肠杆菌科鉴定全1教学提纲.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,肠杆菌科鉴定全1,二.临床意义,有些菌属对人类有明显的致病作用,1、鼠疫耶耳森菌-引起烈性传染病,2、埃希菌属,、,志贺菌属,、,沙门菌属,、,耶耳森菌属可导致腹泻,、,食物中毒.伤寒,有些菌属与医院感染有关,1、肺炎,2、脑膜炎,3、菌血症,4、各种部位的感染,多数菌属是肠道正常菌群，也是条件致病菌,与人类感染有关的肠杆菌科细菌有31个菌属，其中临床标本中常见的菌属有15种,克雷伯菌属 爱德华菌属 邻单胞菌属,变形杆菌属 普罗威登斯菌属 沙门菌属,耶尔森菌属 志贺菌属 沙雷菌属,肠杆菌属 埃希菌属 哈夫尼亚菌属,枸橼酸杆菌属 摩根菌属 多源菌属,三.微生物特性,1.G,-,杆菌,，,多数有鞭毛,、,菌毛,2.发酵葡萄糖,，,兼性厌氧,3.氧化酶阴性,4.,还原硝酸盐为亚硝酸盐,5.触酶（）,6.,营养条件不高,，,拉丝试验,涂片：G,-,b,氧化酶试验,非发酵菌、弧菌,+,肠杆菌科细菌、不动、嗜麦芽菌,双糖试验,F,O,不动、嗜麦芽,肠杆菌科细菌,苯丙,葡盐,枸,硝,赖,鸟,氨对,山,肌,侧,吲哚,硝酸盐还原,+,嗜麦芽,不动,四、鉴定流程图,种属鉴定,科的特征,硝酸盐还原,葡萄糖发酵,氧化酶,触酶,属间鉴定特征,属内种间鉴定特征,血清学分型,报告细菌种名,报告细菌血清型,概述,分子生物学鉴定,五、肠杆菌科的初步分群,可用苯丙氨酸和葡萄糖酸盐试验将肠杆菌科分为四大组,菌 属 名 苯丙氨酸 葡萄糖酸盐,变形杆菌属 +,普鲁维登斯菌属 +,摩根氏菌属 +,塔特姆菌属 +,克雷伯菌属 +,肠杆菌属 +,多源菌属 +,沙雷菌属 +,西地西菌属 +,哈夫尼亚菌 +,埃希菌属 ,志贺菌属 ,沙门菌属 ,枸橼酸杆菌属 ,爱德华菌属 ,耶尔森菌属 ,克卢瓦菌属,兰恩氏菌属,+,六.苯丙氨酸阳性组的各属鉴别,试 验 变形杆菌属 普鲁维登菌属 摩根氏菌属 塔特姆属,H,2,S +-,枸橼酸盐 +/-+-,靛基质,+/-+-,1.,变形杆菌属内各种的鉴别,试 验 普通变形杆菌 奇异变形杆菌 潘氏变形杆菌 产粘液变形杆菌,靛基质,+-,鸟基酸,-+-,木糖 +-,2.,普鲁维登菌属各种的鉴别,试 验 产碱 斯图 雷极,普鲁维登斯菌 普鲁维登斯菌 普鲁维登斯菌,侧金盏花醇 +-+,甘露醇 +-,生化反应,雷氏斯氏,产碱拉氏海氏,吲哚产生,+-,肌醇,+-V,海藻糖,-+-,戊五醇,+-+-+,3.,摩根菌属种的鉴定,试验,摩根,摩根菌 摩根菌(生物1群),赖氨酸,-+,动力 +-,4.,塔特姆菌属的鉴定,苯丙氨酸 H,2,S 枸橼酸盐 鸟氨酸,靛基质,+-,+,_,+,+,+,+,+,+,苯丙氨酸+,H,2,S,枸橼酸盐,靛基质,鸟氨酸,靛基质,侧金盏花醇,甘露醇,普通变形杆菌,奇异变形杆菌,潘氏变形杆菌,产碱普鲁维登斯菌,雷极普鲁维登斯菌,斯图普鲁维登斯菌,摩 根 菌,塔特姆菌,.,苯丙氨酸阳性组菌属鉴别索引图,5,-,七.