NHS磁珠使用原理及详细的操作步骤应用范畴PPT文档.ppt

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,专注于“磁纳米，微萃取”,NHS,磁珠产品介绍,-,英芮诚生化科技,目录,CONTENTS,产品介绍,产品特点,应用实例,背景知识,2,背景知识,免疫磁珠，,也称免疫磁性微球，是一种均匀、具有超顺磁性及保护性壳的球形小粒子，基本上由载体微球和免疫配基结合而成。其核心为顺磁性粒子，核心外层包裹聚合物，最外层是免疫配基。,免疫磁珠技术：,是一种以特异的抗原抗体反应为基础的免疫学检测和分离技术。它是以抗体包被的磁珠为载体，通过抗体与反应介质中特异性抗原结合，形成抗原,抗体复合物，此复合物在外加磁场的作用下发生定向移动，从而达到分离抗原的目的。,3,产品介绍,NHS磁珠|Prot Elut NHS,【偶联容量】：200-300ug生物分子/ml磁珠悬浮液,【性 状】：棕黑色均匀悬浊液；,【保 存】：28保存，请勿冻融使用。分散剂：DMF。,【规 格】：100-120nm，单分散；1mL；,【用 途】：适用于含伯胺（或者伯胺标记）的蛋白、抗体、酶、多肽、核酸等生物分子。,4,通过独特的高分子聚合技术，在超顺磁性Fe3O4纳米核外形成结构致密、性能稳定的核-壳聚合体，在单分散的磁珠表层键合高密度的功能基团，形成界限清晰核壳结构的NHS磁珠。,与传统的羧基、氨基磁珠相比，采用Prot Elut NHS无需事先采用EDC或戊二醛活化，在偶联缓冲液中室温混合30min，Prot Elut NHS即可与带有伯氨基的生物配体直接偶联，形成稳定的C-N共价键，实现生物配体与Prot Elut NHS的共价偶联。,5,操作流程,磁珠,准备,目标生物分子,的偶联,封闭未反应,的活性基团,偶联后,磁珠保存,IP实验,（可选择）,6,1.,磁珠的准备（以,100uL,为例）,10,0ul,NHS磁珠,PBS,清洗2次,弃上清,10,0ul,偶联缓冲液,7,2.,目标生物分子的偶联,500ul,偶联缓冲液,10-15ug,IgG,孵育,1-2h,弃上清,可用于,偶联率测定,8,3.,封闭未反应的活性基团,混匀15-30min,/4反应1h,弃上清,弃上清,1ml PBS,重复一次,500ul 封闭剂,9,4.,磁珠保存,/,后续实验,1ml,保存剂,4保存,10,偶联量高，每100ul磁珠约偶联2030ug生物分子；,1,产品特点,100ul,2030ug,100ul,510ug,11,由于SDS-PAGE加样缓冲液中含有巯基乙醇从而导致抗体的重链与轻链之间的二硫键被破坏从而使得抗体分子变成重链分子(55KD)和轻链分子(25KD)。所以当目的蛋白的大小接近重链或者轻链分子时，重链或者轻链分子的WB信号常常由于信号过强而导致影响对目的蛋白的WB结果判断。,与ProteinA/G相比，免疫反应后洗脱可获得,无背景干扰的目标蛋白；,（轻重链影响）,2,12,5,操作简单、条件温和，可直接与生物配体共价偶联，偶联生物配体后稳定；,生物相容性好，非特异性吸附少；,3,快速分离，效率高，外加磁场10-20s实现磁珠分离。,4,13,应用范围,NHS磁珠可与带有伯氨基的生物配体直接偶联，形成稳定的C-N共价键，实现生物配体与 NHS磁珠的共价偶联。,封闭剂,抗体,14,发光试剂盒,15,应用实例,英芮诚NHS磁珠与A公司磁珠偶联甲胎蛋白（AFP）测试对比,（Bradford 蛋白定量法测定）,与A公司磁珠相比，英芮诚NHS磁珠的偶联量更高，偶联效率达85%。,16,NHS磁珠偶联黄曲霉毒素单克隆抗体AFM1测试（Bradford 蛋白定量法测定）(*),*：偶联体系：1mL，pH=8.0；磁珠使用量：100L。,随着AFM1浓度的增大，偶联上磁珠的抗体增多，抗体投量为30g时，偶联效率达84.40%。,17,谢 谢,18,