紫外和荧光分光光度计详解说课讲解.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,紫外和荧光分光光度计工作原理,紫外可见分光光度计,基本结构：六个基本部分组成,光源,单色器,比色室,检测器,放大器,显示装置,光源：,发出所需波长范围内连续光谱，有足够光强度,稳定；,所用灯的不同提供光的区间范围也不同。,可见光区：钨灯，碘钨灯(3202500nm),紫外区：氢灯，氘灯(180375nm),紫外可见光区：氙灯（190-800nm）,单色器：,核心部件,将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置。,棱镜,:玻璃3503200nm,石英1854000nm,色散原理：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同；,特点：色散均匀，谱带宽窄不同；,入射狭缝,准直透镜,棱镜,聚焦透镜,出射狭缝,白光,红,紫,1,2,光栅：,在镀铝玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕,(600、1200、2400条/mm),特点：,波长范围宽、色散均匀、分辨性能好、使用方便,。,M1,M2,出射狭缝,光屏,透镜,平面透射光栅,光栅衍射示意图,分光原理,：,光通过光栅，发生衍射和干涉而分光,样品室,样品室：,容纳各种光径的,吸收池,的装置和附件。,比色池,：,如：普通比色池、微量池、流动池等。,紫外区一定要用石英杯，可见区可用玻璃杯。,检测器：（光电检测器）,常见：光电池、光电管、,光电倍增管,和,光电二极管阵列。,放大装置、转换器和记录仪：,将测量信息放大、显示并输出的装置。,单光束紫外可见分光光度计：,双光束紫外可见分光光度计：,光源吸收池单色器DAD检测器数据转换记录 全谱分析,偏离朗伯比尔定律的因素,：,1、谱带宽度和溶液本身性质,溶剂的选择,：,1、在测定的波长范围内吸收较少,2、不会与溶质（被测样品）起化学反应,3、挥发性较小,特殊样品：,1、会发射荧光的被测样品,2、非常混浊的一片,2、仪器性能与测量误差,仪器性能：仪器误差，杂散光干扰等，,系统误差,误差引起透光率（T）产生误差T，,浓度（C）也随之产生误差C。,什么情况下浓度的相对误差C/C最小？,当T%=36.8%（A=0.456）时,测量所引起的相对误差最小。,T=20%-65%，A=0.20.8之间进行测量,相对测量误差较小.,减少误差的方法,采取调节,光径,与,浓度C,的办法减少误差,差示光谱法（低浓度、高浓度）,T,3、光的反射,朗伯比尔定律在推导过程中，曾经,忽略了,溶液对光的反射作用。,如果,溶液,和,溶剂,对光的,反射,有较大的,差异,，就会引起比尔定律的偏离。,为了消除误差，要尽可能地使,参比溶液,与,样品溶液,的组成接近。,4、其它因素的影响：,检测器非线性响应、溶液pH值、光分解、,水解、温度等 对吸光度产生影响；,在选择,参比溶液,和,显色剂,时也要注意。,DAD（PAD）检测器分光光度计,二极管阵列检测器（DAD）,又称光电二极管列阵检测器（PAD）,PDA（photo-diode array）,PDAD（photo-diode array detector）,Diode array detector，DAD,20世纪80年代出现的一种光学多通道检测器。,一个二极管对应接受光谱上一个纳米谱带宽的单色光,每一个二极管相当于一个单色器的出口狭缝,DAD检测器的灵敏度比通常的UA检测器约低一个数量级。,单纯用于含量测定或杂质检查时，还是采用UA检测器为好。,F-4500 荧光分光光谱仪（日本 Hitachi）,荧光分光光谱仪,工作原理：,光源的激发光照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，被光电倍增管接受，最后以图或数字的形式显示出来。,光源：,高压汞灯或氙灯，在190nM-800nM范围，发射强度较大的连续光谱。,激发单色器：,置于光源和样品室之间的单色器（,第一单色器,）,发射单色器,：置于样品室和检测器之间的为单色器（,第二单色器,。,样品室：,石英池,(液体样品用)或,固体,样品架(,粉末或片状,样品)组成。光源与检测器成,直角,安排，测量固体时，光源与检测器成直角。,检测器：,光电管或,光电倍增管,。可将光信号放大并转为电信号。,荧光光谱仪工作原理示意图,相对应该强度,紫外-可见与荧光分光光度计工作原理区别：,其它附属设施,控温系统和装置,停留装置,固体样品架,仪器功能,VUVis仪,光谱扫描,（吸收、透光率、能量）,定波长或多波长测定,时间扫描,拟合运算功能,输出（强大的Excel 表格输出）,液体样品,荧光光谱仪,光谱扫描,（Em、Ex）,时间扫描,同步荧光和共振荧光,磷光分析,时间分辨（荧光寿命）,拟合运算功能,输出（强大的Excel 表格输出）,液体、固体样品,荧光猝灭,猝灭：,非光辐射跃迁,浓度猝灭：临界浓度,温度猝灭：T，发光强度降低,动态猝灭猝灭剂与发光分子碰撞,静态猝灭猝灭剂与发光分子结合,混合猝灭动态、静态（解析困难）,猝灭公式：,小结,紫外和荧光分光光度计,工作原理和功能,