家禽精液品质的鉴定及保存.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,家禽精液品质的鉴定及保存,家禽精液品质的鉴定及保存,第1页,内容概要,1.,家禽精液与家畜精液不一样点,肉眼观察,2,家禽精液品质判定 镜检观察,生物化学检验,细菌学检验,精液稀释液,3,家禽精液稀释和保留,常见精液保留方法,家禽精液品质的鉴定及保存,第2页,家禽精子与哺乳动物精子形态差异,家禽精子形态与哺乳动物不一样，头部如镰刀形，立体形状为长柱形，颈部短，局部长，外形纤细。鸡精子全长约,100,107um,头部长,12.5um,顶部长约,2.5um,核长约,10um,，直径,0.5um,，尾部长,90,100um,，精子体积约,9.2um,3,。,家禽精液品质的鉴定及保存,第3页,家禽精液与家畜精液差异,与家畜精液相比，家禽精液量小，但其精子密度高。,鸡通常一次射精量为,0.3-0.5ml,火鸡为,0.2-0.3ml,鸭为,0.1-0.2ml,鹅为,0.2-1.5ml,。精子密度鸡,17-35,亿,/ml,火鸡,80-90,亿,/ml,，鸭,2-60,亿,/ml,鹅,3-25,亿,/ml,。,家禽精液成份,家禽精液是由精子和精清组成。精 清是精细管、附睾和输精管分泌物，同时还混入透明液。透明液还含有提升精子活力、呼吸和葡萄糖消耗因子，其促使精子早衰，故采精时，应尽可能防止透明液混入精液。,家禽精液品质的鉴定及保存,第4页,家禽精液品质判定,肉眼观察,颜色：正常为乳白色。被粪便污染为黄褐色；尿酸盐污染为白色絮状物；血液污染为粉红色；透明液过多为水渍状。,气味：稍带有腥味,采精量：正常在,0.2,1.2ml,。鸡通常一次射精量为,0.3-0.5ml,火鸡为,0.2-0.3ml,鸭为,0.1-0.2ml,鹅为,0.2-1.5ml,。,浓稠度：浓稠度很大。精子密度鸡,17-35,亿,/ml,火鸡,80-90,亿,/ml,，鸭,2-60,亿,/ml,鹅,3-25,亿,/ml,。,pH,：呈弱碱性，其,PH,值，鸡为,7.0,7.6,，鹅稍低为,6.9,7.4,。,家禽精液品质的鉴定及保存,第5页,镜检观察,主要包含精子活力、密度及精子形态等。,活力,:,取精液，用平板法在,37,条件下用,200,400,倍显微镜检验，评定活力等级，普通依据在显微镜下呈直线运动精子数（有受精能力）所占百分比，分为,1,、,0.9,、,0.8,、,0.7,、,0.6,级。转圈运动或原地摆动精子，都没有受精能力。,家禽精液品质的鉴定及保存,第6页,精液密度指每,1ml,精液中所含精子数。在显微镜下依据精子稠密程度可分为：,密,精子中间几乎没有空隙。鸡,40,亿,/ml,火鸡,80,亿以上,/ml,；,中,有空隙。鸡,20,40,亿,/ml,。火鸡,60,80,亿,/ml,；,稀,稀疏。鸡,20,亿以下,/ml,，火鸡,50,亿以下,/ml,。,家禽精液品质的鉴定及保存,第7页,畸形率检验：取一滴原精液在载玻片上，抹片自然阴干，干后用,95%,酒精固定,1,2min,水洗，再用,0.5%,龙胆紫（或红、蓝墨水）染色,3min,水洗阴干，在,400,600,倍镜检。,畸形精子有以下几个：尾部盘绕、断尾、无尾、盘绕头、钩状头、小头、破裂头、钝头、膨胀头、气球头、丝状中段等。,家禽精液品质的鉴定及保存,第8页,家禽精液品质的鉴定及保存,第9页,浓度：用红细胞计数法测定。取红细胞计数吸管，吸收精液,0.5,处，在吸入,3%,NaCl,或,2%,伊红溶液至,101,处为,200,倍稀释，摇匀至,2,3,分钟，去掉前面,3,滴，在计数板盖玻片上下各滴,1/2,滴，滴入血细胞计数板静置,2,3min,进行计数。,1ml,精液精子总数,=5,个中方格精子数,/80,（小方格）,10,（计数室格高度）,400,（计算小方格）,200,（稀释倍数）,1000,（,1ml,等于,1000mm,3,）。,C=n/100(C,为精子总数，以,10,亿,/ml,表示；,n,为,5,个中方格精子数,),。,家禽精液品质的鉴定及保存,第10页,生物化学检验,精子呼吸强度测定,精子呼吸强度与精子密度和活力相关，通常采取,美兰褪色试验测定,。精子在美兰溶液中，呼吸时氧化脱氢，美兰取得氢离子后便是蓝色还原为无色。所以，依据美兰褪色时间可测知精液中存活精子数量多少，判定精子活力和密度高低。,家禽精液品质的鉴定及保存,第11页,精液果糖分解测定,精液果糖分解能力与精子活力亲密相关，所以可作为精子活率评定指标。精液中精子代谢时消耗精液中游离果糖和磷酸果糖。,精液耗氧量测定,精子呼吸时消耗氧气多少与精子活力和密度相关，但精液耗氧量不但取决于精子细胞内氧化，而且也受精清耗氧量所致。将一定量精液放在,37,温箱中孵化一时，用瓦（勃）氏呼吸器测定其耗氧量，计算出精子耗氧量。