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第五章 微生物的生长繁殖与生存因子
1．微生物与温度的关系如何？高温是如何杀菌的？高温杀菌力与什么有关系？
答：温度是微生物的重要生存因子。在适宜的温度范围内，温度毎升高10摄氏度，酶促反应速度将提高1~2倍，微生物的代谢速率和生长速率均可相应提高。适宜的培养温度使微生物以最快的生长速率生长，过高或过低的温度均会降低代谢速率和生长速率。
高温主要破坏微生物的机体的基本组成物质——蛋白质，酶蛋白和脂肪。。蛋白质被高温严重破坏而发生凝固，为不可逆变性，微生物经超高温处理后必然死亡。细胞质膜含有受热易溶解的脂类，当用超高温处理时，细胞质膜的脂肪受热溶解使膜产生小孔，引起细胞内含物泄漏而死亡。
高温的杀菌效果和微生物的种类，数量，生理状态，芽孢有无及pH都有关系。

2．什么叫灭菌？灭菌方法有哪几种？试述其优缺点。
答：灭菌是通过超高温或其他的物理、化学因素将所有的微生物的营养细胞和所有的芽孢或孢子全部杀死。
灭菌的方法有干热灭菌法和湿热灭菌法。
湿热灭菌法比干热灭菌法优越，因为湿热的穿透力和热传导都比干热的强，湿热时微生物吸收高温水分，菌体蛋白易凝固变性，所以灭菌效果好。

3．什么叫消毒？加热消毒的方法有哪几种？
答：消毒是用物理、化学因素杀死致病菌，或是杀死所有微生物的营养细胞或一部分芽孢。
方法有巴斯德消毒法和煮沸消毒法两种。

4．嗜冷微生物为什么能在低温环境生长繁殖？
答：嗜冷微生物具备更有效的催化反应的酶，其主动传送物质的功能运转良好，使之能有效地集中必需的营养物质，嗜冷微生物的细胞质膜含有大量的不饱和脂肪酸，在低温下保持半流动性。

5．高温菌和中温菌在低温环境中的代谢能力为什么减弱？
答：在低温条件下，微生物的代谢极微弱，基本处于休眠状态，但不致死。嗜中温微生物在低于十摄氏度的温度下不生长，因为蛋白质合成的启动受阻，不能合成蛋白质。又由于许多酶对反馈抑制异常敏感，很易和反馈抑制剂紧密结合，从而影响微生物的生长。处于低温下的微生物一旦获得适宜温度，即可恢复活性，以原来的生长速率生长繁殖。

6．细菌、放线菌、酵母菌、霉菌、藻类和原生动物等的正常生长繁殖分别要求什么样的pH？
答：大多数细菌、藻类和原生动物的最适宜pH为6.5~7.5，它们的pH适应范围在4~10之间。放线菌为7.5~8.0。酵母菌和霉菌在3~6。
7．试述pH过高或过低对微生物的不良影响。用活性污泥法处理污（废）水时为什么要保持在pH6以上？
答：(1) pH过低，会引起微生物体表面由带负电变为带正电，进而影响微生物对营养物的吸收。(2) 过高或者过低的pH还可影响培养基中的有机化合物的离子作用，从而间接影响微生物。因为细菌表面带负电，非离子状态化合物比离子状态化合物更容易渗入细胞。(3) 酶只在最适宜的pH时才能发挥其最大活性，极端的pH使酶的活性降低，进而影响微生物细胞内的生物化学过程，甚至直接破坏微生物细胞。(4) 过高或者过低的pH均降低微生物对高温的抵抗能力。

8. 在培养微生物过程中，什么原因使培养基pH下降？什么原因使pH上升？在生产中如何调节控制pH？
答：微生物在培养基中分解葡萄糖，乳产生有机酸会引起培养基的pH下降，培养基变酸。微生物在含有蛋白质、蛋白胨及氨基酸等中性物质培养基中生长，这些物质可经微生物分解，产生NH和胺类等碱性物质，使培养基pH上升。
在生产过程中，处理城市生活污水、污泥中含有蛋白质，可不加缓冲性物质。如果不含蛋白质、氨等物质，处理前就要投加缓冲物质。缓冲物质有碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化铵及氨等。以碳酸氢钠最佳。
霉菌和酵母菌对有机物具有较强的分解能力。pH较低的工业废水可用霉菌和酵母菌处理，不需要碱调节pH，可节省费用。

9. 微生物对氧化还原电位要求如何？在培养微生物过程中氧化还原电位如何变化？有什么办法控制？
答：各种微生物要求的氧化还原电位不同。一般好氧微生物要求的E为+300~+400mV；E在+100mV以上，好氧微生物生长。兼性厌氧微生物在Eh为+100mV以上进行好氧呼吸，在Eh为+100mV一下时进行无氧呼吸。专性厌氧菌要求Eh为-200~-250mV，专性厌氧的产甲烷菌要求的Eh更低，为-300~-400mV，最适为-330mV。
在培养微生物的过程中，由于微生物繁殖消耗了大量氧气，分解有机物产生氢气，使得氢气还原电位降低，在微生物对数生长期降到最低点。
氧化还原电位可用一些还原剂加以控制，使微生物体系中的氧化还原电位维持在低水平上。这类还原剂有抗坏血酸、硫二乙醇钠、二硫苏糖醇、谷胱甘肽、硫化氢及金属铁。