葡萄糖酸盐阳性组各属鉴别,试 验,克雷伯菌属,沙雷菌属,肠杆菌属,哈夫尼亚菌属,多源菌属,动 力,-,+,+,+,+,DNA,酶,-,+,-,-,-,鸟氨酸,-,+,+,+,-,枸橼酸盐,+,+,+,-,+,原克雷伯菌属（,klebsiella,）有5个种，2个亚种,肺炎克雷伯菌（,K.pneumoniae,）,产酸克雷伯菌（,K.oxytoca,）,解鸟氨酸克雷伯菌（,K.ornithinolytica,）,植生克雷伯菌（,K.planticola,）,土生克雷伯菌（,K.terrigena,）,分 类,克雷伯菌属,臭鼻亚种,鼻硬结亚种,解鸟氨酸柔特勒菌（,R.ornithinolytica,）,植生柔特勒菌（,R.planticola,）,土生柔特勒菌（,R.terrigena,）,柔特勒菌属,(Raoultella),This proposal is base on 16S rDNA and rpoB gene sequencing and carbon assimilation studies.,培养特征,血琼脂上菌落较大，呈黏液状，以接种环挑取时易拉成丝,在肠道培养基上呈发酵乳糖小菌落,在液体培养基内生长混浊、浓厚、可见菌膜，管底有粘性沉淀物,K.pneumoniae,菌落（血平板）,克雷伯菌属,1.克雷伯菌属各种的鉴别,试 验,产酸克雷伯菌,肺炎克雷伯菌,臭鼻克雷伯菌,鼻硬结克雷伯菌,靛基质,+,甲基红,+,+,丙二酸盐,+,+,+,克雷伯菌和柔特勒菌种间鉴定表,生化反应,肺炎克雷伯菌,产酸克雷伯菌,解鸟氨酸柔特勒菌,植生柔特勒菌,肺炎克雷伯菌臭鼻亚种,肺炎克雷伯菌鼻硬结亚种,土生柔特勒菌,脲酶,+,+,+,+,-,-,-,吲哚产生,-,+,+,-,-,(-),-,鸟氨酸,-,-,+,-,-,-,(-),甲基红,-,(-),+,+,+,+,V,V-P,+,+,V,+,-,-,+,丙二酸盐,+,+,+,+,-,+,+,枸橼酸盐,+,+,+,+,V,-,V,克雷伯菌属,S.marcescens,菌落特征（普通营养平板）,沙雷菌属,S.marcescens,菌落特征（普通营养平板）,沙雷菌属,2.,沙雷菌属各种的鉴别,试 验,粘质沙雷菌,液化沙雷菌,红色沙雷菌,鸟氨酸,+,+,阿拉伯糖,+,+,分类：现有13个种2个生物型,原有7个种2个生物型,产气肠杆菌(,E.aerogenes,),阴沟肠杆菌(,E.cloacae,),杰高维肠杆菌,坂崎肠杆菌,泰洛肠杆菌,中间肠杆菌,聚团肠杆菌,河生肠杆菌生物群1,河生肠杆菌生物群2,后增加7个菌,阿氏肠杆菌,何氏肠杆菌,溶解肠杆菌,超压肠杆菌,克沃尼肠杆菌,考伯肠杆菌,帕瑞勒肠杆菌,肠杆菌属,3.,肠杆菌属各种的鉴别,试 验,坂崎杆菌,阴沟杆菌,产气杆菌,格高菲杆菌,赖氨酸,+,+,山梨醇,+,+,本菌属的细菌生化反应不典型，常用的商品化鉴定系统,很难达到90以上的鉴定正确率,肠杆菌属种间鉴定表,生化反应,产气,杰高维,帕瑞勒,聚团,河生，生物群1,癌生,阪崎,何氏,阴沟,克沃尼,中间,考伯,阿氏,河生，生物群2,溶解,超压,赖氨酸脱羧酶,+,+,+,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,山梨醇