免疫诊断简要概述.pptx

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,第二十四章免 疫 诊 断,免疫诊断简要概述,第1页,抗原抗体反应原理和特点,抗原抗体发生结合反应物质基础,抗原决定基与抗体抗原结合部位之间结构互补性。,抗原抗体反应特点,1,.高度特异,2.可逆性,3,.可见性：适当浓度和百分比、盐离子,免疫诊断简要概述,第2页,Ag/Ab Reactions,Source:Li,Y.,Li,H.,Smith-Gill,S.J.,Mariuzza,R.A.,Biochemistry 39,6296,www.med.sc.edu:85/chime2/lyso-abfr.htm,免疫诊断简要概述,第3页,Ab,Ag,High Affinity,Ab,Ag,Low Affinity,亲和力（Affinity）,免疫诊断简要概述,第4页,免疫诊断简要概述,第5页,Ab excess,Ag excess,Equivalence,Lattice formation,免疫诊断简要概述,第6页,凝集反应,沉淀反应,补体参加反应,免疫标识技术,第一节 抗原或抗体检测,免疫诊断简要概述,第7页,Agglutination,颗粒性抗原（如细菌、细胞）与对应抗体,在适当电解质存在条件下,经过一定时间后出现肉眼可见凝集块称为凝集反应,Y,Y,Y,+,定性试验,Ag/Ab,免疫诊断简要概述,第8页,间接凝集试验,可溶性抗原或抗体吸附于与免疫无关载体上,使之成为致敏载体颗粒,然后与对应抗体或抗原作用,在电解质参加下出现凝集反应,Y,Y,Y,+,应用,检测可溶性抗原或抗体,免疫诊断简要概述,第9页,Coombs(Antiglobulin)Tests,检测血清中抗-Rh抗体,Y,Y,Y,Y,Y,Patients,Serum,Target,RBCs,+,Step 1,+,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Coombs Reagent,(Antiglobulin),Step 2,免疫诊断简要概述,第10页,凝集抑制试验,将可溶性抗原与对应抗体预先作用,然后再加入致敏颗粒（吸附相同可溶性抗原乳胶颗粒）,因为抗体已被可溶性抗原结合,因而致敏颗粒不发生凝集现象。如免疫妊娠试验,Y,Y,Y,+,Prior to Test,Y,+,Y,Y,+,Test,Patients sample,免疫诊断简要概述,第11页,免疫诊断简要概述,第12页,单向免疫扩散,Ag Concentration,Diameter,2,Ag,Ag,Ag,Ag,Ab in gel,免疫诊断简要概述,第13页,双向免疫扩散,免疫诊断简要概述,第14页,补体结合试验,已知抗原加入血清（检测抗体）,加入标准量补体,加入包被抗体红细胞,检测红细胞溶解量,Ag,Y,Y,Patients,serum,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Ag,No Ag,Ag,免疫诊断简要概述,第15页,免疫酶技术,免疫荧光法,（immunofluorescence),免疫印迹法,（western blotting),放射免疫测定法(RIA),免疫诊断简要概述,第16页,免疫诊断简要概述,第17页,直接荧光法,Ag,Y,Fluorochrome,Labeled Ab,Tissue Section,免疫诊断简要概述,第18页,间接荧光法,Ag,Y,Y,Fluorochrome,Labeled Anti-Ig,Tissue Section,Unlabeled,Ab,免疫诊断简要概述,第19页,Flow Cytometry,Flow,Tip,Laser,FL,Detector,Light,Scatter,Detector,免疫诊断简要概述,第20页,Flow Cytometry,免疫诊断简要概述,第21页,Flow Cytometry,Red Fluorescence Intensity,Green Fluorescence Intensity,Two Parameter Histogram,Green Fluorescence Intensity,Number of Cells,Unstained cells,FITC-labeled cells,One Parameter Histogram,免疫诊断简要概述,第22页,ELISA,双抗体夹心法,双抗原夹心法,生物素亲和素系统,酶联免疫斑点试验（ELISPOT）,免疫组化技术,免疫诊断简要概述,第23页,ELISA,免疫诊断简要概述,第24页,双抗体夹心法（HBsAg、HBeAg等）,示意图,固相载体,抗体,抗原,酶,抗体,酶标识抗体,1.将抗体包被在固相载体上。,2.如样品中含有抗原，则结合,为抗原抗体复合物。,3.再加入酶标识抗体，则结合,为抗体-抗原-酶标识抗体复合,物。,4.酶催化底物并显色。,免疫诊断简要概述,第25页,双抗原夹心法（抗-HBs等）,示意图,1.将抗原包被在固相载体上。,2.如样品中含有抗体，则结合,为抗原抗体复合物。,3.再加入酶标识抗原，则结合,为抗原-抗体-酶标识抗原复合,物。,4.酶催化底物并显色。,酶,抗原,酶标识,抗原,抗体,抗原,固相载体,免疫诊断简要概述,第26页,中间蓝色为,癌巢,，周围棕褐色为转基因淋巴细胞,免疫诊断简要概述,第27页,免疫诊断简要概述,第28页,第二节 免疫细胞测定,一、淋巴细胞分离与类型判定,免疫诊断简要概述,第29页,T细胞总数及亚类,外周血T细胞总数:CD3,+,T细胞 60%-80%,CD4,+,T细胞55%-60%,CD8,+,T细胞20%-30%,CD4,+,/CD8,+,比值大约为2/1,免疫诊断简要概述,第30页,免疫荧光法,磁珠分离法,淘选法,流式细胞术,抗原肽MHC分子四聚体tetramer,免疫诊断简要概述,第31页,免疫诊断简要概述,第32页,免疫磁性微球分离原理,直接法对细胞进行分类,抗CD3磁球,磁球结合T细胞,加入B和T细胞中,负向选择,正向选择,磁架进行分离,间接法对T细胞进行分离,单克隆抗体CD3,羊抗鼠修饰磁球,Biomag,T细胞,T细胞,免疫诊断简要概述,第33页,二、白细胞功效测定,T细胞功效测定,B细胞功效测定,吞噬细胞功效测定,免疫诊断简要概述,第34页,T细胞功效测定,T细胞增殖试验：MTT法,细胞毒试验,细胞因子检测,细胞免疫功效检测皮肤试验,结核菌素试验,免疫诊断简要概述,第35页,51,Cr,释放法,乳酸脱氢酶释放法,凋亡细胞检验法,琼脂糖电泳,TUNEL法,流式细胞术,免疫诊断简要概述,第36页,免疫诊断简要概述,第37页,免疫诊断简要概述,第38页,