10. 好氧微生物需要氧气作何用？充氧效率与微生物生长有什么关系？
答：氧对好氧微生物有两个作用：(1) 作为微生物好养呼吸的最终电子受体；(2)参与甾醇类和不饱和脂肪酸的生物合成。
充氧量与与好氧微生物的生长量、有机物浓度等成正相关性。

11. 兼性厌氧微生物为什么在有氧和无氧条件下都能生长？
答：兼性厌氧微生物既有脱氢酶也有氧化酶，所以，既能在无氧条件下，又能在有氧条件下生存。在好痒条件下生长时，氧化酶活性强，细胞色素及电子传递体系的其他组分正常存在。在无氧条件下，细胞细胞色素及电子传递体系的其他组分减少或全部丧失，氧化酶无活性；一旦通入氧气，这些组分的合成很快恢复。

12. 专性厌氧微生物为什么不需要氧？氧对专性厌氧微生物有什么不良影响？
答：因为专性厌氧微生物一遇到氧就会死亡。
在氧气存在时，专性厌氧微生物代谢产生的NADH2和O2反应生成H2O2和NAD，而专性厌氧微生物没有过氧化氢酶，它将被生成的过氧化氢杀死。O2还可以产生游离O,由于专性厌氧微生物没有破坏O的超氧化物歧化酶而被O杀死。耐氧的厌氧微生物虽具有超氧化物歧化酶，能耐O2然而他们缺乏氧化氢酶，仍会被氧化氢杀死。

13. 紫外线杀菌的机理是什么？何谓光复活和暗复活现象？
答：紫外辐射的波长范围是200~390nm，紫外辐射对微生物有致死作用是由于微生物细胞中的核酸、嘌呤、嘧啶、及蛋白质对紫外辐射有特别强的吸收能力。DNA和RNA对紫外辐射的吸收峰在260nm处，蛋白质对紫外辐射的吸收峰在280nm处.紫外辐射能引起DNA链上两个邻近的胸腺嘧啶分子形成胸腺嘧啶二聚体，致使DNA不能复制，导致微生物死亡。
经紫外辐射照射的菌体或孢子悬液，随即暴露于蓝色可见光下，有一部分受损伤的细胞可恢复其活力，这种现象叫光复活。在黑暗条件下修复DNA链称为暗复活。

14. 几种重金属盐如何起杀菌作用的？
答：重金属汞、银、铜、铅及其化合物可以有效的杀菌，它们都是蛋白质的沉淀剂。其杀菌机理是与酶的-SH基结合，使酶失去活性；或与菌体蛋白质结合使之变性或沉淀。

15. 氯和氯化物的杀菌机理是什么？
答：氯和氯化物对细胞壁有较强的吸附穿透能力，可有效地氧化细胞内含巯基的酶，还可以快速地抑制徽生物蛋白质的合成来破坏微生物。

16. 有哪几种有机化合物杀菌剂？它们的杀菌机理死是什么？
答：(1) 醇：醇是脱水剂和脂溶剂，可使蛋白质脱水，变性，溶解细胞质膜的脂类物质，进而杀死微生物机体。(2) 甲醛：甲醛可与蛋白质的氨基结合而干扰细菌的代谢能力。(3) 酚：酚与其衍生物能引起蛋白质变性，并破坏细胞质膜。(4)新洁而灭：是一种表面活性强的杀菌剂。对许多非芽孢型的致病菌、革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌有着极强的致死作用。(5) 合成洗涤剂：去污能力强，还有杀菌作用。(6) 染料：有抑菌作用。

17. 为何渗透压？渗透压有与微生物有什么关系？
答：任何两种浓度的液体被半渗透膜隔开，均会产生渗透压。当两液面高差产生的压力足够阻止水在流动时，渗透停止，这时出现的两液面高差间的压力就是渗透压。
在等渗透压中的微生物生长得很好，在低渗透压中溶液中的水分子大量渗入微生物体内，使微生物发生膨胀，严重者破裂，在高渗透压溶液中，微生物体内水分子大量渗到体外，使细菌质壁分离。

18. 水的活度与干燥对微生物有什么影响？
答：大多数股微生物在a为0.95~0.99时生长最好。嗜盐细菌属的细菌很特殊，它们在低于0.80的含NaCl的培养基中生长最好。少数霉菌和酵母菌在a为0.60~0.70时仍能生长。在a为0.60~0.65时大多数微生物停止活动。
干燥能使细菌体内的蛋白质变性，引起代谢活动停止，所以干燥会影响微生物的活性以及生命力。