,+,-,-,V,-,-,-,-,+,+,+,+,+,+,+,+,VP试验,+,+,V,V,+,+,+,+,+,+,+,-,-,+,+,+,七叶苷,+,+,+,V,+,+,+,-,V,+,+,V,+,+,+,+,蜜二糖,+,+,V,V,+,-,+,-,+,+,+,+,-,+,+,+,蔗糖,+,+,+,V,+,-,+,+,+,+,V,+,+,-,+,-,精氨酸脱氢酶,-,-,-,-,-,+,+,V,+,-,-,+,V,V,+,-,鸟氨酸脱羧酶,+,+,+,-,V,+,+,+,+,-,V,+,+,+,+,+,核糖醇,+,-,-,-,-,-,-,-,V,-,-,-,-,-,-,-,鼠李糖,+,+,+,V,+,+,+,+,+,+,+,+,-,+,+,+,-甲基-D-葡萄糖苷,+,-,-,-,V,-,+,V,V,-,+,+,+,+,+,+,黄色素,-,-,-,V,-,-,+,-,-,V,-,-,-,-,-,-,肠杆菌属,4.哈夫尼亚菌属鉴定,葡萄糖酸盐 枸橼酸盐 棉子 糖,+,5.,多源菌属种的鉴定,试验 聚团多源菌 弥散多源菌,赖 氨 酸 -,鸟 氨 酸 -,水扬苷 +-,5.葡萄糖酸盐阳性菌属鉴别双岐索引图,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,-,+,+,+,葡萄糖酸盐+,侧金盏花醇,赖氨酸,鸟氨酸,赖氨酸,鸟氨酸,靛基质,枸橼酸盐,山梨醇,丙二酸盐,阴沟肠杆菌,产酸克雷伯菌,山梨醇,肺炎克雷伯菌,产气肠杆菌,红色沙雷菌,多源肠杆菌,鼻硬结克雷伯菌,臭鼻克雷伯菌,哈夫尼亚菌,山梨醇,格高菲肠杆菌,阿拉伯糖,贩崎肠杆菌,阴沟肠杆菌,粘质沙雷菌,液化沙雷菌,八.苯丙氨酸葡萄糖酸盐阴性组的各属鉴别,试 验,沙门菌属,志贺菌属,埃希菌属,枸橼酸杆菌属,耶尔森菌属,爱德华菌属,甘露醇,+,+,+,+,+,ONPG,+,+,+,动 力,+,+,+,+,+,枸橼酸盐,+/,+,赖氨酸,+,+,+,枸橼酸杆菌属,分 类,枸橼酸杆菌属（,Citrobacter,）包括11个种,弗劳地枸橼酸杆菌(,C.freundii,),差异枸橼酸杆菌（,C.diversus,）,库斯枸橼酸杆菌,无丙二酸盐枸橼酸杆菌(,C.amalonaticus,),（,C.koseri,）,布拉吉枸橼酸杆菌 （,C.braakii,）,雷登枸橼酸杆菌 （,C.rodentium,）,塞拉克枸橼酸杆菌 （,C.sedlakii,）,魏克曼枸橼酸杆菌 （,C.werkmanii,）,扬哥枸橼酸杆菌 （,C.youngae,）,吉乐枸橼酸杆菌 （,C.gillenii,）,穆利枸橼酸杆菌 （,C.murliniae,）,法玛丽枸橼酸杆菌 （,C.farmeri,）,1.,枸橼酸杆菌属各种的鉴别,试 