DB62∕T 4360-2021 实验用合作小型猪 病理学检查规范(甘肃省).pdf

ICS 65.020. 30 CCS B 41 0062 甘肃省由巳ETA 万标准D862/T 4360-2021 实验用合作小型猪病理学检查规范Specification of pathological examination for experimental Hezuo minipig 2021一 08 一04发布2021一09一04实施甘肃省市场监督管理局发布0862/T 4360-2021 目次前言. II I 范围. . . . . . . . . 1 2 规范性引用文件. . . . . . . . . . . 1 3 术语和定义. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 缩略语. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 检查规则. 2 6 检查程序.3 7 嗨床病理学检查.4 8 解剖病理学检查. 6 9 检查结论. 6 附录A(资料性)实验用合作小型猪组织病理学标本取材规范. 7 I 0862/T 4360-2021 目IJ=1 本文件按照GB/T11-2020 (标准化工作导则第l部分标准化文件的结构和起草规则的规定起草o本文件由甘肃省科学技术厅提出、归口并监督实施。本文件起草单位:中国农业科学院兰州兽医研究所、甘肃省畜牧兽医研究所。本文件主要起草人:景志忠、房永祥、陈国华、贾怀杰、张莉敏、何小兵、李政厅、杨帆(男)、委忠子、李维克、景伟、张春祥。各单位或个人在执行本文件过程中如发现需要修改和补充之处，请随时将意见和建议反馈至实验用合作小型猪病理学检查规范地方标准编制组(地址:甘肃省兰州市城关区盐场堡徐家坪l号，邮编:730046，联系人:景志忠，E-mail:，联系方式0931-8341979，13099137618) ，以供今后修订时参考。II 0862/T 4360-2021 实验用合作小型猪病理学检查规范1 范围本文件规定了实验用合作小型猪的检查规则、检查程序、临床病理学检查、解剖病理学检查、结果判定和检查结论等。本文件适用于实验用合作小型猪的病理学检查与疾病诊断。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。NY/T 541 兽医诊断样品采集1、保存与运输技术规范3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1 实验用合作小型猪experimental Hezuo minipi吕经人工饲育，对其携带的病原微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，12月龄体重不超过40烛，用于科学研究、教学、生产和检定以及其他科学实验的合作猪。3. 2 临床病理学clinical pathology 用化学、微生物学、血液学和分子生物主苦的方法对动物血液、尿液和器官组织等进行实验室检测分析，而对动物是否健康做出判定的医学学科巳3. 3 解剖病理学anatomical pathology 通过肉眼、显微镜以及化学、免疫学和分子生物学的方法对动物整体、器官和组织的形态进行检查，而对动物是否健康做出判定的医学学裂。4 宿略语下列缩略语适用于本文件。