19. 何谓表面张力？它对微生物有什么影响？
答：表面张力是分子力的一种表现。它发生在液体和气体接触时的边界部分。是由于表面层的液体分子处于特殊情况决定的。液体内部的分子和分子间几乎是紧挨着的，分子间经常保持平衡距离，稍远一些就相吸，稍近一些就相斥，这就决定了液体分子不像气体分子那样可以无限扩散，而只能在平衡位置附近振动和旋转。在液体表面附近的分子由于只显著受到液体内侧分子的作用，受力不均，使速度较大的分子很容易冲出液面，成为蒸汽，结果在液体表面层(跟气体接触的液体薄层)的分子分布比内部分子分布来得稀疏。相对于液体内部分子的分布来说，它们处在特殊的情况中。表面层分子间的斥力随它们彼此间的距离增大而减小，在这个特殊层中分子间的引力作用占优势。因此，如果在液体表面上任意划一条分界线MN把液面分成a、b两部分，如图所示。F表示a部分表面层中的分子对b部分的吸引力，F6表示右部分表面层中的分子对a部分的吸引力，这两部分的力一定大小相等、方向相反。这种表面层中任何两部分闻的相互牵引力，促使了液体表面层具有收缩的趋势，由于表面张力的作用，液体表面总是趋向于尽可能缩小，因此空气中的小液滴往往呈圆球形状。
表面张力是润湿的函数。如果细菌不被液体培养基润湿，它们将在表面生成一层薄菌膜。如果它们被润湿，则在培养基中均匀生长、培养基变混浊。若要使那些在液体培养基中均匀生长的细菌呈膜状生长，则可增加类脂质含量，保护菌体不受润湿，细菌则可呈膜状生长。
20. 抗生素是如何杀菌和抑菌的？
答：抗生素是通过四个方面杀菌和抑菌的：(1) 抑制微生物细胞壁合成；(2) 破坏微生物的细胞质膜；(3) 抑制蛋白质合成；(4) 干扰核酸的合成。

21. 在天然环境和人工环境中微生物之间存在哪几种关系？举例说明。
答：有种内关系和种间关系，包括：
(1) 竞争关系：在好氧生物处理中，当溶解氧或营养成为限制因子时，菌胶团细菌和丝状菌表现出明显的竞争关系。
(2) 原始合作关系（互生关系）：固氮菌具有固定空气中氮气的能力，但不能利用纤维素作碳源和能源，而纤维素分解菌分解纤维素为有机酸对他本身的生产繁殖不利，但当两者一起生活时，固氮菌固定的氮为纤维素分解菌提供氮源，纤维素分解菌分解纤维素的产物有机酸被固氮菌用作碳源和能源，也为纤维素分解菌解毒。
(3) 共生关系：原生动物中的纤毛虫类、放射虫类、有孔虫类与藻类共生。
(4) 偏害关系：乳酸菌产生乳酸使pH下降，抑制腐败细菌生长。
(5) 捕食关系：大原生动物吞食小原生动物。
(6) 寄生关系：蛭弧菌属有寄生在假单胞菌等菌体中的种。

第六章 微生物的遗传和变异
1. 什么是微生物的遗传性和变异性？遗传和变异的物质基础是什么？如何得以证明？
答：微生物将其生长发育所需要的营养类型和环境条件，以及对这些营养和外界条件产生的一定反应，或出现的一定性状传给后代，并相对稳定的一代一代传下去。这时微生物的遗传。
微生物从它适应的环境迁移到不适应的环境后，微生物改变自己对营养和环境条件的要求，在新的生活条件下产生适应新环境的酶，从而适应新环境并良好生长，这是遗传的变异。
DNA是遗传和变异的物质基础。可以从格里菲斯经典的转化实验和大肠杆菌T2噬菌体感染大肠杆菌的实验得到证明。

2. 微生物的遗传基因是什么？微生物的遗传信息是如何传递的？
答：微生物的遗传基因是微生物体内储存传递信息的、有自我复制功能的单位。从分子遗传学的角度看，微生物的遗传信息是通过DNA将决定各种遗传性状的信息传递给子代的。

3. 什么叫分子遗传学的中心法则？什么叫反向转录？
答：DNA的复制和遗传信息传递的基本规则，称为分子遗传学的中心法则。
只含RNA的病毒其遗传信息储存在RNA上，通过反转录酶的作用由RNA转录为DNA，这叫反向转录。

4. DNA是如何复制的？何谓DNA的变性和复性？
答：DNA的自我复制大致如下：首先是DNA分子中的两条多核苷酸链之间的氢键断裂，彼此分开成两条单链；然后各自以原有的多核苷酸链上的碱基排列顺序，各自合成出一条新的互补的多核苷酸链。新合成额一条多核苷酸链和原有的多核苷酸链又以氢键连接成新的双螺旋结构。
当天然双链DNA受热或其他因素的作用下，两条链之间的结合力被破坏而分开成单链DNA，即称为DNA的变性。
变性的DNA溶液经适当处理后重新形成天然DNA的过程叫复性。

5.微生物有几种RNA？它们各有什么作用？
答：RNA有4种：tRNA，rRNA，mRNA，反义RNA。
mRNA叫幸事RNA，作为多聚核苷酸的一级结构，其上带有指导氨基酸的信息密码，它反义氨基酸，具传递遗传性的功能。
tRNA叫转移RNA，其上有和mRNA互补的反密码子，能识别氨基酸及识别mRNA上的密码子，在tRNA-氨基酸合成酶的作用下传递氨基酸。
反义RNA起调节作用。决定mRNA翻译合成速度。
rRNA和蛋白质合成的核糖体为合成蛋白质的场所。
由tRNA，rRNA，mRNA，反义RNA协作合成蛋白质。
6. 微生物生长过程中蛋白质是如何合成的？细胞是如何分裂的？
答：(1) DNA复制：首先，决定某种蛋白质分子结构的相应一段DNA链的自我复制。
(2) 转录mRNA：转录是双链DNA分开，以它其中一条单链为模板遵循碱基配对的原则转录出一条mRNA。新转录的mDNA链的核苷酸碱基的排列顺序与模板DNA链的核苷酸碱基排列顺序互补。转录后，mRNA的顺序又通过三联密码子的方式由tRNA翻译成相应的氨基酸排列顺序，产生具有不同生理特性的功能蛋白。
(3) 翻译：翻译由tRNA完成，tRNA链上有反密码子与mRNA链上对氨基酸顺序编码的核苷酸碱基顺序互补。tRNA具有特定识别作用的两端：tRNA的一端识别特定的氨基酸，并与之暂时结合形成氨基酸-tRNA的结合分子。另一端上有三个核苷酸碱基顺序组成的反密码子。它识别mRNA上的互补的三联密码子，并与之暂时结合。
(4) 蛋白质合成：通过两端的识别作用，把特定氨基酸转送到核糖体上，使不同的氨基酸按照mRNA上的碱基顺序连接起来，在多肽合成酶的作用下合成多肽链，多肽链通过高度折叠形成特定的蛋白质结构，最终产生具有不同生理特性的功能蛋白。
由于DNA复制和蛋白质合成而使两者成倍增加后的一个有秩序的过程，即微生物细胞的分裂。微生物将成倍增加的核物质和蛋白质均等地分配给两个子细胞，在细胞的中部合成横膈膜并逐渐内陷，最终将两个子细胞分开，细胞分裂完成。

7. 微生物变异的实质是什么？微生物突变类型有几种？变异表现在哪些方面？
答：微生物变异的实质是基因突变。突变的类型有自发突变和诱发突变。表现在个体形态的变异、菌落形态的变异、营养要求的变异、对温度，pH要求的变异，毒力的变异，抵抗能力的变异，生理生化特性的变异以及代谢途径产物的变异等。

8. 废水处理中变异现象有哪几方面？
答：废水处理中变异现象有：有营养要求的变异；对温度，pH要求的变异；对毒物的耐毒能力的变异；个体形态和菌落形态的变异及代谢途径产物的变异等。

9. 什么叫定向培育和驯化？
答：定向培育是人为用某一特定环境长期处理某一微生物群体，同时不断将它们进行移种传代，以达到累积和选择合适的自发突变体的一种古老的育种方法。
定向培育在环境工程中称为驯化。

10. 试述紫外辐射杀菌的作用机理。
答：紫外辐射的波长范围是200~390nm，紫外辐射对微生物有致死作用是由于微生物细胞中的核酸、嘌呤、嘧啶、及蛋白质对紫外辐射有特别强的吸收能力。DNA和RNA对紫外辐射的吸收峰在260nm处，蛋白质对紫外辐射的吸收峰在280nm处.紫外辐射能引起DNA链上两个邻近的胸腺嘧啶分子形成胸腺嘧啶二聚体，致使DNA不能复制，导致微生物死亡。

11. DNA损伤修复有几种形式？各自如何修复？
答：(1) 光复活和暗复活：一部分损伤的DNA在蓝色区域可见光处，尤其510nm波长的光照的条件下，DNA修复酶将损伤区域两端的磷酸酯键水解，切割受损的DNA，将新的核苷酸插入，由连接好形成正常的DNA，这叫光复活。受损伤的DNA也可能在黑暗时被修复成正常的DNA。这叫暗复活。(2) 切除修复：在有Mg和ATP存在的条件下，uvrABC核酸酶在同一条单链上的胸腺嘧啶二聚体两侧位置，将包括胸腺嘧啶二聚体内的有12~13个核苷酸额单链切下。通过DNA多聚酶Ⅰ的作用，释放出被切割的12~13个核苷酸额单链。DNA连接酶缝合新合成的DNA片段和原有的DNA链之间的切割，完成修复。(3) 重组修复：受损伤的DNA先经复制，染色体交换，使子链上的空隙部分面对正常的单链，DNA多聚酶修复空隙部分成正常链。留在亲链上的胸腺嘧啶二聚体依靠切除修复过程去除掉。(4) sos修复：在DNA收到大范围重大损伤时诱导产生一种应急反应，使细胞内所有的修复酶增加合成量，提高酶活性。或诱导产生新的修复酶修复DNA受损伤的部分而成正常的DNA。(5) 适应性修复：细菌由于长期接触低剂量的诱变剂会产生修复蛋白（酶），修复DNA上因甲基化而遭受的损伤。

12. 何谓杂交、转化和转导？各自有什么实践意义？
答：杂交是通过双亲细胞的融合，使整套染色体的基因重组，或者是通过双亲细胞的沟通，使部分染色体基因重组。杂交育种将固氮基因转移给不固氮的微生物使它们具有固氮能力，对农业生产和缺氮的工业废水生物处理是很有意义的。
受体细胞直接吸收来自供体细胞的DNA片段，并把它整合到自己的基因组里，从而获得了供体细胞部分遗传性状的现象，称为转化。遗传和变异物质基础的经典实验是转化的突出例子。
通过温和噬菌体的媒介作用，把供体细胞内特定的基因携带至受体细胞中，使后者获得前者部分遗传性状的现象，称为转导。

13. 什么是质粒？在遗传工程中有什么作用？举例说明。
答：在原核微生物中，除有染色体外，还有令一种较小的，携带少量遗传基因的环状DNA分子叫质粒，也叫染色体外DNA。
质粒可以用来培育优良菌种，在基因工程中常被用作基因转移的运载工具——载体。
例：(1) 多功能超级细菌的构建。(2) 解烷抗汞粒菌的构建。(3) 脱色工程菌的构建。(4) Q5T工程菌。

14. 何谓基因工程？它的操作有几个步骤？
答：基因工程是指基因水平上的遗传工程。是用人工的方法把所需要的某一供体生物的DNA提取出来，在离体的条件下用限制性内切酶将离体DNA切割成带有目的基因的DNA片段，每一段平均长度有几千个核苷酸，用DNA连接酶把它和质粒的DNA分子在体外连接成重组的DNA分子，然后将重组体导入某一受体细胞中，以便外来的遗传物质在其中进行复制扩增和表达；而后进行重组体克隆筛选和鉴定；最后对外源基因表达产物进行分离提纯，从而获得新品种。它包括5个步骤：(1) 先从供体细胞中选择获取带有目的基因的DNA片段；(2) 将目的DNA的片段和质粒在体外重组；(3) 将重组体转入受体细胞；(4) 重组体克隆筛选和鉴定；(5) 外源基因表达产物的分离提纯。

15. 什么叫PCR技术？有几个操作步骤？
答：PCR技术称DNA多聚酶链式反应。是DNA体外扩增的技术。
步骤：(1) 加热变性：将待扩增的DNA置于94~95摄氏度的哥嫂问水浴中加热5分钟，使双键DNA解链为单链DNA，分开的两条单链DNA作为扩增的模板。
(2) 退火：将加热变性的单链DNA溶液的温度缓慢下降至55摄氏度后，在这过程中将引物DNA的碱基与单链模板DNA一端碱基互补配对。
(3) 延伸：在退火过程中，当温度下降至72摄氏度时，在耐热性TaqDNA多聚酶、适应的pH和一定的离子强度下，寡核苷酸引物碱基和模板DNA结合延伸成双链DNA。经过30~35次循环，扩增倍数达10，可将长达2kb的DNA由原来的1pg扩增到0.5~1μg。若经过60次循环，DNA扩增倍数可达10~10。

16. 基因工程和PCR技术在环境工程中有何实践意义？举例说明。
答：在环境保护方面利用基因工程获得了分解多种有毒物质的新型菌种。若采用这种多功能的超级细菌可望提高废水生物处理的效果。并在废水生物处理模拟实验中也取得一些成果。
PCR技术广泛运用于法医鉴定、医学检疫、环境监测等方面。

第二篇 微生物生态
第一章 微生物生态
1. 什么叫生态系统？生态系统有什么功能？什么叫生态圈？什么叫生态平衡？
答：生态系统是在一定时间和空间范围内由生物（包括动物、植物和微生物的个体、种群、群落）与它们的生境（包括光、水、土壤、空气及其他生物因子）通过能量流动和物质循环所组成的一个自然体。它的功能有生物生产、能量流动、物质循环和信息传递。
生存在地球陆地以上和海面以下约10km之间的范围，包括岩石圈、土壤圈、水圈和大气圈内所有生物群落和人以及它们生存环境的总体，叫生态圈。即使有外来感染，生态系统能通过自行调节的能力恢复到原来的稳定状态，这就是生态系统的平衡，即生态平衡。

2. 为什么说土壤是微生物最好的天然培养基？土壤中有哪些微生物？
答：因为土壤具有微生物所必需的营养和微生物生长繁殖及生命活动所需要额各种条件，所以说土壤是微生物最好的天然培养基。土壤中的微生物有细菌，放线菌，真菌，藻类，原生动物和微型动物。

3. 什么叫土壤自净？土壤被污染后其微生物群落有什么变化？
答：土壤对施入其中的一定负荷的有机物或有机污染物具有吸附和生物降解能力，通过各种物理、生化过程自动分解污染物使土壤恢复到原有水平的净化过程，称为土壤自净。
土壤被污染后，土壤的微生物区系和数量发生改变，并诱导产生分解各种污染物的微生物新品种。

4. 土壤是如何被污染的？土壤污染有什么危害？
答：土壤污染的主要来在含有有机毒物和重金属的污水和废水的农田灌溉；来自含有有机毒物和重金属的污、废水的土地处理；来自固体废物的堆放和填埋等的渗漏液；来自地下储油罐泄漏和以及农药喷洒。
危害：(1) 有机、无机毒物过多滞留、积累在土壤中，改变了土壤的理化性质，使土壤盐碱化，板结。毒害植物和土壤微生物，破坏土壤生态平衡。(2) 土壤中的毒物被植物吸收、富集、浓缩，随食物链迁移，会转移到人体；或被雨水冲刷流入河流、湖泊或渗入地下水，进而造成水体污染。污染物又随水源进入人体，毒害人类。(3) 污水和废水中含有的各种病原微生物虽然有些在土壤中不适应而死亡，但有些可在土壤中长时间存活，它们可以通过各种途径转移到水体，进而进而人体，引起人的疾病。