验,费劳地枸橼酸杆菌,异型枸橼酸杆菌,丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌,鸟氨酸,+,+,侧金盏花醇,+,注意：很多鉴定系统的数据库中不包括枸橼酸杆菌属新种名称和分类资料,枸橼酸杆菌种间鉴定表,生化反应,弗劳地,穆利,杨格,吉乐,魏克曼,无丙二酸盐,法玛丽,布拉吉,库斯,赛拉克,雷登,鸟氨酸脱羧酶,-,-,-,-,-,+,+,+,+,+,+,丙二酸盐利用,-,-,-,+,+,-,-,-,+,+,+,尿素水解,V,V,+,-,+,+,V,V,V,+,+,卫矛醇发酵,-,+,+,-,-,-,-,V,V,+,-,KCN生长,+,+,+,+,+,+,+,+,-,+,-,蔗糖发酵,+,V,-,V,-,-,+,-,V,-,-,D阿拉伯醇发酵,-,-,-,-,-,-,-,-,+,-,-,蜜二糖发酵,+,V,-,V,-,-,+,+,-,+,-,枸橼酸杆菌属,2.,爱德华菌属各种的鉴别,试 验,迟缓爱德华菌,保科爱德华菌,鲶鱼爱德华菌,H,2,S,+,甲基红,+,+,3.,埃希菌属种的鉴别,试 验,大肠埃希菌,大肠埃希菌（不活泼株）,葡萄糖产气,+,动 力,+,致泻性,E.coli,分为5类：,肠毒素型大肠埃希菌(ETEC),肠致病性大肠埃希菌(EPEC),肠侵袭型大肠埃希菌(EIEC),肠出血型大肠埃希菌(EHEC),肠凝聚型大肠埃希菌(EAggEC),埃希菌属,临床意义,(Clinical Significance),E.coli,以肠道外感染多见，主要有泌尿系统感染,E.coli中的致病菌株能引起各种类型的腹泻，根据其不同的血清型别、毒力和临床症状,鉴定要点,不活跃大肠埃希菌与志贺菌易混淆，需相互鉴别,醋酸钠,葡萄糖,铵利用,粘质酸盐产酸试验,大肠埃希菌,志贺菌属,埃希菌属,大肠埃希菌,在中国兰平板上为蓝色菌落,大肠埃希菌,在伊红美蓝平板上为紫黑色菌落,大肠埃希菌,在麦康凯和SS平板上为红色菌落,培养特征,兼性厌氧菌,营养要求不高,菌落呈中等大小、无色、半透明、光滑,在SS平板上，因产生H,2,S可形成黑色中心的菌落,伤寒沙门菌菌落形态（SS平板）,四,沙门菌属,常用血清：O多价血清（含AF群）,O、H、Vi抗原因子血清,方法,：,从临床标本中分离到菌株经纯培养后，符合沙门 菌属生物学特性，则,采用A-F多价血清初步确定是否为,Salmonella,1.如阳性，即用O因子血清分群；再用第一相H因子血清定型，也可用第二相辅助定型,2.如阴性：,应考虑是否有Vi抗原?,血清学分型,加热或传代,去除Vi抗原,凝集：做O多价和单价凝集,不凝集：可能为AF以外,沙门菌属,如是双相菌，进一步用复合血清1、2、5检查第2相抗原。,群,菌 型,抗原,1,相,2,相,A,甲型副伤寒,1,2,12,a,B,乙型副伤寒,1,4,12,b,1.2,鼠伤寒,1,4,12,i,1.2,C1,丙型副伤寒,6,7(Vi),C,1.5,C1,猪霍乱,6,7,1.5,D,伤 寒,1,9(Vi),d,肠 炎,1,9,12,g,m,都柏林,1,9,12(Vi),g,p,E,火 鸡,3,10,e,h,1.w,山夫顿,3,15,e,h,1.b,F,河伯丁,1,3,19,g,t,兼性厌氧菌,营养要求不高,普通平板：中等大小、半透明、光滑,鉴别培养基：乳糖不发酵的菌落,培养特性,菌落形态（麦康凯平板）,志贺菌属,种属鉴定,菌属特征,发酵葡萄糖产酸不产气,赖氨酸（）,H,2,S（）,尿素（）,动力（）,志贺菌属,5.