ALB(Albumin)白蛋白ALP(Alkaline phosphatase)碱性磷酸酶ALT (Alanine aminotransferase)丙氨酸氨基转移酶AMY(Amylase)淀粉酶AST (Aspartate aminotransferase)天门冬氨酸氨基转移酶A/G(Albumin/Globulin)白球比0862/T 4360-2021 BUN但loodurea nitrogen)尿素氮BUN/CRE(Blood urea nitrogen/Creatinine)尿素氮与肌即比CK(Creatine kinase)肌酸激酶CRE(Creatinine)肌即GLO(Globulin)球蛋白GLU(Glucose)血糖HCT(Hema归krit)红细胞比积HGB(Hemoglobin)血红蛋白LDH-L (Lactate dehydrogenase-L)乳酸脱氢酶MCH(Mean corpuscular hemoglobin)平均红细胞血红蛋白含量MCHC(M四ncorpuscular-hemoglobin concentration)平均红细胞血红蛋白浓度MCV(Mean corpuscular volume)平均红细胞体积MPV(Mean platelet volume)平均血小板体积PCT(Plateletocrit)血小板比积PDW(platelet distribution width)血小板分布宽度PLTlatelet)血小板RBC(Red blood ce11)红细胞RDW-CV(Red blood ce11 distribution width variance)红细胞分布宽度变异数TBIL(Total bilirubin)总胆红素T-CHO(Total cholesterol)总胆固醇TG(Triglycerides)甘油三月旨TP(Total protein)总蛋白WBC(White blood ce11s)白细胞Ca叮Calcium)钙P(Phosphorus)无机磷5 检查规则5 1 检查频率普通级实验用合作小型猪每年检查一次，无特定病原体级CSPF)实验用合作小型猪每半年检查一次。5. 2抽样要求5.2. 1 具体要求样本要有明显的标识，标明动物样品名称、品系、等级、数量及检测项目等内容，按动物等级(普通级、SPF级)要求安全运达检测实验室。5. 2. 2 抽样方式选择3月12月龄的实验用合作小型猪用于随机抽样(雌雄各半)和检查检测。样品采集、保存与运输按照NY/T541执行。2 5.2.3 抽样数量根据小型猪群体大小，抽样数量见表l。6 检查程序6. 1 要求群体大小/头100 表l抽样数量应按实验用合作IJ)型猪的等级分类要求，抽样检查检测。6. 2 程序检查程序如图l所示。 型垣主1平J斗中EF 0862/T 4360-2021 抽样数量3头三头画豆塾1图l实验用合作小型猪病理学检查检测l程序3 0862/T 4360-2021 7 临床病理学检查7. 1 外观检查检查实验用合作小型猪的精神状态、被毛、皮肤、天然孔、营养状况、运动状态以及采食、饮水行为等，并做好记录。7. 2血液学指标检查7.2. 1 采样7. 2. 1. 1 动物准备空腹12h1仙。7.2. 1.2 采血位置耳静脉、前腔静脉或后肢外侧隐静脉。7.2. 1.3 血样采集与处理无菌采集全血50mL，其中2.0mL放入EDTA-K2抗凝剂管中，立即缓慢上下颠倒混匀，防止凝血，用于血液细胞学检查;另外3.0mL放入采血管中，室温倾斜放置30mm60mm，3000转/分40C离心5min，收集血清用于血液生化指标检测。7.2.1.4 血样保存条件200C260C室温条件下，抗凝lU.不超过8ho7. 2. 2 血液细胞检测项目及指标实验用合作小型猪血液细胞检测项目及指标正常值参考范围见表2。