5. 什么叫土壤生物修复？为什么要进行土壤修复？
答：土壤生物修复是利用土壤中土壤中的天然微生物资源或人为投加目的菌株，甚至用构建的特异降解功能菌投加到各污染土壤中，将滞留的污染物快速降解和转化，使土壤恢复其天然功能。
因为土壤受污染后会造成：(1) 有机、无机毒物过多滞留、积累在土壤中，改变了土壤的理化性质，，使土壤盐碱化，板结。毒害植物和土壤微生物，破坏土壤生态平衡。(2) 土壤中的毒物被植物吸收、富集、浓缩，随食物链迁移，会转移到人体；或被雨水冲刷流入河流、湖泊或渗入地下水，进而造成水体污染。污染物又随水源进入人体，毒害人类。3.污水和废水中含有的各种病原微生物虽然有些在土壤中不适应而死亡，但有些可在土壤中长时间存活，它们可以通过各种途径转移到水体，进而进而人体，引起人的疾病。所以要进行土壤修复。

6. 土壤生物修复技术关键有哪些方面？
答：土壤生物修复的技术的关键有四个方面：(1) 微生物物种；(2) 微生物营养：一般土壤微生物额碳氮比25：1, 污水好氧生物处理的BOD5：N：P=100：5：1；(3) 溶解氧；(4) 微生物的环境因子。

7. 空气微生物有哪些来源？空气中有哪些微生物？
答：空气中微生物的来源很多，尘土飞扬可将土壤微生物带至空中，小水滴飞溅将水中微生物带至空中，人和动物身体的干燥脱落物，呼吸道口腔内含微生物的分泌物通过咳嗽、打喷嚏等方式飞溅到空气中。敞开的污水生物处理系统通过机器搅拌，鼓风曝气等可使污水中的微生物以气溶胶的形式飞溅到空气中。
主要有芽孢杆菌、霉菌和放线菌的孢子、野生酵母菌、原生动物和微型后生动物的胞囊。

8. 空气中有哪些致病微生物？以什么微生物为空气污染指示菌？
答：空气中有白色葡萄球菌、金色葡萄球菌、绿脓杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌、白喉杆菌、肺炎球菌及结核杆菌、病毒粒子、阿米巴胞囊、立克次氏体等。以绿色链球菌为空气污染指示菌。

9. 水体中微生物有几方面来源？微生物在水体中的分布有什么样的规律？
答：水体中微生物的来源有：水体中固有的微生物、来自土壤的微生物、来自生产和生活的微生物、来自空气的微生物。据海面0~10m的深处因受阳光照射含菌量较少，浮游藻类较多。5~10m以下至25~50m处的微生物数量较多，而且随海水深度的增加而增加，50m以下微生物的数量随海水深度增加而减少。

10. 什么叫水体自净？可根据哪些指标判断水体自净程度？
答：河流接纳了一定量的有机污染物后，在物理、化学和水生物等因素的综合作用后得到净化，水质恢复到污染前的水平和状态，叫做水体自净。判断水体自净程度的指标有P/H指数和氧浓度昼夜变化幅度和氧垂曲线。

11. 水体污染的指标有哪几种？污化系统分为那几“带”？各“带”有什么特征？
答：水体污染的指标有：BIP指数、细菌菌落总数、总大肠菌群。
多污带：多污带位于排污口之后的区段，水呈暗灰色，很浑浊，含有大量有机物，BOD高，溶解氧极低，为厌氧状态。
α-中污带：α-中污带在多污带的下游，水为灰色，溶解氧少，为半厌氧状态，有机物量减少，BOD下降，水面上有泡沫和浮泥，有NH3、氨基酸及H2S，生物种类比多污带稍多。细菌数量较多。
β-中污带：β-中污带在α-中污带之后，有机物量较少，BOD和悬浮物含量低，溶解氧浓度升高，NH3和H2S含量减少，细菌数量减少，藻类大量繁殖，水生动物出现。
寡污带：寡污带在β-中污带之后，标志者河流自净过程已完成，有机物全部无机化，BOD和悬浮物含量极低，细菌极少，水的浑浊度低，溶解氧恢复到正常含量。

12. 什么叫水体富营养化？评价水体富营养化的方法有几种？
答：水体富营养化是指在人类活动的影响下，生物所需的氮、磷等营养物质大量进入湖泊、河口、海湾等缓流水体，引起藻类及其他浮游生物迅速繁殖，水体溶解氧量下降，水质恶化，鱼类及其他生物大量死亡的现象。
评价方法有：观察蓝藻等指示生物，测定生物的现存量，测定原初生产力，测定透明度，测定氮磷等导致富营养化的物质。

13. AGP是何意？如何测定AGP？
答：AGP是藻类生产的潜在能力。把特定的藻类接种在天然水体或废水中，在一定的光照度和温度条件下培养，使藻类增长到稳定期为止，通过测干重或细胞数来测其增长量。
将培养液用滤膜或高压蒸汽灭菌器除去SS和杂菌。取500ml置于L型培养管，接入羊角月牙藻，将培养管放在往复振荡器上，在20°C，光照度为4000~6000lx条件下震荡培养7~20d后，取适量培养液用滤膜过滤，置于105°C烘至衡重，称干重，计算一升藻类中的干重为该水样的AGP。

