组分将被洗出来；溶剂太弱就需要更多的洗脱液来洗出分析物，这样固相萃取柱的浓缩功能就会减弱。,不一样的填料的固相萃取柱,固相萃取柱净化应用,一般菜样：如白菜、甘蓝、黄瓜、萝卜等，可根据需要选用 C18柱、Florisil柱、NH2柱等净化。,深色样品：如菠菜、菜心、青椒和胡萝卜，含色素多，可用石墨碳黑柱清除色素。,茶叶：含咖啡因多，用Si小柱净化可很好地清除。,大豆、花生：含油脂多，净化时用SAX、PSA小柱去脂。,高糖高盐样品：如葡萄干、梅脯、腌黄瓜等可采用硅藻土柱助滤。,QuEChERS 措施,环节可以简朴归纳为:,(1)样品粉碎;,(2)单一溶剂乙腈提取分离;,(3)加入MgSO4 等盐类除水;,(4)加入乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)等吸附剂除杂;,(5)上清液进行GC-MS、LC-MS 检测。,长处：迅速、简便、廉价、合用于大多数农药，,缺陷：干扰大，不合用于气相色谱仪、液相色谱措施。,原则溶液的配制,原则溶液的管理要做到规范和可追溯。要建立原则物质登记台账和原则物质配置和领用台账，每个进样标样都应当可以追溯到所购置原则样品的原则证书。,原则溶液在配置时应逐层稀释，减少反复解冻，防止农药降解对检测工作导致影响。,标样配制后应放入棕色贮液瓶中保留，不可使用容量瓶保留。,原则溶液的配制,贮液瓶标签填写要规范，应包括农药名称、浓度、溶剂名称、配置人、配置时间、有效期等信息。,由于不一样样品存在一定的基质增强效应，因此用试剂配制原则溶液测定样品往往会导致检测成果偏高的现象，采用样品空白提取液配制原则溶液，可以有效弥补基质增强效应带来的定量偏差。,原则溶液的配制,辣椒（添加浓度为,0.1mg/L,）回收率,农药名称 甲胺磷 甲拌磷 氧化乐果 乐果 毒死蜱 甲基对硫磷 对硫磷,样品本底,(vsec)-40074 -,0.1,回收峰面积,(,v,sec)670189 644612 495706 630100 24476 695512 682359,0.1,标全峰面积,(,v,sec)496047 550312 228716 537512 500940511892545774,0.2,外标峰面积,(,v,sec)1583154 502960 539918 1061738 10980131007002 1094384,0.2,基质配标峰面积,(,v,sec)1671548 1334224 1106212 1252386 11301231205041 1311142,回收,%,（用,0.1,标全算）,135.1,117.1,199.2,117.2 124.6,135.8,125,回收,%,（用,0.2,外标算）,84.7,256.3 168.,118.7 113.7,138.1,124.7,回收,%,（,0.2,基质配标算）,80.2 96.6 82.4 100.6 110.5115.4 104.1,原则溶液的贮存,农药原则溶液。500 mg/L1000 mg/L原则储备液，保留在-18 左右冰箱中，有效期6个月；,1 mg/L10 mg/L或合适浓度的原则工作溶液，保留在0 5 左右冰箱中，有效期为1个月。,0.5 mg/L1 mg/L或合适浓度的原则工作溶液，保留在0 5 左右冰箱中，有效期2周3周,检测过程的质量控制,样品测定,首先做试剂空白，空白值过高应检查试剂与否有问题或器皿被污染。,每批次检测时应通过加标回收率或测定原则物质进行质量控制。农药残留检测每测定10个样品进一种原则溶液，每测定30个样品做一种添加回收率。如发现回收率超过70%130%的范围时，该批次样品要重做。,检测过程的质量控制,质控样加标时，尽量使用混标进行添加，防止添加溶剂量太大对成果导致影响。,如检测的农药种类较多时，不必添加所有农药，可以选择几种有代表性的农药进行质控，可根据农药的理化性质进行选择，例如乐果、甲拌磷等属于水溶性农药，六六六、滴滴涕等属于脂溶性农药，甲胺磷、氧乐果等属于易吸附农药,选择进行质控的基质要有代表性，不能只是选用黄瓜、菜豆等干扰较少的基质作为质控样。,检测过程的质量控制,农药残留检测对超标或靠近限量值的样品，应重新称样进行测定，并使用极性不一样的柱子或不一样检测器进行确认。经复测后仍超标的样品，用气质或液质联用仪进行定性检测。,原则溶液应现用现配，放置一段时间后浓度有所变化，每次再用时应与此前的图谱进行比较，检查峰面积与否有较大的变化。,原则溶液进样浓度不适宜过大，较低的浓度可以很好地监控仪器、柱子的污染状况，可以有效的防止仪器污染给检测成果带来的影响。,原始记录的填写,原始记录的填写要注意：,应及时记录，不能补记；,所填信息要全，要可追溯；,填写有效数字的数位要对的；,要使用国家规定的法定计量单位。,成果计算,成果计算时应注意：,有效数字的计算应符合有效数字运算的规定；,数值修约应符合GB/T 8170-的规定；,农药残留和污染物检测，计算成果一般保留2位有效数字（比限量值多1位）。,谢谢！,