表2实验用合作小型猪血液细胞指标正常值参考范围项目单位参考值RBC 1Q12/L 6.59土1.53HCT % 45.65土13.16MCV t 115.11土50.83HGB g/L 140.98土34.09MCH pg 21.3土2.4MCHC g/L 327.27土40.34RDW-CV t 16.93土4.63PLT 109/L 251.09土188.91PCT % 0.23土0.24MPV t 8.01土1.17PDW fL 16.9土3.16WBC 109/L 24.13土8.01注数据主要来自3月12月龄以上的实验用合作小型猪，、动物合并统计。4 0862/T 4360-2021 7.2.3 血液生化检测项目及指标实验用合作小型猪的血液生化检测指标正常值参考范围如表30表3实验用合作小型猪的血液生化指标正常值参考范围项目单位参考值TP g/L -乓坦、81.17土7.78ALB 岳L飞38.96土4.45-GLO g/L 、马2.21土9.51NG 。，97土0.26BUN nunoVL 437土1.12CRE 阳nollL5日43土16.47BUNlCRE 19.95土1.51ALP U1L 7日36土43.03CK U/L 67日64土574.86ALT U/L / 88.07土24.68GLU mrnollL -/ 5.33土1.22., AMY U1L / 1766土519.8111 T-CHO mrnollL -2.48土0.4211 TB1L 阳nollL3.89土0.86Ca2+ mrnollL 2.52土。18N P mrnoll1 i 2.4土0.3AST U1L 84.33土27.32LDH-L U1L 837，75土170.66TG mrnollL 0.67土。15注数据主要来自3月-12月龄在验用合作小型猪，、动物合并统计。7, 3 结果判定|陆床病理学检查结果分为囚个等级，分别为未见异常、轻微异常、轻度异常和明显异常，判定标准如下:a) 未见异常动物外观无异常，同时血液化验指标均在正常参考值范围内，b) 轻微异常:动物外观无明显异常，但血液化验指标3项以内存在异常升高或降低，最大变异不超过正常参考值范围临界值的20%;c) 轻度异常动物外观无明显异常或有轻微异常，超过3项血液化验指标异常升高或降低，最大变异达到正常参考值范围临界值20%50%;d) 明显异常:动物外观呈现明显异常;或动物外观无明显异常或有轻微异常，超过3项血液化验指标异常升高或降低，最大变异超过正常参考值范围临界值50%。5 0862/T 4360-2021 8 解剖病理学检查8. 1 大体解剖检查8. 1. 1 基本程序麻醉或安乐死放血体表检查皮下检查剖开腹腔做一般视察剖开胸腔做一般视察摘出腹腔脏器并检查摘出胸腔脏器并检查摘出口腔和颈部器官并检查摘出骨盆腔脏器并检查剖开颅腔摘出头部器官并检查剖开脊椎管，取出脊髓并检查肌肉、关节和淋巴结检查骨和骨髓检查。8. 1. 2 检查异常部位检查内容如下:a) 体表发育状态、营养状态、精神状态、感觉器官、呼吸系统、被毛、皮肤、辜丸、可视教膜，b) 皮下:脂肪、乳腺、淋巴结(领下淋巴结、颈浅淋巴结、脑淋巴结、腹股沟浅淋巴结)、附辜;c) 头颈部:口腔、鼻腔、眼结膜、喉头、大脑、小脑、脑干、垂体、扁桃体、甲状腺、甲状旁腺;d) 胸腔胸腔液、胸腺、肺和肺门淋巴结、心包、心包液和心脏、主动脉、气管和支气管;e) 腹腔:腹腔液、脾脏和脾淋巴结、肝脏、胆囊、肝门部位的血管、胆管和淋巴结、股腺、肾脏、自上腺、胃、肠道(十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠)、肠系膜淋巴结;f) 盆腔膀月光、输尿管、前列腺、精囊腺、卵巢、输卵管、子宫及其附件、阴道。