人类X小体Y小体检测专家讲座.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,试验九 人类X小体、Y小体检测,人类X小体Y小体检测专家讲座,第1页,一、试验目标,掌握X小体、Y小体玻片标片制作方法，,绘制X小体、Y小体形态特征及所在部位。,判定个体性别，为深入研究人类染色体畸变与疾病关系提供基础方法、为遗传病临床诊疗提供参考。,人类X小体Y小体检测专家讲座,第2页,二、试验原理,1949年Barr和Bertran在研究猫间期神经细胞时，发觉雌猫体细胞核膜边缘有一个可被碱性染料染色小体而雄猫没有。以后发觉人类正常女性口腔上皮、阴道上皮、皮肤、羊水等细胞中都有一个这么小体，继而有些人深入发觉全部哺乳动物雌体细胞中都有一样一个小体。普通认为这种小体是两个X染色体中一个在间期发生异固缩形成，故而将其称为X小体，X染色质，又称为Barr小体。Barr小体出现在哺乳动物雌性个体细胞细胞核膜边缘，这主要是因为这条染色体处于失活状态所致，Morishima等利用放射性标识方法证实了失活状态性染色体与其它异染色质（heterochromatin）一样，在DNA复制时总落后于其它常染色质，且大多出现在核膜边缘。性染色质数目是X染色体数减1。故能够依据X小体有没有、数目来判定胎儿性别和性别畸形。,Y,小体是人类男性体细胞中,Y,染色体长臂末端显现明亮小体，是由萤光染料染色后显示萤光所致。因而称为,Y,小体或,Y,染色质。亦可依据,Y,小体有没有、数目判定胎儿性别和性别畸形,人类X小体Y小体检测专家讲座,第3页,三、试验材料,口腔粘膜（男女）、发根细胞（女）。,人类X小体Y小体检测专家讲座,第4页,四、试验器具和药品,1.,器具：普通显微镜、荧光显微镜、恒温水浴锅、载玻片、盖玻片、镊子、牙签、滤纸、纱布等。,2.,药品：,95%,乙醇、乙醚、改良碱性品红、盐酸喹吖、,Macllvaine,氏缓冲液、石蜡。,人类X小体Y小体检测专家讲座,第5页,五、试验步骤,人类X小体Y小体检测专家讲座,第6页,1,X,小体观察,取材:,受检验者用水漱口数次，尽可能除去细菌和食物残渣；用洁净牙签从口腔两侧颊部刮取粘膜，第一次刮取物弃去，将第二次、第三次刮取物涂在洁净载玻片上。,固定,:,滴加固定液（95%乙醇,:,乙醚=1,:,1或直接用乙醇）固定2030min，空气干燥。,染色制片:,滴加12滴改良品红于室温下染色1020min（勿使干燥），加上盖片，垫上滤纸用手指轻轻加压即可。,镜检：,低倍镜下计数,100,个核膜完整，细胞不重合，无核固缩细胞；并在高倍或油镜下观察。,若使用女性发根细胞，需选取带有毛囊头发（约2cm长），再加一滴染液后加上盖玻片，洒精灯上微热，静置5min，后盖一滤纸压片。,人类X小体Y小体检测专家讲座,第7页,人口腔X小体,人类X小体Y小体检测专家讲座,第8页,X小体形状,人类X小体Y小体检测专家讲座,第9页,2,.,Y,小体观察,取材固定：,染色制片：,制好涂片放入固定液（1份95%乙醇和1份乙醚）固定1530min；95%乙醇处理20min；0.5%二盐酸喹吖水溶液染色10min，自来水1min，然后加12滴MacIlvaine氏缓冲液（pH5.48.0），覆以盖片。,荧光显微镜检验：,用低倍镜，再用高倍镜或油镜观察。整个细胞发出荧光者不计。,人类X小体Y小体检测专家讲座,第10页,六、试验结果,1,.,X小体：,油镜下可见,X,小体为一致密浓染小体。轮廓清楚，约,1um,，常附着于核膜边缘或靠边内侧，其形态有三角形、卵形、扁平形等。,正常女性间期细胞核中,X,小体百分比约,30%,50%,，男性中则偶然可见（,2%,），且不经典。,人类X小体Y小体检测专家讲座,第11页,六、试验结果,2,Y,小体：,荧光显微镜下可见细胞核中有发亮荧光小体，直径,0.3,0.5um,，正常情况下,Y,小体出现率为,25,50%,，正常女性无，性异常者，如核型为,47,，,XYY,个体，可见两个,Y,小体。,人类X小体Y小体检测专家讲座,第12页,七、作业及思索题,1.,统计,X,小体频率，画,2,3,个经典细胞，示,X,小体形态和所处部位。,2.,计算出现,Y,小体细胞频率。,3.什么是剂量赔偿效应？,4,.Barr小体分析技术在人类遗传学工作中有什么用途？,5,.在制片过程中使用HCl酸解目标是什么？,6.为何Barr小体普通出现在核膜边缘？,人类X小体Y小体检测专家讲座,第13页,