淋巴造血系统肿瘤检测项目介绍.ppt

封面一（深色底）本案主题标题文字为,28,号方正兰亭粗黑简体,你的部门名称或本案引导标题,2012,年,9,月,12,日,淋巴造血系统肿瘤检测项目介绍,艾迪康医学检验中心,实验室 孙晓柏,血液肿瘤分类进程,MICM,FAB,形态学诊断,(,M,orphology),免疫学检查,(,I,mmunology),细胞遗传学检查,(,C,ytogenetics,),分子遗传学检查,(,M,olecular),WHY?,主观影响,方法学限制,检测方法,形态学特点,细胞遗传学,免疫分型,分子生物学,准确诊断,形态学,:,细胞学：外周血、骨髓涂片，淋巴结穿刺组织学：骨髓活检、淋巴结活检、血凝块,免疫学：,流式细胞术（,FCM,）免疫组织化学,细胞遗传学：,核型分析（染色体异常）、荧光原位杂交（,FISH,）,分子遗传学：,融合基因（,RT-PCRQ-PCR)/,基因突变（,DNA,测序）,形态学,骨髓涂片看细胞、骨髓活检看结构，,二者相互补充相互验证不能相互替代。,长度,1.5cm,，血凝块,免疫固定电泳,免疫固定电泳对多发性骨髓瘤、,Waldenstrom,巨球蛋白血症、分泌型骨髓瘤、轻链病、重链病等研究有重大意义。,常规检测免疫球蛋白中常见的,IgG,IgA,IgM,IgD,和,IgE,概率极低，当检测结果出现单独轻链，不能排除是,IgE,和,IgD,结合轻链的可能，若需要确定是否为游离轻链，将进一步检测。,多发性骨髓瘤患者在治疗后易出现轻链丢失，电泳图谱与重链病图谱相似，此类患者建议加做尿液的免疫固定电泳检测是否存在游离轻链，以作进一步区分。,遗传学,分子生物学,融合基因筛查,适用患者,本筛查项目主要用于筛查,ALL,、,AML,、,CML,、,AMMOL,、,CMML,、,MDS,等血液病病种可能出现的,31,种融合基因或癌基因，及其融合基因的,110,余种剪切变异情况。,适合无法确定融合基因类别的初诊患者，,便于医生对血液病患者进行分子标志物的确定，并进行后续微小残留病灶的监控。,本项目,建议配合染色体核型分析一起检测,，,以免由于染色体数目异常或携带少见融合基因而造成漏诊。,不同疾病筛查项目,ALL,融合基因筛查（,18,种）,AML,融合基因筛查（,23,种）,APL,融合基因筛查（,3,种）,MLL,融合基因筛查（,11,种）,APL,的,5,种融合基因亚型,Chromosomal t(15;17)t(11;17)t(11;17)t(5;17)dup(17),aberration(q22;q21)(q23;q21)(q13;q21)(q35;q21)(q21.3q23),Frequency 95%12%rare rarerare,Fusion gene,PML-RARa,PLZF-RARa,NuMA-RARa,NPM-RARa,STAT5b-RARa,100%100%yes yes yes,RARa-PML RARa-PLZF RARa-NuMA RARa-NPM RARa-STAT5b,6070%100%no yes no,Nuclear in 100 micro speckles localized in microspeckle sheet likemicrospeckle,localization which maybe microspeckles pattern aggregation pattern,maybe,localized in be localized,cytoplasm in cytoplasm,Response to,ATRA good no,may respond goodyes no,to ATRA+G-CSF,Chemo good no,may respond,to chemo/ATRA,Arsenic good,with no PLZF-RARa not known not known not known,degradation of degradation,PML-RARa,CML,的三种融合基因亚型,BCR-ABL,a model of activation of protein tyrosine kinase(PTK)in leukemo-genesis:growth and survival advantages,融合基因项目,FAB,分类,检测意义,AML-ETO,AML-M2,M2,出现,AML1-ETO,融合基因阳性，考虑加做血液,C-KIT,基因突变，确定疾病风险分层。,DEK-CAN,AML-M2,，,M4,，,M1,患者年龄一般较轻，且预后较差；此类患者进行分子监测有助于判断患者预后，调整治疗方案。,CBF-MYH11,AML-M4eo,具有,CBF-MYH11,的患者对化疗敏感，预后较好。同时长期监控，可提示复发风险。,E2A-PBX1,前,B-ALL,具有,E2A-PBX1,患者的预后较差，需给予强化治疗才能获得较好的预后。,TEL-AML1,前,B-ALL,儿童,ALL,中最常见，治疗反应佳，预后良好。,FLP1L1-PDGFR,嗜酸性粒细胞增多症,可见于嗜酸性粒细胞增多症。,MLL-AF4,前,B-ALL,在婴儿,ALL,中最多见，儿童成人中较低，此类患者,病情凶险，预后差。患者对标准治疗方案很可能,无效，需给予强化治疗，大剂量,Ara-C,与,MTX,有效。,突变项目,检测意义,JAK-2 V617F/539-543,已列入,WHO2008 MPNs,的诊断标准,V617F,见于,90%,以上的,PV,，约,50%,的,ET,、,PMF,；,NPM1,是,AML,预后良好的因素之一，单纯,NPM1,突变的,AML,患者预后较好，若同时伴随,FLT3-ITD,突变，将会影响,AML,患者对化疗药物诱导的缓解效果。,C-kit,常出现于,AML1-ETO+,患者，突变患者预后较差。,FLT-ITD,FLT3,突变是急性髓性白血病患者预后判断的重要标志。阳性者预后不良。,FLT3-ITD,和,D835,突变在,AML,中阳性率分别,24%,和,7%,，总阳性率超过,30%,。突变患者白细胞计数显著增高，还与临床预后密切相关。,60,岁以下的,AML,患者预后较差。,N-ras,N-ras,基因点突变的检测可作为白血病缓解和复发的一项指标。发生,N-ras,基因突变的,MDS,患儿转化为白血病的机率较高。此基因突变存在于,1130%AML,。,ABL,激酶,CML,，特别是,CML,急变期（,AP-CML,）的患者，对伊马替尼耐药的发生率在,20-30%,；耐药主要由,ABL,激酶区突变引起，其可导致药物疗效下降或失效。,突变检测项目,基因,阳性率,临床意义,预后,与其他遗传异常相关性,KIT,5%,预后因素,差,t(8;21),inv(16)/t(16;16),FLT3,20-40%,预后因素,差,-,NPM1,30%,（核型正常）,对疾病进行临时性的定义,良好（如果没有,FLT3,突变）,M4,M5,CD34,-,CEBPA,10%,对疾病进行临时性的定义,良好,M1,，,M2,CD7+,WHO,2008,新界定的突变,技术交叉,TCR,和,IgH,重排项目,有,5-10%,的患者无法通过常规方法辨别其淋巴系统的增生是恶性增生还是反应性增生。,正常淋巴细胞在成熟过程中重排是多克隆性的，但恶性肿瘤（,98%,）表现为单克隆性,Ig,和,/,或,TCR,基因重排。,适用患者及适应症：疑似淋巴瘤患者的良恶性鉴别诊断。淋系白血病患者的鉴别诊断及微小残留跟踪检测。,免疫学,流式细胞术的应用目的,确定髓系和淋巴系别，及细胞分化阶段；,鉴别反应性与克隆性淋巴细胞增生性疾病；,确定髓系白血病各亚型（,M0,，,M3,，,M6,，,M7,）；,对形态学分类不明,/,比例低的细胞进行定性（淋巴瘤,-,凝 血功能障碍或甲减等）；,诊断急性混合细胞白血病（确诊）；,诊断微小残留白血病或白血病浸润；,辅助,MPD/MDS,诊断；,判断白血病,/,淋巴瘤预后，指导治疗。,微小残留病变检测,抗体选择,白血病,/,淋巴瘤免疫表型检测（,30CD,）,白血病,/,淋巴瘤免疫表型检测（,20CD,）,对于无法诊断或是临床倾向不明的患者，确定细胞系别来源及分化程度，辅助分型，提供诊断以及治疗依据。,微小残留病灶检测（,6CD,）,有初诊资料并且观察到微小残留跟踪标记,微小残留病灶检测（,20CD,）,无初诊资料或病情有复发情况,MDS,免疫表型检测（,20CD,）,多发性骨髓瘤免疫表型检测（,14CD,）,MICM,整合报告,Pig-a,基因的克隆性干细胞突变,Glycosylphosphatidylinositol anchor,，,GPI,缺失,部分缺失：,型细胞,全部缺失：,型细胞,PNH,克隆检测,检测哪些细胞？,红细胞,中性粒细胞,单核细胞,淋巴细胞,血小板,FLAER,气单胞菌溶素（,aerolysin,）直接连接于,GPI,锚蛋白，,GPI,阴性的,PNH,细胞对,aerolysin,出现抵抗。利用这一特性，制备出了采用荧光素（如,ALEXA-488,）标记,aerolysin,的变异体（,FLARE,），通过流式细胞术或激光共聚焦等方法分析,GPI,阳性或阴性细胞。,Michael J.Borowitz et al.,Guidelines for the diagnosis and monitoring of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,and related disorders by ow cytometry.Cytometry Part B 2010;78B:211230.,血液病质量体系建设,与,UCLA,（加利福尼亚大学）签订病理合作协议，建立了远程病理会诊平台，对疑难病例进行会诊研讨和科研,.,吴亿慧 医学博士,美国病理医生,刘正智 医学博士、理学博士,伊利诺伊大学厄巴纳,-,尚佩恩分校医学院临床副教授，主任病理医师,查宏斌 医学博士,南加利福尼亚永久医疗集团洛杉矶医疗中心血液病理专科执业医师,