8 2组织病理学检查对大体解剖中发现的异常部位进行组织切片检查，组织标本取材规范按附录A进行。8. 3结果判定解剖病理学检查结果分为四个等级，分别为未见异常、轻微异常、轻度异常和明显异常，要IJ定标准如下:a) 未见异常:未发现病理形态学异常变化;b) 轻微异常:发现轻微的病理形态学变化，动物仍然能够表现正常的生理功能;c) 轻度异常:发现轻度的病理形态学变化，动物正常生理功能己出现偏差;d) 明显异常:有明显的病理形态学变化，动物出现生理功能障碍。9 检查结论9. 1 动物个体检查结论普通级合作小型猪病理学检查结果为未见异常或轻微异常或轻度异常时，均可判定为合格;出现明显异常的判定为不合格。无特定病原体级CSPF)小型猪病理学检查未见异常或轻微异常时，均可判定为合格;出现轻度异常或明显异常的均判定为不合格。l自床病理学与解剖病理学检查结果不致时，按解剖病理学检查结果做出检查结论。9.2动物群体检查结论抽检的小型猪20%以上不合格时，判定该群实验用合作小型猪不合格。6 A. 1 取材的总则及注意事项附录A(资料性)实验用合作小型猪组织病理学标本取材规范0862/T 4360-2021 A. 1. 1 组织块要新鲜，切取的组织块应立即投入固定液中，及时固定，以防组织发生死后变化。A. 1. 2 取材要全面且具有代表性，能显示病变的发展过程。要选择有病变的器官或组织，特别是病变显著部分或可疑病灶。在块组织中，要包括病灶及其周围正常组织，且应包括器官的重要结构部分。如胃、肠应包括从浆膜到满腹各层组织，肾脏应包括皮质、髓质和肾孟，心脏应包括心房、心室及其瓣膜各部分，外周神经组织作纵切及横切面均属必要，较大而重要的病变可从痛灶中心到外周不同部位取材，以反映病变各阶段的形态学变化。A. 1. 3 切取组织块所用的刀剪要锋利。切时必须迅速而准确，白前向后一次切开，不要来回用力，勿使组织块受挤压或损伤，以保持组织完整，避免人为的损伤。因此，对柔软菲薄或易变形的组织如胃、肠、胆囊、肺以及水肿的组织等的切取，更应注意。为了使胃肠毅膜保持原来的形态，在小动物可将整段肠管剪下，不需冲洗或挤压，直接投入固定液内。知膜面所附着的病理性产物，一经触摸即被破坏，故采取标本时应格外注意。接触水分可改变组织微生田结构，组织在固定前不应沾水6A. 1.4 组织块的大小严适当。通常组织块的长、宽、厚以1.5cmxlcmxO.4cm为宜，必要时可增大到2cmx 1.5cmxO.5cm，以便于固定液迅速浸透。尸体剖检时采取病理组织块可切得稍大些，待固定几小时后再加以修整，切jU适当的大小。A. 1. 5 取材时要尽量保持组织的自然状态与完整性，避免人为损伤。为了防止组织块在固定时扭曲变形，对于胃、肠、胆囊等易变形的组织，切取后可将其浆膜面朝下平放于厚纸片上，然后徐徐投入固定液中。对于较大的组织片，可用两片细钢丝网放在其内外两面，系好，再行固定。A. 1. 6对于特殊病灶要做适当标记。在切取组织块时，需将病变显著的部分切平，另一面切成不平面，以供区别，使包埋时不致倒置。如果组织块过小或易碎，采取后装入特制的标本分载盒(铜网盒或特殊塑料制成的组织处理盒内再行固定，以防丢失或破裂。A. 1. 7 注意避免类似的组织块混淆。当类似的组织块较多，容易彼此混漏时，可分别固定于不同的小瓶中，或用分载盒分装固定，或将组织切成不同的形状(如长方形、囚方形，三角形等)，使易于辨认。此外，还可用铅笔标明的小纸片和组织块一同用纱布包裹，再行固定。A. 1. 8 选用恰当的固定液。固定液的种类较多，不同的固定液各有其特点，应依据被检物的性质选用恰当的固定液进行固定，以便正确的保存其固有成分和结构。