实验_抗药性突变株.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,大肠杆菌化学诱变处理与抗药性突变株的筛选,实验目的,了解生物基因突变的概念及种类。,掌握诱发突变的操作技术。,1,、物理诱变：,紫外线、,X,射线、,射线，快中子,物理因素中目前使用得最方便而且十分有效的是紫外线。许多高产菌株的选育都用过紫外线，对于一般实验室、中小型工厂都适用，也很安全。,其他的几种射线都是电离性质的，有一定的穿透力，一般都由专业人员在专门的设备中使用，否则有一定危险性。,2,、化学诱变：,碱基类似物、,5,氟尿嘧啶、烷化剂等。,常用,诱变剂：,亚硝酸、硫酸二乙酯、亚硝基胍等,诱变机制,注意事项：,选择适宜的诱变剂及剂量，适当的温度,和,PH,，,终止反应，安全,化学诱变剂中使用最多、最有效的是烷化剂。,使用化学诱变剂的优缺点：,1,、大多数情况下，就突变数量而言，要比电离辐射更有效。,2,、化学诱变剂是很经济的，因为只需要少量的合适的诱变剂，设备是实验室的一般玻璃器皿，一个蒸气罩。而用电离辐射,行工作时，设备费用大，并要注意安全性。,3,、大部分诱变剂是致癌剂，所以在使用中必须非常谨慎，要避免化学诱变剂与皮肤接触，且切勿吸入其蒸气，有人对某些诱变剂极其敏感，甚至未直接接触就会过敏，这就更要当心。,3,、生物诱变：,插入序列，转座子，转座,phage,等。,实验材料,菌种：,E.coli,试剂：,0.2M NaNO2,，,1M,HAc,缓冲液，,0.7M Na2HPO4,链霉素（,Str,100mg/ml,）,材料：,牛肉膏蛋白胨培养基,平板,离心管,无菌水,移液器,实验方法,Str,梯度平板的制备,倒,10ml,无,str,的培养基于平皿中，倾斜放置。待凝固后加入,10ml,含,100ug/ml,str,的培养基（含有,str,的培养基需置于,55,度水浴保温），铺平冷却。,菌悬液的制备,吸取,10ml,菌液于离心管中，无菌操作，,10000rpm,，离心,2min,。加入等量无菌水溶菌。,NaNO2,诱变,取以上清洗后的菌悬液,2ml,于一个已灭菌的大离心管中，加,2ml,已水浴灭菌过的,1M,HAc,缓冲液和,不同体积（,0V,0.05V,，,0.1V,，,0.5V,）,的已过灭菌的,0.2M NaNO2,溶液作用,10min,，然后用,0.7M Na2HPO4(or 0.1M,NaOH,),使,pH 7.0,。,用,2ml,无菌水将以上菌体清洗,3,次后，取,100ul,涂布于上述的,str,梯度平板。,待菌液吸收后，于,37oC,培养箱,48hr.,将平板等分成五个区，完成下表。,No.of CFU,Str,区域,NaNO2,浓度,1,2,3,4,5,0V,0.05V,0.1V,0.5V,