志贺菌属的鉴定,先用志贺多价血清与菌种凝集，如多价血清凝集为志贺菌，多价里不包含鲍氏C,16-20,再进一步用因子血清凝集而定群。,亚群和种,血 清 型,痢疾,A 110,福氏,B 1a,1b,2a,2b,3a,3b,4a,4b,5,6,鲍氏,C,1,C,15,宋氏,D,6.耶尔森菌属各种的鉴别,试验,鼠疫耶耳森菌,假结核耶耳森菌,小肠耶,耳森菌,弗氏耶耳森菌,中间耶耳森菌,鸟氨酸,-,-,+,+,+,鼠李糖,-,+,-,+,+,密二糖,-,+,-,-,+,7、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性组菌属鉴别 双歧索引图,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,苯丙氨酸、葡萄糖酸盐 -,甘露醇,ONPG,枸橼酸盐,动 力,H,2,S,侧金盏花醇,赖氨酸,沙门菌属,志贺菌属,迟缓爱德华菌,甲基红,异型枸橼酸杆菌,鸟氨酸,葡萄糖产气,耶尔森菌属,丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌,费劳地枸橼酸杆菌,大肠埃希菌,大肠埃希菌（不活泼株）,保科爱德华菌,鲶鱼爱德华菌,肠杆菌鉴定选用多少生化反应管为好,：苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、赖氨酸、鸟氨酸、氨基酸对照、枸橼酸盐、硝酸盐、侧金盏花醇、山梨醇、甘露醇、ONPG、靛基质、双糖（H,2,S）,九、兰恩氏菌属的鉴定,苯丙氨酸,葡萄糖酸盐,枸橼酸盐,靛基质,+,+,+,十.西地西菌属各种的鉴别,试验,戴氏西地西菌,拉氏西地西菌,奈氏西地西菌,鸟氨酸,+,-,-,山梨醇,-,-,+,十一.克卢瓦菌属各种的鉴别,试验,抗坏血酸克卢瓦菌,冷半月克卢瓦菌,赖氨酸,+,-,十二.API鉴定系统(20E,),菌液制成0.5麦氏浊度,加入20E板条,火一样的热情 浪一样的冲劲,十三肠杆菌科某些菌株的特殊性质,1.变形杆菌菌落呈迁延性生长,2.克雷伯菌自身菌落可拉出丝来,3.多源聚团菌在M-H平板上产生,黄色,4.沙雷菌M-H 平板上产生,铁锈红色,5.宋内志贺菌,无色,不透明菌落,6.菌落溶血的大肠杆菌,7.能产生H,2,S的菌株,变形杆菌,爱德华菌,伤寒沙门菌,费劳地枸橼酸杆菌,大肠杆菌,8.如是大肠杆菌,就应该是,赖氨酸,阳性,枸橼酸,阴性,靛基质,阳性,侧金花醇,阴性,9.如是二类菌,95%枸橼酸试验阳性,靛基质阴性,10.超广谱-内酰胺酶（ESBL,S,）,1983年世界首例报道，最初在肺炎克雷伯菌中检出。,长期大量使用第三代头孢菌素后产生此酶，由,-内酰胺酶突变（CTM，SHV）而来。,可通过质粒传导,，,主要由,大肠杆菌,和,克雷伯菌属,产生,ESBL的筛选与确证试验,、,邻单胞菌属(,Plesiomonas,)只有一个菌种，即类志贺邻单胞菌(,P.shigelloides,),该菌属以前归属于弧菌科，后根据基因特征认为与肠杆菌科细菌有更密切的关系，而归属于肠杆菌科,邻单胞菌属,分 类,与气单胞菌属、弧菌属鉴别,菌种,氧化酶,鸟氨酸脱羧酶,纤维,二糖,TCBS,生长,O/129,敏感试验,邻单胞菌,+,+,+,-,+,气单胞菌属,+,-,-,-,-,弧菌属,+,+,-,+,+,邻单胞菌属,同志们,好,十四.