例如福尔马林液能固定般组织，但能熔解肝糖原和某些色素;酒精能很好的固定肝糖原和蛋白性抗原物质，但能i窑解脂肪。因此，固定标本须依据要求，选择适当的固定液。最常用的固定液是10%的福尔马林水熔液(市售甲应用水稀释101音)，为使切片效果更好可用中性福尔马林液;其他固定液如酒精j杏液或Zenker氏液等亦要准备齐全，以便需要时即可应用。固定浓的量要相当于组织块总体积的51O倍，液量勿少子组织块总体积的4倍。将组织块投入固定液之后应及时播动，使组织块充分接触固定液，固定液容器不宜过小，容器底部可垫以脱脂棉花，以防止组织与容器粘7 0862/T 4360-2021 连，避免组织固定不良或变形。肺脏组织比重较轻，易漂浮于固定液面，可盖上薄片脱脂棉花，借棉花的虹吸现象，可不断地浸湿标本。A. 1. 9 固定时间要适当。固定时间依据固定物的大小和固定液的性质而定。通常自数小时至数天。时间过短组织固定不充分，影响染色效果，使组织原有结构不清楚，固定时间过长或固定液浓度过高，则使组织收缩过硬，也影响切片染色质量。如以甲腔液固定，需固定24h48h，后用水冲洗12h即可o用Zenker氏液固定12h24h后，经水冲洗24ho为阻止细胞内蛋白i吾解酶的作用，最好将组织块置于40C冰箱冷藏固定，以使酶失去活性作用。A. 1. 10 病理组织块应合理寄送。将固定完全和修整后的组织块，用浸渍固定液的脱脂棉花包裹，放置于广口瓶或塑料袋内，并将其口封固。瓶外再裹以油纸或塑料纸，然后用大小适当的木盒包装，即可运送。同时应将整理过的尸体剖检记录及有关材料同寄出，并在送检单上说明送检的目的要求，组织块的名称、数量以及其他应说明的问题。除运送的病理组织块外，本单位还应保留套病理组织块，以备必要时复查之用。A. 1. 11 接收时应仔细检查送检标本。接收送检标本时，须依据送检单详细检查送检物。注意标本名称、大小及数目，是否与送检单相符，负责人及地址有无填写清楚。如发现送检标本不符，或送检单填写有误，应立即更正。标本固定不当，组织干酒或坏死不能制片时，也应退回。经检查无误后，即将标本编号登记，并在标本瓶上贴上标签，以防错乱。A. 2 标本采集与处理A. 2. 1 皮肤和皮下组织A. 2. 1. 1 皮肤取肩背部皮肤组织和其他有病变皮肤。取材时发现有病变，需记录其大小、颜色及其他特征。A. 2. 1.2 淋巴结将淋巴结垂直子长轴切开，取组织12块。记录淋巴结的大小，与周围组织的粘连情况，剖面病理状况。A. 2. 1.3 乳腺ti乳头周围连同皮肤剪取乳腺组织，皮肤面朝下放在取材板上，在乳头中心处切开，取组织12块。如果发现乳腺肿瘤，同时取乳腺淋巴结。记录肿瘤大小、切面及表面状况和乳腺淋巴结的情况。A. 2. 1. 4 皇丸和附辜用锋利的刀将辈丸作矢状切面剖开，取组织l块。沿附辜长轴纵向剖开附辈，取组织l块。记录辜丸和附辜的表面和切面情况。A. 2. 2 腹腔脏器A. 2. 2. 1 脾脏以O.5cml.Ocm问ftEi对脾作多个平行横切面，检查每块脾脏薄片的局部形态。取组织12块。记录脾脏的形态、色泽和切面的情况。8 0862/T 4360-2021 A.2. 2. 2 肾上腺将肾上腺垂直于长轴切开，放入固定液中。记录肾上腺的形态、色泽和切面的情况。A.2. 2. 3 肾脏自肾外侧缘沿长轴经肾门纵向剖开肾脏，小心剖开肾孟、肾盏和输尿管。在肾皮质和髓质最大剖面的不同部位切取2块组织。若有病变，再于主要病变区域取组织2块，无病变区域取组织2块。记录肾脏表面、皮质、髓质、肾孟和输尿管的情况。A.2.2.4肝脏左外叶和右外叶各取组织l块(包括包膜)。发现病灶的肝叶应沿标本长轴作垂直肝包膜的横切面，切面经过病变中心，取病变组织2块。