DB4113∕T 008-2021 牛人工授精技术操作规范(南阳市).pdf

ICS 65.020.30 CCS B43 4113 南阳市地方标准 DB 4113/T 0082021 牛人工授精技术操作规范 2021 - 11 - 22 发布 2021 - 11 - 30 实施 南阳市市场监督管理局 发 布 DB 4113/T 0082021 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。 本文件由南阳市农业农村局提出并归口。 本文件起草单位：南阳黄牛科技中心、南阳市动物卫生监督所、南阳市宛城区动物卫生监督所、内乡县动物疫病预防控制中心、南阳市卧龙区石桥镇农业农村服务中心、桐柏县农业农村局。 本文件主要起草人：王海利、王伟廉、孙志和、李清兰、马震、丁煦峰、陈希鹃、胡军、张蔚、张云征、苏新路、唐建伟、杜世泰、王哲、徐玉村、张宾、马军生、姜林、王健懿、袁虎。 DB 4113/T 0082021 1 牛人工授精技术操作规范 1 范围 本文件规定了牛人工授精站（点）设施设备、输精前准备、输精、繁殖母牛配种年龄及体重、发情鉴定、授精时间、妊娠检查等要求。 本文件适用于南阳市牛人工授精操作运用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4143 牛冷冻精液 GB/T 5458 液氮生物容器 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 冻精 将收集的原精液用稀释液等温稀释、平衡后快速冷冻、分装，在液氮中保存。 输精 用器械将公畜精液输送到发情母畜子宫适当部位的操作。 发情 母牛发育到一定时期，表现出周期性的生理活动。 妊娠 指从受孕至分娩的生理过程。 配种 使雌雄动物的生殖细胞结合而繁殖后代。 冻精解冻 使冻精重新恢复活力的处理方法。 4 人工授精站（点）设施设备 DB 4113/T 0082021 2 贮存要求 冻精贮存在装有足够液氮的生物贮存容器中， 定期检查， 及时添加液氮 （液氮保存按照GB/T 5458） 。 设施设备 应配备液氮生物容器、显微镜、输精枪、输精枪套、解冻盒、润滑油、镊子、细管剪、温度计、一次性长臂塑料手套或长臂胶手套等器具。 5 输精前的准备 输精设备的清洗消毒 5.1.1 各种输精设备使用后，先用肥皂水或 2的小苏打水洗刷除污， 再用温开水冲洗干净。 5.1.2 玻璃、金属器械、胶球(用纱布包好)和布类用蒸汽灭菌 30min 或干热灭菌。金属和玻璃器械也可用 75的酒精擦拭和吸注消毒，并在酒精火焰上烘干。 5.1.3 每 1 头母牛应使用 1 支消毒过的输精枪、一次性使用塑料外套管、长臂塑料手套或长臂胶手套（消毒）。 母牛准备 5.2.1 将输精母牛固定在保定架内，用细绳拴好尾巴拉向一侧固定。 5.2.2 对输精母牛肛门及外阴清洗、消毒后擦干。 冻精准备 5.3.1 冻精应来自于取得省级以上农业农村行政主管部门颁发的种畜禽生产经营许可证的冻精生产站（点）。 5.3.2 冻精冻后活力不能低于 0.35，每周应检查一次冻精的活力。每次输精量为冻精细管 1 支。（冻精要求按照 GB 4143） 5.3.3 根据母牛的品种、胎次、往配情况决定冻精的选择。 冻精解冻 5.4.1 解冻盒内水浴温度 应在3840范围内。 5.4.2 取冻精 取下液氮罐盖，选择冻精袋，将冻精袋提到冷冻线上方（不能把冻精袋拿出罐口外），用镊子选出所需冻精细管，取出冻精细管迅速放入解冻盒内(选、取冻精应在5s内完成）。 5.4.3 解冻 轻轻摇动解冻盒15s，放置15min20min之内使用（解冻后的冻精细管在使用前应镜检活力，活力不低于0.35），解冻后的冻精细管不应再冷冻。 5.4.4 装枪 DB 4113/T 0082021 3 将冻精细管从解冻盒中取出，干净纸巾吸干，核对冻精细管标记的品种、生产日期及公牛号。将输精枪回拉撞针至120mm180mm，快速将细管棉塞端穿入枪内。把装好的输精枪垂直握在齐眼高，用清洁的细管剪剪去细管的封口端。 用带有防污外套膜的枪套将枪管套上， 用手捻枪套向下直到枪的圆锥座处，并确认紧固。将装好的输精枪放在保温箱上备用。 6 输精 配种员准备 配种员将手指甲剪短、磨光，长臂手套套在拟进入直肠操作的手臂上，放入温水中加温，并涂少量润滑油。 输精操作 6.2.1 拟进入直肠操作的手缓缓按摩外阴部，并拢手指形成锥形，缓缓进入直肠，直至手腕位置，手腕按压外阴，使外阴张开，另一只手持输精枪斜向上 30插入阴道（输精枪头在进入阴道时不能与阴门外壁接触）。当输精枪进入阴道 15cm20cm，将枪的后端适当抬起，撕掉防污外套膜，使枪头从外套膜前端穿出，然后继续向前推至子宫颈外口。 6.2.2 当枪头到达子宫颈时，能感觉到不同于软组织的较硬的子宫颈穹隆顶住输精枪。这时在直肠内的手握住子宫颈，用枪头轻柔触碰穹隆并找到子宫颈口，当枪通过子宫颈口时，用直肠内手的中指和食指将子宫颈的前端定位，另一只手轻柔将枪向前推进，推进不畅时，左手虚握子宫颈使之平直，轻柔试探推进，直到枪头到达子宫体部位（如有必要可小心地推到卵泡端子宫角处）。 6.2.3 排放精液应缓慢，排完后停顿 5s，然后将枪缓缓拉出，手臂慢慢地从直肠中退出。检查输精枪套内是否有精液回流，如有回流，重新输精一支。检查枪套管上是否沾有异常血液或脓液。做好记录。 6.2.4 使用过的空冻精管、 枪套、 纸巾、 脏手套放入指定地点或污物箱内。 对输精枪进行清洗和消毒，放入工具箱内。 输精操作注意事项 6.3.1 操作动作温和、轻柔，不能过于用力。 6.3.2 操作过程要疏缓放松，不能着急。 7 配种年龄及体重 配种年龄 南阳牛因导入外血不同。其配种年龄不同，一般比较早熟的改良肉牛（如导入皮埃蒙特牛、安格斯牛外血）应在1415月龄初配，相对晚熟改良肉牛（如导入西门塔尔牛、夏洛莱牛外血）应在1518月龄初配。 配种体重 母牛体重应达到350kg400kg（成年母牛体重的70%以上）。 8 发情鉴定 DB 4113/T 0082021 4 外部观察法 8.1.1 发情初期：母牛兴奋不安，追爬其他母牛，但拒绝爬跨；阴户肿胀，粘液透明，不呈牵丝状，粘性强。 8.1.2 发情盛情：母牛温顺，接受爬跨，阴户肿胀。粘液透明，量多，呈牵丝状，粘性强。 8.1.3 发情末期：母牛拒绝爬跨，阴户肿胀消退，粘液半透明、粘稠，粘性差，牵丝较短。 试情法 将试情公牛接近母牛，如母牛喜靠公牛，并作弯腰弓背姿势，表示该母牛可能发情。 阴道检查法 用消毒的阴道开膣器来观察阴道的粘膜、分泌物和子宫颈口的变化。发情母牛阴道黏膜充血潮红，表面光滑湿润； 子宫颈外口充血、 松弛、 柔软开张， 排出大量透明的纤维性粘液， 如玻棒状 （俗称吊线） ，不易折断。粘液最初稀薄，随着发情时间的推移，逐渐变稠，量也由少变多，到发情后期，量逐渐减少且粘性差，颜色不透明，有时含淡黄色细胞碎屑或微量血液。不发情的母牛阴道苍白、干燥，子宫颈口紧闭，无粘液流出。 直肠检查法 检查者应将指甲剪短、 磨光、 戴上长臂手套， 涂润滑剂， 先用手抚摸肛门， 然后将手指并拢成锥形，以缓慢的旋转动作伸入肛门，掏出粪便；再将手伸入肛门，手掌展平，掌心向下，按压抚摸，在骨盆腔底部可摸到一个长圆形质地较硬的棒状物， 即为子宫颈。 沿子宫颈再向前摸， 在正前方可摸到一个浅沟，即为角间沟。沟的两旁为向前向下弯曲的两侧子宫角；沿着子宫角大弯向下稍向外侧，可摸到卵巢。用手指检查子宫角的形状、大小、反应以及卵巢上卵泡的发育情况，来判断母牛的发情。 8.4.1 发情判定 8.4.1.1 发情初期：在子宫角的两侧，可摸到两个卵巢，卵巢上发育的卵泡突出卵巢表面，光滑，触 8.4.1.2 摸时略有波动，卵泡直径 0.5cm 左右，触诊时为一软化点。 8.4.1.3 发情盛期：卵泡增大到 1cm1.5cm，呈圆形，明显突出于卵巢表面，波动明显。 8.4.1.4 发情末期：卵泡不再增大，泡壁变薄，紧张度增加，有一触即破之感。 8.4.1.5 不发情的母牛，子宫颈细而硬，子宫较松弛，收缩反应差。 8.4.2 直肠检查注意事项 8.4.2.1 在直肠内触摸时应用指肚进行，不应用手指强抓，以免损伤直肠粘膜。在母牛努责（排粪动 8.4.2.2 作）或肠管收缩时不应将手臂硬向里推，可待努责或收缩停止后再继续检查。 8.4.2.3 一般发情正常的母牛采用外部观察就可准确的鉴定发情，对屡配不孕的牛采用直肠检查，但 8.4.2.4 应动作轻柔，防止触破卵泡，并结合外部表现判定发情及预测排卵时间。 9 输精时间 应在发情结束或即将结束时输精。即早上发情的牛在当天下午配种，下午发情的牛在第2天早上配种。年轻母牛应授精晚，老龄母牛应授精早。 DB 4113/T 0082021 5 10 妊娠检查 外部观察法 10.1.1 母牛配种后 2、3 个情期仍未出现发情者，可初步认为妊娠。 10.1.2 母牛妊娠 3 个月后，性情变得温顺，食欲增加，被毛出现光泽。妊娠 5、6 个月后，腹围增大，右侧腹壁突出，可在腹壁触到或看到胎动。 直肠检查法 10.2.1 母牛妊娠 1 个月，两侧子宫角不对称，角间沟清楚。孕角较空角稍大变粗、柔软，有液体波动感，弯曲度变小。孕侧卵巢较大，有黄体突出于表面。子宫中动脉如麦秆粗。 10.2.2 母牛妊娠 2 个月，孕角比空角粗约两倍。角间沟平坦。孕角薄软，波动明显。孕侧卵巢较大，有黄体。孕侧子宫中动脉增粗一倍。 10.2.3 母牛妊娠 3 个月，孕角大如婴儿头，波动感明显，子宫开始沉入腹腔，角间沟已摸不清楚。孕侧子宫中动脉增粗 2 至 3 倍，有时可摸到特异博动。 激素诊断法 在配种21d27d， 肌肉注射促黄体素释放激素200ug500ug， 观察35d内是否返情， 返情即为空怀，否则为妊娠。 阴道检查法 母牛配种后1个月进行检查，已妊娠的母牛是当开膣器插入阴道时，阻力明显，有干涩之感；阴道黏膜苍白，无光泽；子宫颈口偏向一侧，呈闭锁状态，为灰暗浓稠的黏液所封闭。 实验室诊断法 收取配种30d母牛鲜尿液10ml，盛入试管中，然后滴入2ml 7碘酒溶液，充分混合5min6min，在亮处观察试管中溶液的颜色，呈暗紫色为妊娠；不变色，或稍带碘酒色为未妊娠。 B 超诊断法 线阵超声波法用于18d120d妊娠诊断，扇形超声波法用于怀孕后30d120d妊娠诊断。其操作：超声探头慢慢送入直肠，隔着直肠壁依次扫查左右子宫角、卵巢，对图像不确定时，反复缓慢移动探头。依据特有的波型图像判断空怀或怀孕。 11 记录 做好配种生产记录。见附录A。 DB 4113/T 0082021 6 A A 附录A （资料性） 母牛配种记录表 见表A.1。 表A.1 编号 时间 场名称（户主） 品种 年龄 体重 胎次 发情时间 输精时间 种牛编号 冻精来源 复配时间 产犊日期 犊牛性别