艾滋病检测技术及诊断.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,艾滋病检测技术及诊断,检测依据和行业标准,样品的采集和处理,样品种类及用途,血液标本的采集,抗凝剂的选择,样品的保存,样品的运送,样品种类及用途,全血、血清、血浆、口腔黏膜渗出液、尿液及干血斑（,DBS,）样品可用于,HIV,抗体检测。,全血、血清、血浆、病毒培养上清液可用于,HIV,抗原检测。,抗凝全血可用于,CD4,+,和,CD8,+,T,淋巴细胞测定。,血浆、,DBS,可用于,HIV-1,病毒载量、基因型和耐药检测。,淋巴细胞富集液、外周血单核淋巴细胞（,PBMC,）及全血可用于,HIV,核酸定性与定量、基因型检测和,HIV-1,分离培养。,血液标本的采集,抗凝全血：消毒局部皮肤，用有抗凝剂的真空采血管抽取适量静脉血，或用一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管中，轻轻颠倒混匀,68,次，备用。,血浆：将采集的抗凝全血,15003000r/min,离心,15,分钟，上层即为血浆，吸出置于合适的容器中，备用。,血清：根据需要，用不含抗凝剂的真空采血管抽取,510ml,静脉血，或一次性注射器抽取静脉血，转移至无抗凝剂的试管中，室温下自然放置,12,小时，待血液凝固、血块收缩后再用,15003000r/min,离心,15,分钟，吸出血清，置于合适的容器中，备用。,抗凝剂选择,CD4,+,和,CD8,+,T,淋巴细胞检测：,EDTA,、肝素、枸橼酸钠,病毒分离、核酸检测：,EDTA,、枸橼酸钠,样品的保存,抗体检测：血清或血浆样品，短期（,1,周）内进行检测的可存放于,28,，一周以上应存放于,-20,以下。,核酸检测：,48h,内分离血浆，,4,天内检测可存放于,4,3,个月内存放于,-20,以下，,3,个月以上,-70,以下保存。,CD4,+,T,淋巴细胞检测：室温保存，时间不超过,24h,。如果用,CD45,设门，样品保存不超过,72h,。,样品的保存,筛查阳性样品应及时进行补充试验，筛查阴性样品，可根据具体需要决定保存时间，建议至少保存,1,个月。特殊用途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间。补充试验阳性样品按照国家生物样品管理的有关规定执行。,样品的运送,标本筛查阳性（复检需用三代试剂），送检单位必须联系受检者，在仔细核实受检者身份等信息后重新采集,1,份全血。将筛查阳性的血清与重新采集的全血共,2,份样品一同送至本中心。要求送检血清量不得少于,0.5ml,，送检单位对重新采集的全血不得做任何处理。标本的标识须用正楷字标明受检者姓名、性别和采集时间（年,/,月,/,日）。,筛查阳性的血清应装于,1.5ml,冻存管内，如果没有也可装于真空采血管内，禁止使用除此之外的其他容器。,样品的运送,包装要求：应采用,WHO,提出的三级包装系统,第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。,第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。,第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。,样品的运送,用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送，用于,CD4,+,和,CD8,+,T,淋巴细胞测定的样品应在室温下（,1825,）运送。用于病毒载量检测的样品应在,-20,以下运输。,DBS,和尿液样品应在室温下运送。,样品的运送,样品的运送,带螺帽、垫圈的血清冻存管,。,样品的运送,禁止使用,EP,管,样品的运送,禁止使用内旋盖冻存管,样品的运送,在冻存管外套带盖的第二层容器,样品的运送,置于带冰袋的第三层容器中,样品的运送,HIV,抗体筛查检测报告的填写,筛查阳性的标本应填写,HIV,抗体筛查检测报告，加盖公章后送检。