记录肝脏表面和切面情况，门脉(故剖开检查。A.2. 2. 5膜腺月亮腺的头、体、尾各取组织l块。如有病变，应切出病变区域的最大截面?取组织2块。A.2. 2. 6胃沿胃大弯剪开，观察胃内容物的性状，用水轻轻洗净胃内容。胃底、胃体、胃3苦和十二指肠球部各取全层结构组织l块。有病变时(肿瘤、溃2亮或胃炎)，另取病变部位组织13块。记录毅膜的色泽及有无异常。A.2. 2. 7肠道十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠各取横切全层肠组织l块。若发现病灶，应包括邻近的正常组织，纵向切取组织2块。记录肠系膜、肠道浆膜面、肠壁和肠道毅膜面的情况，注意记录病变所处肠段的位置，以及肠腔内有无寄生虫或异物。A.2. 2. 8 肠系膜淋巴结将淋巴结垂直子长轴切开，取组织12块。记录肠系膜淋巴结情况，与周围组织粘连情况，切面病理状况。A.2.3 胸腔脏器A. 2. 3. 1 胸腺颈部胸腺与胸部胸腺各取组织l块。记录胸腺的大小、质地和有无异常。A.2. 3. 2肺脏用于触摸肺脏标本，注意有无质地不均匀之处(如硬块、实变、囊性变、气肿或气泡等)。间隔O.5cml.Ocm切开肺叶，左右肺叶各取组织l块，支气管断端l块。若有病变，主要病变区域取组织13块。记录肺表面和切面的情况，若有病灶，应记录病灶部位(肺叶、肺段)。肺组织固定时，应将组织块沉入固定液液面之下，避免漂浮在液面之上。9 0862/T 4360-2021 A. 2. 3.3 心脏ti左纵沟左侧的切口，切至肺动脉起始处ti左纵沟右侧的切口，切至主动脉的起始处。然后将心脏翻转过来，再沿右纵沟左右两侧作平行切口，切至心尖部与左侧心切口相连接;切口再通过房室口切至左心房及右心房。将心脏全部剖开。左右心各取l组织块，每块组织应包括心房、瓣膜、心室壁各层结构及冠状动脉。记录心脏纵沟、冠状沟的脂肪量，以及心外膜、心内膜和切面变化。A.2.4颈部器官甲状腺位于喉下方的气管表面，横切检查后放入固定液。记录其大小和颜色。A. 2. 5 盆腔器官A. 2. 5. 1 前列腺和精囊腺将前列腺做多个矢状切面，间隔约1.Ocm，仔细检查各切面。取组织l块。精囊腺每叶取组织l块。记录前列腺、精囊腺外表、切面情况。A. 2. 5.2 膀肮自膀脱的尿道口断端至膀月光底部，将膀月光壁做Y形剪开和展平，检查内膜。取组织l块，若有病变再于病变区域取组织2块。A. 2. 5.3 卵巢每侧卵巢最大切面各取组织l块。发现卵巢肿物则切开检查，取组织2块。记录卵巢的形状、是否有肿物及硬度。A. 2. 5.4 子宫依次剪开阴道、子宫颈、子宫体，直至左右两侧子宫角，检查内容物的性状及教膜有无病变。子宫体(左右角)各取组织l块，如果有病变，增加取材数量。记录子宫的大小及教膜表面情况。A. 2. 6 头部器官A. 2. 6. 1 领下腺以O.5cml.Ocm间距对领下腺作多个平行横切面，检查每块薄片的局部形态。取组织12块。记录领下腺的形态、色泽和切面的情况。A. 2. 6.2脑剖开颅腔，剪开硬脑膜、大脑镰和小脑天幕，离断颅神经根，将截断刀从枕骨大孔前侧插入孔内，尽量深入椎管，斜行离断脊髓，将大脑、小脑和脑干一同取出。进而自蝶鞍中取出垂体。将大脑额叶面朝上置于取材板上，自额叶至枕叶每间隔约1cm平行切成数个额状断面，并将每片大脑断面顺序地平放予解剖板上进行检查，取组织2块。经小脑蚓部做水平切面或矢状切面，检查小脑实质和第四脑室。分别沿中脑、脑桥、延髓作横切面，取组织2块。观察和记录颅骨的完整性，硬脑膜、蛛网膜和软脑膜情况，以及脑底动脉环有无异常。大脑的体积、对称与否以及脑组织切面变化。小脑表面和切面有无异常，垂体情况。10