第二章 微生物在环境物质循环中的作用
1. 什么叫生态系统？生态系统有什么功能？什么叫生态圈？什么叫生态平衡？
答：生态系统是在一定时间和空间范围内由生物（包括动物、植物和微生物的个体、种群、群落）与它们的生境（包括光、水、土壤、空气及其他生物因子）通过能量流动和物质循环所组成的一个自然体。它的功能有生物生产、能量流动、物质循环和信息传递。
生存在地球陆地以上和海面以下约10km之间的范围，包括岩石圈、土壤圈、水圈和大气圈内所有生物群落和人以及它们生存环境的总体，叫生态圈。即使有外来感染，生态系统能通过自行调节的能力恢复到原来的稳定状态，这就是生态系统的平衡，即生态平衡。

2. 为什么说土壤是微生物最好的天然培养基？土壤中有哪些微生物？
答：因为土壤具有微生物所必需的营养和微生物生长繁殖及生命活动所需要额各种条件，所以说土壤是微生物最好的天然培养基。土壤中的微生物有细菌，放线菌，真菌，藻类，原生动物和微型动物。

3. 什么叫土壤自净？土壤被污染后其微生物群落有什么变化？
答：土壤对施入其中的一定负荷的有机物或有机污染物具有吸附和生物降解能力，通过各种物理、生化过程自动分解污染物使土壤恢复到原有水平的净化过程，称为土壤自净。
土壤被污染后，土壤的微生物区系和数量发生改变，并诱导产生分解各种污染物的微生物新品种。

4. 空气中微生物的分布数量与什么因素有关？空气中有哪些微生物？又有哪些致病微生物？
答：室外空气中的微生物数量和环境卫生状况、环境绿化程度有关。室内的与人员密度、空气流通程度。室内卫生状况有关。空气中主要有芽孢杆菌、霉菌和放线菌的孢子、野生酵母菌、原生动物和微型后生动物的胞囊。空气中有白色葡萄球菌、金色葡萄球菌、绿脓杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌、白喉杆菌、肺炎球菌及结核杆菌、病毒粒子、阿米巴胞囊、立克次氏体等致病微生物。

5. 水体中微生物分布有什么样的规律？
答：据水面0~10m的深处因受阳光照射含菌量较少，浮游藻类较多。5~10m以下至25~50m处的微生物数量较多，而且随水深度的增加而增加，50m以下微生物的数量随水深度增加而减少。

6. 什么叫水体自净？可根据哪些指标判断水体自净程度？
答：河流接纳了一定量的有机污染物后，在物理、化学和水生物等因素的综合作用后得到净化，水质恢复到污染前的水平和状态，叫做水体自净。判断水体自净程度的指标有P/H指数和氧浓度昼夜变化幅度和氧垂曲线。

7. 污化系统分为那几“带”？各“带”有什么特征？
答：多污带：多污带位于排污口之后的区段，水呈暗灰色，很浑浊，含有大量有机物，BOD高，溶解氧极低，为厌氧状态。
α-中污带：α-中污带在多污带的下游，水为灰色，溶解氧少，为半厌氧状态，有机物量减少，BOD下降，水面上有泡沫和浮泥，有NH、氨基酸及HS，生物种类比多污带稍多。细菌数量较多。
β-中污带：β-中污带在α-中污带之后，有机物量较少，BOD和悬浮物含量低，溶解氧浓度升高，NH3和H2S含量减少，细菌数量减少，藻类大量繁殖，水生动物出现。
寡污带：寡污带在β-中污带之后，标志者河流自净过程已完成，有机物全部无机化，BOD和悬浮物含量极低，细菌极少，水的浑浊度低，溶解氧恢复到正常含量。

8. 水体污染的指标有哪几种？什么叫水体富营养化？
答：水体污染的指标有：BIP指数、细菌菌落总数、总大肠菌群。
水体富营养化是指在人类活动的影响下，生物所需的氮、磷等营养物质大量进入湖泊、河口、海湾等缓流水体，引起藻类及其他浮游生物迅速繁殖，水体溶解氧量下降，水质恶化，鱼类及其他生物大量死亡的现象。

9. 在环境工程中有哪些人工生态体系？
答：活性污泥和生物膜是环境工程中的人工生态体系。
10. 活性污泥是什么？活性污泥有哪些微生物群落？
答：活性污泥是由多种多样的好氧微生物和兼性厌氧微生物与污（废）水中有机的和无机固体物混凝交织在一起，形成的絮状体或称绒粒。
微生物群落有酵母菌、霉菌、放线菌、藻类、原生动物和某些微型后生动物。

11.生物膜是什么？生物膜有哪些微生物群落？
答：生物膜是由多种多样的好氧微生物和兼性厌氧微生物粘附在生物滤池滤料上或粘附在生物转盘盘片上的一层带粘性、薄膜状的微生物混合群体。
微生物群落有浮游球衣菌、藻类、固着性纤毛虫、游泳性纤毛虫、轮虫、线虫、寡毛类的沙蚕等。