大肠杆菌的特点,1.侵袭力 K抗原,菌毛,2.肠毒素 LT 引起腹泻,ST,大肠杆菌的特点,引起腹泻的五类菌:,肠毒素型大肠埃希菌(ETEC)-,旅行者,腹泻,水样,便,肠致病性大肠埃希菌(EPEC)-,婴儿,腹泻,水泻,粘液,便,肠侵袭性型大肠埃希菌(EIEC)-类似菌痢,脓血粘液,便,肠出血型大肠埃希菌(EHEC)-水源食源性污染,血便,典型的是O157:H7,引起溶血性尿毒综合症,肠凝聚型大肠埃希菌(EaggEC)-慢性腹泻,水样,便,无LT和ST,大肠杆菌的特点,对多种糖,产酸产气,吲哚,、,甲基红、VP、枸橼酸盐(IMVC)+-,五种致病性大肠杆菌要用特异性血清凝集加以鉴别,十五.沙门菌属的特点,所有动物可分离到沙门菌,有2000多血清,可引起人类胃肠炎,、,败血症,、,伤寒,沙门菌属的特点,伤寒菌 口 小肠 淋巴结,血液 (肝脾骨髓),胆囊 肠腔Ag+Ab)排出体外,S-R变异:菌落光滑-粗糙,H-O变异:失去鞭毛,位相变异:H抗原双相-一相,V-W变异:失去Vi 抗原,沙门菌属的特点,沙门菌属的特点,伊红美兰(EMB)平板菌落无色不透明,麦康凯(MAC)平板-菌落无色透明,SS平板-菌落无色不透明,孔雀绿平板-强选择培养基,沙门菌属的特点,肥达反应,O,H,A,B,C,1:80,1:160,1:80,1:80,1:80,十六.志贺菌属的特点,急性菌痢-发烧,腹痛,脓血便,痢疾志贺菌引起的菌痢死亡率高达20%,慢性菌痢-反复发作二个月,志贺菌属与大肠埃希菌区别,:动力阴性,赖氨酸阴性,分解葡萄糖不分解乳糖,志贺菌属与伤寒沙门菌区别,:动力阴性H,2,S阴性,能于志贺菌因子血清凝集,志贺菌属的特点,本章重点,1.超广谱,-内酰胺酶（ESBLs）,2.能产生硫化氢的,菌有哪些,3.常引起人类腹泻的菌有哪些,4.疑为沙门菌,但其与OAF多价血清不凝如何处理,5.肠杆菌科致病力最强的是哪株菌,6.在致腹泻性肠道杆菌中，死亡率最高的是哪种菌,7.伤寒为什么在初愈时会出现肠穿孔大出血,8.G,-B,、OX,-,、苯丙,、葡盐,、侧盏金花醇、赖氨酸、鸟氨 酸、山梨醇、靛基质、药敏试验结果为：亚胺培南敏感、庆大霉素敏感、头孢唑啉耐药、氨曲南耐药、头孢他啶耐药、头孢他啶/帮酸敏感。请鉴定此菌。,THANK YOU!,常用血清：O多价血清（含AF群）,O、H、Vi抗原因子血清,方法：,从临床标本中分离到菌株经纯培养后，符合沙门 菌属生物学特性，则,采用A-F多价血清初步确定是否为,Salmonella,1.如阳性，即用O因子血清分群；再用第一相H因子血清定型，也可用第二相辅助定型,2.如阴性：,应考虑是否有Vi抗原?,血清学分型,加热或传代,去除Vi抗原,凝集：做O多价和单价凝集,不凝集：可能为AF以外,沙门菌属,此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢,