病毒感染的检查方法与防治原则优质PPT课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,病毒感染的检查方法与防治原则,重点及难点,标本的采集和送检,病毒分离培养方法,病毒感染的血清学诊断方法,人工主动免疫和被动免疫及其常用制剂,第一节 病毒感染的检查方法,标本的采集与送检,病毒的分离与鉴定,病毒感染的诊断,一、标本的采集与送检,采集急性期标本,使用抗生素,冷藏保存，快速送检,采集双份血清,二、病毒的分离与鉴定,（一）病毒的分离培养,动物接种,鸡胚培养,细胞培养,动物接种,应用：无敏感细胞培养的病毒,优点：结果易观察，可建立动物模型,缺点：要有饲养条件，费用高，有潜伏病毒，,对许多人类病毒不敏感,动物接种,鸡胚培养,优点：对多种病毒敏感，条件易控制，操作,简单，成本较低,缺点：无病毒增殖指标；有些病毒可致鸡胚,死亡,鸡胚接种部位示意图,单层细胞,悬浮细胞,根据细胞生长情况,原代细胞,二倍体细胞,传代细胞系,根据细胞来源、,染色体特征及,传代次数,细胞培养,1.,原代细胞,primary cells,对多种病毒敏感,来源困难,获取成本高,可携带潜伏病毒,2.,二倍体细胞,diploid cells,对多种病毒敏感,不带病毒，无致癌潜能,用于病毒疫苗生产,3.,传代细胞,continuous cell,对多种病毒敏感,繁殖能力高，传代时间长,不能用于病毒疫苗生产,病毒在培养细胞中的增殖指征,:,细胞病变,红细胞吸附,病毒干扰作用,细胞代谢的改变,细胞病变效应,cytopathic effect,CPE,正常细胞,细胞病变早期,细胞病变晚期,红细胞吸附,hemadsorption,带有血凝素的病毒感染细胞后，能与脊椎动物红细胞结合,鸡红细胞吸附于流感病毒感染的细胞,风疹病毒,人胚肾细胞CPE,(,),埃可病毒,人胚肾细胞CPE,(,),人胚肾细胞,埃可病毒,CPE(-),CPE(+),待检标本,风疹病毒,(-),风疹病毒,(+),病毒干扰作用,viral interference,某些病毒不引起,CPE,但可干扰感染同一细胞另一病毒增殖，抑制该病毒的,CPE,。,（二）病毒的鉴定,形态学鉴定,血清学鉴定,分子生物学鉴定,1,.,形态学鉴定,光学显微镜 巨细胞病毒包涵体,透射电镜,SARS,病毒,Ab,方法包括,Ag,2,.,血清学鉴定,用已知特异性抗体对病毒进行种,、,型和亚型的鉴定,ELISA,中和试验,血凝抑制试验,补体结合试验,方法包括,3,.,分子生物学方法鉴定,对病毒的蛋白抗原、核算进行检测,蛋白印迹技术,核酸扩增,核酸杂交,基因芯片,基因测序,新病毒的鉴定,核酸类型的测定,理化性状的检测,基因测序和生物对比,（三）病毒数量与感染性测定,50%,组织细胞感染量,红细胞凝集实验,空斑形成试验,1,.,50,组织细胞感染量,50,tissue culture infectious dose,TCID,50,原理：测定,50%,细胞出现,CPE,的最小病毒量,以,CPE,作指标，判断病毒感染性和毒力,测定活病毒数量,+-,-,2,.,红细胞凝集实验,red cell agglutination test,原理：测定使红细胞发生凝集的最小病毒量,测定病毒总量（活病毒,+,死病毒）,凝集效价：能使红细胞呈,+,凝集的病毒最高稀释度为凝集效价，该稀释度记为一个血凝单位,3,.,空斑形成试验,plaque formation test,原理：将适量病毒接种单层细胞，病毒增殖使感染的细胞脱落，形成肉眼可见的空斑,空斑形成单位（,plaque formatting unit,，,PFU,）：由一个感染病毒增殖所致,测定活病毒数量,三、病毒感染的诊断,形态学检查,病毒成分检测,血清学诊断,（一）形态学检查,电镜和免疫电镜检查,光学显微镜检查,（二）病毒成分检测,病毒蛋白抗原检测,EIA,、,FIA,、,Wb,病毒核酸检测,核酸扩增技术,核酸杂交技术,基因芯片技术,基因测序技术,（三）血清学诊断,中和试验,血凝抑制试验,补体结合试验,凝胶免疫扩散试验,特异性,IgM,抗体检测,血清学诊断的用途,分离病毒为时已晚,无法分离或难以分离的病毒,证实分离病毒的临床意义,血清流行病学调查,原理：,病毒中和抗体 病毒失去感染性,1,.,中和试验,neutralizing test,检测血清中抗体的水平,鉴定未知病毒,对病毒进行半定量,较少用于临床诊断，用于人群,免疫情况的调查,原理：病毒特异性抗体鸡红细胞,不凝集,带血凝素病毒感染辅助诊断,鉴定病毒型和亚型,2,.,血凝抑制试验,Hemagglutination inhibition test,34,3,.,补体结合试验,Complement fixation test,原理：用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体,特异性低，抗体出现早，消失快近期感染指标,第二节 病毒感染的特异性预防,人工主动免疫,人工被动免疫,1,.,人工主动免疫,灭活疫苗,减毒活疫苗,亚单位疫苗,基因工程疫苗,重组载体疫苗,核酸疫苗,2,.,人工被动免疫,免疫球蛋白,血清丙种球蛋白,细胞免疫制剂,细胞因子,逆转录病毒复制示意图,第三节 病毒感染的治疗,第三节 病毒感染的治疗,抗病毒化制剂,干扰素和干扰素诱生剂,中草药,新抗生素类,治疗性疫苗,治疗性抗体,基因治疗剂,抗病毒化学制剂,核苷类药物,阿昔洛韦、利巴韦林、拉米夫定等,非核苷类反转录酶抑制剂,奈韦拉平、吡啶酮、甲酸磷霉素,蛋白酶抑制剂,塞科纳瓦、英迪纳瓦、瑞托纳瓦,其他抗病毒药物,金刚烷胺、甲酸磷霉素,41,干扰素和干扰素诱生剂,干扰素,干扰素诱生剂,Poly I:C,、甘草甜素、芸芝多糖,42,以流感病毒为例，试述病毒分离培养的一般程序。,病毒感染血清学诊断常用的方法及原理？,病毒感染早期的实验室快速诊断有哪些方法？,病毒分离培养时对临床标本的采集和送检有哪些要求？,病毒检测和细菌检测有什么区别？,复习思考题,中英文关键词,红细胞吸附,hemadsorption,血清学检测,serological diagnosis,细胞病变效应,cytopathic effect,CPE,血凝抑制试验,hemagglutination inhibition test,50%,组织细胞感染量,50%tissue culture infectious dose,TCID,50,1,Neal Nathanson.,Viral Pathogenesis and Immunity.(second edition),，,北京：,科学出版社，,2008,。,2 Martn-Carbonero L,Poveda E.,Hepatitis B Virus and HIV Infection.,Semin Liver Dis.,2012,32(2):114-9.,3 LaRussa P.,Pandemic novel 2009 H1N1 influenza:what have we learned?Semin,Respir Crit Care Med.,2011,32(4):393-9.,课外阅读资料,