12. 菌胶团和原生动物在污水生物处理和水体自净过程中各起什么作用？
答：菌胶团：有很强的生物吸附能力和氧化分解有机物的能力。为原生动物和微型后生动物提供了良好的生存环境。具有指示作用：可以衡量活性污泥的性能。
原生动物：有指示作用、净化作用、促进絮凝和沉淀的作用。

13. 详述纤维素的好氧和厌氧分解过程。有哪些微生物和酶参与?
答：纤维素好氧分解：纤维素在纤维素酶的作用下分解为纤维二糖，在纤维二糖酶的作用下分解为葡萄糖，再进入三羧酸循环成为ATP、水、二氧化碳。
微生物与酶：粘细菌、镰状纤维菌、纤维弧菌。纤维素酶、纤维二糖酶、氧化酶、脱氢酶、脱羧酶细胞色素氧化酶。
厌氧分解：厌氧发酵成为葡萄糖，葡萄糖经丙酮丁醇发酵成为：丙酮、丁醇、乙酸、水、二氧化碳。葡萄糖经丁酸发酵，生成丁酸、乙酸、水、二氧化碳。
微生物：产纤维二糖芽孢梭菌、无芽孢厌氧分解菌、嗜热纤维芽孢梭菌。

14.详述淀粉的好氧和厌氧分解过程。有哪些微生物和酶参与?
答：在好氧条件下，淀粉水解成葡萄糖，进而发酵成丙酮酸，经三羧酸循环完全氧化成水、二氧化碳。在厌氧条件下。淀粉经乙醇发酵，生成乙醇和二氧化碳。在专性厌氧菌的作用下葡萄糖经丙酮丁醇发酵成为：丙酮、丁醇、乙酸、水、二氧化碳。葡萄糖经丁酸发酵，生成丁酸、乙酸、水、二氧化碳。
微生物和酶：好氧条件下：枯草芽孢杆菌、根酶、曲霉、α-淀粉酶、脱支酶。厌氧条件下：丙酮丁醇梭状芽孢杆菌、丁醇梭状芽孢杆菌、丁酸梭状芽孢杆菌、β-淀粉酶、葡萄淀粉酶。

15. 脂肪酸是如何进行β-氧化的？其能量如何平衡？
答：脂肪酸先是被脂酰硫激活酶激活，然后α、β碳原子上脱氢、加水、脱氢、再加水，最后在α、β碳位之间的碳链断裂，生成1mol乙酰辅酶A和碳链较原来少两个碳原子的脂肪酸。乙酰辅酶A经三羧酸循环完全氧化成水、二氧化碳。剩下的碳链较原来少两个碳原子的脂肪酸可重复一次β-氧化，以至完全形成乙酰辅酶A而告终。
第一次β-氧化可以得到16molATP，其后的每次可以得到17molATP。

16.复杂有机物的沼气发酵三阶段理论内容是什么？甲烷可通过哪些途径形成？
答：第一阶段：水解酸化阶段，微生物为水解和发酵细菌，包括纤维素分解菌、碳水化合物分解菌、蛋白质分解菌，为专性、兼性厌养菌，分解产物为简单小分子的单糖、氨基酸、脂肪酸、甘油及CO2、H2等。
第二阶段：产氢产乙酸阶段，微生物为产氢产乙酸菌（为专性、兼性厌养菌），分解产物为乙酸、丙酸、甲酸、乙醇、丙醇和CO2、H2等。
第三阶段：产甲烷阶段，微生物为二组生理作用不同的产甲烷菌，为绝对厌养菌，包括甲烷杆菌、球菌、八叠球菌等。其中一组把氢和CO2转化为甲烷和水；另一组使乙酸脱羧产生甲烷和CO2。
形成途径：由酸和醇的甲基生成；由醇的氧化使二氧化碳还原形成；脂肪酸有时用水做还原剂或供氢体产生；利用氢使二氧化碳还原；在氧和睡存在时，巴氏甲烷八叠球菌与甲酸甲烷杆菌能将一氧化碳还原成甲烷。

17. 何谓氨化作用、硝化作用、反硝化作用、固氮作用？它们各由哪些微生物起作用？
答：氨化作用：有机氮化合物在氨化微生物的脱氨基作用下产生氨。微生物：梭状芽孢杆菌。
硝化作用：氨基酸脱下的氨，在有氧条件下，经亚硝酸细菌和亚硝酸细菌的作用转化为硝酸。微生物：亚硝酸单胞菌属、亚硝酸球菌属、亚硝酸螺菌属、亚硝酸叶菌属、亚硝酸弧菌属、硝化杆菌属、硝化杆球属。
反硝化作用：兼性厌氧的硝酸盐还原细菌将硝酸盐还原成氮气。微生物：施式假单胞菌，脱氮假单胞菌，荧光假单胞菌，紫色杆菌，脱氮色杆菌。
固氮作用：在固氮微生物的固氮没催化作用下，把分子氮转化为氨，进而合成有机氮化合物。微生物：根瘤菌、园褐固氮菌、黄色固氮菌、拜叶林克氏菌属、万氏固氮菌。

18. 什么叫硫化作用？参与硫化作用有哪些微生物？
答：硫化作用：