,报告单不得有空项，必须按规范要求认真完成筛查、复检（第一次）、复检（第二次）三次试验。,在检测结果空白处填写送检样品的,S/CO,值或发光值。,HIV,筛查实验室筛查不能使用快速检测方法。,两次复检需使用三代试剂，三代试剂检测结果阳性方可送检。,HIV,抗体检测,HIV,抗体检测的实验室要求,HIV,抗体检测的目的和要点,常规,HIV,抗体检测方法,结果报告,质量控制,HIV,抗体检测,HIV,抗体检测的实验室要求,应符合国家对实验室生物安全的有关要求,实验室的质量控制按,全国艾滋病检测技术规范（,2015,）,相关章节规定执行,HIV,抗体检测,HIV,抗体检测的目的和要点,目的：,1,、,HIV,抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。,2,、以诊断为目的的检测是为了确定个体,HIV,感染状,况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需,要进行的体检等。,3,、以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播,HIV,，包括献血员筛查和原料血浆筛查。,4,、以监测为目的的检测是为了了解不同人群,HIV,感,染率及其变化趋势，包括高危人群、重点人群和,一般人群。,HIV,抗体检测,要点：,1,、根据目的选择检测方法及检测策略。,2,、严格遵守实验室,SOP,。,3,、结果判定以试剂盒说明书为标准。,4,、筛查试验有反应，须做补充试验。补充试验包,括抗体确证试验（,WB,、,RIBA/LIA,）和核酸,试验（定性和定量）。,HIV,抗体检测,常规,HIV,抗体检测方法,酶联免疫吸附试验（,ELISA,）,化学发光或免疫荧光试验（,CIA/IFA,）,快速检测法（,RT,）：金标法、硒标法、明胶颗粒凝集,试验（,PA,）,蛋白免疫印迹试验（,WB,）、条带,/,线性免疫试验（,RIBA,/LIA,）,筛查方法,抗体确证试验,HIV,抗体检测,结果报告,筛查报告：筛查试验无反应报告为“,HIV,抗体阴性”；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“,HIV,抗体阴性”，复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行“补充试验”（本中心只提供,WB,试验），报告为“,HIV,感染待确定”，不能出具阳性报告。,确证报告：符合,HIV-1,阳性判断标准，报告“,HIV-1,抗体阳性”，符合,HIV-2,抗体阳性判断标准，报告“,HIV-2,抗体阳性”；符合阴性判断标准，报告“,HIV,抗体阴性”；符合不确定判定标准，报告“,HIV,抗体不确定”，备注中注明“,24,周后复检”。,质量控制,酶免或发光法抗体检测的室内质量控制,快速法抗体检测质控,质量控制,酶免或发光法抗体检测的室内质量控制,试剂盒内部对照：试剂盒内提供的阴阳性对照血清，用于判断每次实验的有效性，但不能作为室内质控品用。,室内质控品（外部对照）：,1,、为试剂盒组分的外部质控品，是为监控检测的重复性而设置，质控品定值必须为弱阳性。,2,、可判断该批样品检测的有效性，因此，每次实验必须含室内质控品，其结果无效，必须重新试验。,质量控制,Levey-Jennings,质控图,质控图参数：算术平均值（,X,）、标准差（,S,）、变异系数（,CV,）及控制限。,控制规则：告警（,1,2S,）、失控（,1,3S,）,质量控制,1,、告警（,1,2S,）：当外部对照的,S/CO,值超过,2S,范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。,警告,:,1,2S,规则违背,质量控制,2,、失控（,1,3S,）：当外部对照的,S/CO,值超过,3S,范围时，系统处于失控状态，本次结果不能被接受。