女性泌尿生殖道解脲支原体基因分型的研究.doc

女性泌尿生殖道解脲支原体基因分型的研究
女性泌尿生殖道解脲支原体基因分型的研究

　解脲支原体( , )是引起泌尿生
殖道炎症()及男女不孕不育的主要病原体,也是性传播
的常见病原体。目前临床中常见对宫颈分泌物检测出解脲支
原体的妇女投以大量抗生素,结果是解脲支原体反复出现阳
性,称之为“解脲支原体耐药”,因此下生殖道内查到解
脲支
原体者,是否皆须诊治,一直尚未完全定论。现在对特定血清
型的具有致病性,这种条件致病病原体进一步分群分型
是判断感染及携带的关键。故解脲支原体的基因分型研究成为国内外研究热点,现将其研究进展综述如下:
解脲支原体概述
是从人体中分离的能自身繁殖的种支原体之一,
属硬壁菌门柔膜体纲支原体目支原体科脲原体属。年
由首先从非淋球菌性患者的尿道中分离出来,
称为株( ) 。介于病毒和细菌之间,是在人工
培养基上能繁殖的最小的原核细胞型微生物,无细胞壁,能自
我复制, 呈球杆状, 大小为 ～ 毫微米, 分子量
. × ,具高度多形性,是人类泌尿生殖道的一种常见寄生
微生物。年认为具有保守的氨基末端和具有
多重重复基因的羧基末端的重复顺序短( ; 氨基酸)
但是数目众多。 的 抗原(
,多带抗原)决定簇模拟了人类蛋白质来避免被识别,
的抗原在支原体和宿主的关系中起了关键作用。
抗原有如下特征: ①是被感染病人中认识的最主要抗
原; ②具有种特有性; ③具有型特异性及交叉活性片段,能被
型特异性单抗及交叉活性单抗所识别; ④不但产生于体内,也
产生于体外; ⑤负责解脲支原体某一型的高变异型; ⑥在侵袭
性解脲支原体分离物中存在,并具有表达大小的差异。
在遗传学上是“节俭”的而毒力较小的,利用宿主排泄废物
(尿素)的能力使其能够在宿主体内保持高水平的生物种
群[ ]。特异性抗体能抑制生长,因其缺乏坚硬的细胞膜,
对青霉素耐药,对细胞膜有亲和性,生长繁殖时需要类固醇物
质。
解脲支原体的致病机理
致病机理是: ①具有致病性的 可黏附在上皮细
胞、红细胞、巨噬细胞、精子等易感宿主细胞膜表面的受体上,
黏附后释放有毒的代谢产物如过氧化物和氨等,同时通过宿
主细胞膜获得脂质和胆固醇,引起细胞膜的损伤,导致宿主细
胞染色体异常,影响蛋白质和合成,严重者导致细胞死
亡。具有多种酶活性,及其毒力相关的是脲酶、蛋白
酶、凝脂酶、溶酶体; ②宿主免疫力低下,性行为不良或性
伙伴多变。目前认为及人体的[ ]、非特异性尿道炎、
生殖道感染[ ]、赖特综合症、不孕不育、流产、早产[ , ]、早产
儿呼吸窘迫综合征[ ]胎膜早破、绒毛膜羊膜炎[ ]、胎儿感染
及出生低体重儿[ ]、死胎[ ]新生儿的脑脊髓膜炎等感染、产
后发热、膀胱泌尿系结石、播散性感染等有关,在免疫低下病
人可引起脓肿和化脓性关节炎[ ]。而新生儿尤其是极
低体重出生儿的鼻咽、支气管及肺部也可以检测到,并认
为其可以引起新生儿的呼吸系统疾病,是新生儿的死亡率增
加,是慢性呼吸系统疾病的一种重要病原体[ ]。在性
成熟无症状的女性宫颈或阴道中的分离率达 ～ ,作
为人群即便经过抗生素介入,降低其携带率,经过一段时间的
正常性行为,携带率也会恢复原来水平。而且生殖道的
是否具有致病性尚存在争议。
解脲支原体的基因分型
根据分子生物学特征可分为两大生物群及个血清
型,生物一群包括基因组较小的、、、型,曾先后命名为
. 群、 群、 群、 群,目前被
重新命名为 , 简称, 占支原体感染的
～;生物二群包括剩下的 个基因组较大的血清
型,也曾先后命名为 群、 群、 群、
群,目前被重新命名为 ,简称
,占支原体感染的 ～。生物二群还可分为个亚
群,亚群为血
[] [] 清型、、、;亚群为血清型、、、;
亚群为血清型、。年在等的研究中,为进
一步阐明不同血清型的关系,他们把的 个血清型的
基因′端和、的所有血清型基因的部分重复区域
进行排序的个血清型被分为个基因型
基
因型包括血清型, , 基因型包括血清型;
基因型包括血清型、、基因型包括血清
型基因型包括血清型、 。在每一种基因
型成员间没有排列顺序的差异。在 [ ]的研究中血
清型标准株被作为的典型株的典型株是血清型。
在极个别情况下,极少数菌株的特性不符合任何一个生
物种群,例如血清型标准株吸附红细胞的能力、还有膜外板
层、磷脂酶、磷脂酶、细菌敏感性都没有确立及那一个生
物种群有关。多克隆的抗血清对一或多个抗原决定簇引起的
细胞生长抑制及人类的生物一群有关,但及任何生物二群的
抗原荧光分析决定子无关。
解脲支原体基因分型方法
. 抗原检测法
. . 免疫荧光试验
这是最早使用的检测抗原方法,在固体培养的菌落上加
入特异的荧光标记的一抗或二抗,在荧光显微镜下观察结果。
该法简便易行可以对生长在同一培养基表面的混合血清型株
进行鉴定,主要用于临床标本的血清分型,其缺点是结果
不易区分荧光染色的菌落和未染色的菌落,受主观因素的影
响较大,且需要特殊的荧光显微镜不易普及使用。
. . 免疫酶试验
这种检测抗原方法及免疫荧光相似,也可以用于检测同
一培养基上的不同血清型。该法用酶标记抗体代替荧光抗
体,可以在普通显微镜下观察结果。
. . 免疫结合试验
这种检测抗原方法的关键一步是采用硝酸纤维素膜作为
载体,利用该膜对蛋白质较好的吸附力,并及免疫酶方法相结
合完成对支原体表面抗原的检测。该法易进行大量临床标本
的支原体鉴定及同一固体培养基上混合株型鉴定,可以对固
体培养基上生长不良的菌落进行鉴定,具有较高的特异性,敏
感性及培养法相当,在分型研究中交叉反应的发生率较高。
. . 免疫印迹技术
这种检测抗原方法的基本原理是蛋白质首先被高分辨力
十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳( )分离,蛋
白质的各分离区带被固定于凝胶的网络结构中,然后经电转
染技术将蛋白质转移至硝酸纤维素膜上,及敏感而特异的固
相免疫测定相结合,利用各种标记试剂灵敏而简便的测出各
种特异性反应。
. 抗体的测定
. . 代谢抑制试验
原理是在液体培养集中反应,可分解尿素产生氨,培
养基的值升高,通过颜色指示剂显示。如果将特异的抗
体加入液体培养集中的生长会受到抑制,从而间接抑制
了颜色变化。该法有较高敏感性和特异性,被广泛用于
的分型和抗体的检测,但交叉反应的发生率较高。
. . 酶联免疫吸附试验
这种检测抗原方法是以溶解的膜蛋白为抗原,抗原
及检测的血清中特异的抗体结合后,再及酶标记的抗人
(或)抗体反应通过酶及底物的反应呈现的颜色来定性定量判断结果。该法具有高特异性高敏感性较好的可重复性,
广泛用于的血清学研究。
. 分子生物学方法
. . 脱氧核糖核酸探针
这种检测抗原方法可直接快速(～天)检测泌尿生殖
道标本,特异性高,可以和培养法结合用于的检测。
. . 聚合酶链式反应法
聚合酶链式反应法( )是目前最常用的检测和分
型方法,该法具有的优点是:高敏感性、高效率、高特异、高速
度、简便。在检测中常用的用于基因扩增的序列有以下
几种: 序列、基因片断、基因间隔
序列及尿素酶基因等。利用序列上微小的差异可
以将分为两大生物群。基因片断是最常用的扩增
片段, 等及年依据该基因! 末端序列的不同设计
合成引物,在此基础上将的 分为、、型,利用
随机片断多态性分析 ()技术进行 的
的亚群分析,并根据多态性条带将的 进一步分为
个亚群。作者同时还运用巢式扩增将
分为两个亚群,又运用个引物进行随机片断多态性分析将
分为 个亚群,其中 分为 个亚群。 年
等利用 中、、、标准株多条带抗原基因!