,失控,:,1,3S,规则违背,质量控制,质控图的分析及失控处理,实验室应建立质控图分析及失控情况处理的程序。当出现失控时，必须找出发生问题的原因，找出解决问题的方法，并消除原因。,质量控制,快速检测质控,试剂内对照,在质控窗口内出现质控带，该质控带是试剂自带的内部过程质控，说明实验操作全部完成并且实验所用材料处于工作状态。清洁的检测区背景是内部阴性过程质控。如试验完成后未呈现红色质控带，说明试剂盒内质控无效，该试验结果无效，样品必须重检。,实验室质量控制,室内质控品对照,1,、可采用商用质控品或自制质控品。质控品应包含抗体阳性 样品和阴性样品。不能使用酶联试验的外部质控品。,更换试剂批号,更换检测人员,2,、下列情况需做质量控制 更换包装,更换厂家,3,、建议：每个检测日检测一次阳性和阴性质控品；如果日检测量大于,50,份样品，至少应做,2,次质控。,实验室检测策略,窗口期：从,HIV,感染人体到感染者血清中的抗体、抗原或核酸等感染标志物能被检测出之前的时期。（在窗口期内的血液已有感染性。现有诊断技术检测,HIV,抗体、抗原和核酸的窗口期分别为感染后的,3,周、,2,周和,1,周左右。）,HIV,抗体筛查试验：初步了解机体血液或体液中有无,HIV,抗体的检测方法，也包括同时检测抗体和抗原的方法。,HIV,补充试验：在获得筛查试验结果后，为了准确判断，继续检测机体血液或体液中有无,HIV,抗体或核酸的方法，包括抗体确证试验和核酸试验。,实验室检测策略,实验室检测策略,使用抗体检测试剂的筛查检测流程（三代试剂）,试剂,1,有反应,无反应,两种试剂,均有反应,一有，一无,均无反应,补充试验,报告,HIV,抗体阴性,实验室检测策略,使用抗原抗体检测试剂的筛查流程（四代试剂）,抗原抗体检测试剂,有反应,抗体检测,均有反应,一有，一无,补充试验,均无反应,HIV-1,核酸试验,或,P24,抗原试验,或,24,周后随访,无反应,报告,HIV,抗体阴性，,P24,抗原阴性,HIV,感染,/AIDS,的诊断,诊断原则,以实验室检测为依据，结合临床表现和参考流行病学资料综合进行。,HIV,抗体和病原学检测是确诊,HIV,感染的依据；流行病学史是诊断急性期和婴幼儿,HIV,感染的重要参考；,CD4,+,T,淋巴细胞检测和临床表现是,HIV,感染分期诊断的主要依据；,AIDS,的指征性疾病是,AIDS,诊断的重要依据。,HIV,感染,/AIDS,的诊断,HIV,感染的诊断,成人、青少年及,18,个月以上儿童符合下列一项即可诊断：,HIV,抗体筛查试验有反应和,HIV,抗体确证试验阳性；,HIV,抗体筛查试验有反应和核酸定性试验阳性；,HIV,抗体筛查试验有反应和核酸定量试验,5000cps/ml,；,有流行病学史或艾滋病相关临床表现，两次,HIV,核酸检测均为阳性；,HIV,分离试验阳性。,HIV,感染,/AIDS,的诊断,18,个月龄及以下儿童符合下列一项即可诊断：,为,HIV,感染母亲所生和两次,HIV,核酸检测均为阳性（第二次检测需在出生,4,周后采样进行）；,有医源性暴露史，,HIV,分离试验结果阳性或两次,HIV,核酸检测均为阳性；,为,HIV,感染母亲所生和,HIV,分离试验阳性。,HIV,感染,/AIDS,的诊断,AIDS,的诊断,成人及,15,岁（含,15,岁）以上青少年符合下列一项即可诊断：,HIV,感染和,CD4,+,T,淋巴计数,200/mm,3,；,HIV,感染和伴有至少一种成人,AIDS,指征性疾病。,HIV,感染,/AIDS,的诊断,15,岁以下儿童符合下列一项即可诊断：,HIV,感染和,CD4,+,T,淋巴细胞百分比,25%(12,月龄,),，或,20%(12,月龄,36,月龄,),，或,15%(37,月龄,60,月龄,),，或,CD4,+,T,淋巴细胞计数,200/mm,3,(514,岁,),；,HIV,感染和至少伴有一种儿童,AIDS,指征性疾病。,谢谢,