末段之间的序列差异,结合使用群特异性限制性酶切分
析和血清型特异性设计了实验方案,可以鉴别
中血清型、 、型。等[ ]采用单链构象的
多态性( )分析检测技术对标准菌株进行研究,
仅需一套简单的引物和单一的扩增步骤,成为大批量菌
株分型研究的有效方法。等[ ]将 应用于临
床基因分型的测定,发现 法的灵敏度和特
异度分别是. 和. ,而培养法的灵敏度和特异度分
别是. 和 ,从而认为 法能快速有效
地用于的基因分型研究。方法虽省时,但假阳性或
假阴性均高,及操作者的水平密切相关。
. . 其他
检测和分型还有基因重组技术、反向斑点杂交技术
等方法。
解脲支原体基因分型及临床流行病学
. 解脲支原体基因分型及正常健康人
. . 解脲支原体基因分型及正常体检人群
在[ ]的研究中,正常体检人群中携带,其中
为 , 为 。基因型, , 和也可在
正常人群中被检出,但单独分离出基因型是少见的。这一
发现及其它研究结果一致。
. . 解脲支原体基因分型及正常孕产妇及新生儿
等[ ]的研究表明,可以从部分健康新生儿的外
阴、鼻咽部、支气管、眼、血液、胃液中分离到,且外阴部的
检出率高于其他部位,女婴的检出率高于男婴,携带时间长于
男婴。等[ ]对获取的新生儿标本进行 培养和
分型,结果显示分离到的菌株 和 的比例
为: 。
. 解脲支原体基因分型及泌尿生殖系感染
不同的生物群及血清型及寄居和感染的关系是目前
我国研究的一个热点。年在朱庆义的研究中例泌
尿生殖系感染患者,临床分泌物标本阳性占. ,采用
对基因分型引物对培养阳性标本进行分型
鉴定,结果检出 占. , 占. ,其中
血清型、 和阳性率分别为. 、. 和
. ; 亚型、、 阳性率分别为. 、. 、
. 。年在覃春容的研究中有阴道炎症状和体征的
例患者组成的病例组,对照组例为同期正常体检人
群。病例组中 阳性占. , 其中单纯 感染占
. ;单纯 感染标本进行基因分型鉴定, 占
. , 占. , 两群混合感染
占. ;对照组阳性占. ,其中单纯 感染占
. ,单纯感染基因分型 占. , 占
. , 两群混合感染占. 。结论是两
组人群均以 感染为主,病例组的特点是两群混合感
染较对照组高,特别是 及 中型的多型别感
染较对照组高,在多型别感染中型的检出率较对照组高。
对照组的特点是 较病例组高,且以 中的血清
, , 型的单纯感染为主; 中型的单型别感染较病
例组高。、、型单型别感染在两组差异无显著性。
. 解脲支原体基因分型及性滥人群
在[ ]的研究中, 个正常体检妇女和个性工作
者的宫颈拭子进行了培养, 培养阳性者用法进行分
群分型,数据表明: ①在性工作者中比正常体检妇女更常
见; ② 中一种基因型的单纯感染( 基因型,
或)在正常体检妇女比性工作者中更普遍; ③ 感染
和 中超过一种基因型的混合感染在性工作者中更普
遍; ④ 中基因型、、 在性工作者中及正常体检妇
女中没有分布差别;尽管 的分离率在正常体检妇女
高,但在性工作者中更高(. ) ,这意味着 在性工
作者更常见且又是可能成为这个人群的致病菌。性工作者中
的分离率(. )大约是正常体检妇女 的
分离率(. )的倍, 多于一种基因型引起的混合
感染率(. )比正常体检妇女(. )高倍。
综上所述,尽管人们为探讨不同血清型的致病性大
量研究,但都无足以令人信服的证据说明某种血清型肯定和
某种疾病有关,目前多数研究认为,人类泌尿生殖道寄居或感
染的绝大部分为 ,其中某些类型及疾病有关,所
以的分型对疾病的发病机制研究有重要的作用,是否特
定型别及致病或寄居具有相关性仍是现在亟待解决的问
题。目前的研究在结合治疗、耐药、预后方面仍有待进一步的
研究。

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