,家禽精液品质的鉴定及保存,第12页,精浆中其它化合物测定,测定精浆中其它化合物如透明质酸、谷草转氨酶、酸性磷酸酶、柠檬酸、镁、锌、甘油磷酸胆碱、肉毒碱、精氨酸、精液素、类固醇激素和前列腺素等，有利于全方面了解精液品质和动物繁殖能力。,家禽精液品质的鉴定及保存,第13页,细菌学检验,精液无菌是保障人工授精基础，精液在采集、生产和贮存过程中，不可防止要接触一些细菌，所以，在精液生产中精液细菌学检验和控制就十分主要。,细菌检验,1,、无菌条件下，取新鲜或解冻后细管精液，一支细管精液接注一个灭菌平皿内，并倒入,50,培养基约,15ml,，转动平皿使精液、培养基混合均匀，凝固后翻转平皿并置于恒温箱,37,培养，,48,小时后计算每个平皿内菌落数，取两个平皿平均值。,2,、每样品做两个平皿，并设置一个空白对照平皿。,家禽精液品质的鉴定及保存,第14页,精液稀释和保留,精液稀释目标是扩充精液量，为精子提升营养物质，缓冲不良环境危害，阻止精子遭受冷打击；抑制细菌繁衍，延长精子存活时间，便于精液保留和运输。,常见稀释液基础成份,稀释剂：扩充精液容量，要求与精液 有相同或相近渗透压，如 生理盐水、糖类及一些盐溶液。,营养剂：提供外源能量，延长精子存活时间。假如糖类（普通指单糖）、奶类及卵黄。,保护剂：中和、缓冲对精子保留不良影响，预防精子受“低温打击”，创造精子生存抑菌环境等。,其它添加剂：改进精子外在环境理化特征，调整母禽生殖道生理机能，提升受精率。常见有酶类、激素类、维生素和,pH,调整物。,家禽精液品质的鉴定及保存,第15页,1.,缓冲液：,pH6.8,7.4,对精子无害，普通用柠檬酸钠、磷酸二氢钾和磷酸氢二钠，多年来常见三羟甲基氨基甲烷（,Tris,）碱性缓冲液，对碱中毒和酶活力有主要作用。,2.,电解质：为延长精子在体外存活时间，在稀释液中加入适量非电解质或弱电解质，各种糖类和氨基酸。,3.,防冻物质：预防精子冷冻休克 作用，如卵磷脂、脂蛋白及含磷脂复合物。,4.,抗冻保护物质：有抗冻危害作用。常见甘油和二甲基亚砜（,DMSO,）。,5.,抗生素：为预防精液采精和处理过程中污染，常见有青霉素、链霉素。,家禽精液品质的鉴定及保存,第16页,精液稀释液种类,现用稀释液：适合用于采集鲜精经稀释后马上输精情况。常见以含有等渗透压糖类和奶类为主，也可用生理盐水。,常温保留稀释液：适合用于精液室内短期常温保留，含有较低,pH,较低特点。,低温保留稀释液：适合用于精液低温保留，以卵黄或奶类为主要成份，含有抗冷休克作用。,冷冻保留稀释液：适合用于精液超低温保留，除含有糖类、卵黄外，需加入甘油和二甲亚砜等抗冻物质。,家禽精液品质的鉴定及保存,第17页,家禽精液保留,精液保留是为了延长精子存活时间及维持其受精能力，便于长久运输，扩充精液适用范围，增加受配母禽只数，提升种公禽配种效能。,现行精液保留方法，按保留温度分为常温保留（,15,25,）、低温保留（,0,5,）、冷冻保留（,-79,或,-196 ),等三种。前两种保留方法，精液都以液态形式存在，故统称为液态精液保留。,家禽精液品质的鉴定及保存,第18页,常温保留,常温保留温度在,18,20,保留无需特殊控温和制冷设备，精液处理方法简单，便于推广普及。,原理：常温保留时稀释液弱酸性环境，抑制精子运动和降低代谢水平，从而延长精子存活时间。稀释性外源能源（营养液）给精子补充分够营养物质起源，稀释液中添加适当剂量抗菌物质以抑制细菌微生物孳生。,方法：精液经稀释后，按照输精剂量要求分装，或者在烧杯中封口后，保留在,18,20,温度下。,家禽精液品质的鉴定及保存,第19页,低温保留,原理：将稀释后精液，置于,0,5,低温条件下保留。在低温条件下，精子运动减弱甚至停顿而处于一个休眠状态，代谢降低到极低水平，相对延长精子保留时间。,方法：精液经过稀释后能够保留在冰箱冷藏室内。,家禽精液品质的鉴定及保存,第20页,精液冷冻保留,原理：将精液经过适当处理后，保留在液氮（,-196,）、干冰（,-79,）或其它冷源中。理论上讲，精液经过特殊处理保留在超低温下，使其细胞代谢（酶）活动停顿，而温度上升到适宜温度时又能恢复受精能力，就能到达长久保留精液目标。,稀释液：冷冻保留稀释液。,家禽精液品质的鉴定及保存,第21页,冷冻保留稀释液含有低温保护剂,(,如卵黄、牛奶,),、防冻保护剂（甘油等）、维持渗透压物质（糖类、柠檬酸钠等）、抗菌素以及其它添加剂。冷冻保留精液稀释液都是在原有低温保留稀释液基础上，添加防冻物质。,配制过程中采取分步稀释液：基础液,将糖类、盐类等可经高温消毒药品成份，成批量配制成溶液，瓶装密封保留。,液,依据每次采精量，计算所需冷冻稀释液量，在基础液中按配方百分比加入一定量卵黄和抗苗素。,液,取需要量,液，按配方百分比加入经灭菌甘油制成。,家禽精液品质的鉴定及保存,第22页,家禽精液冷冻程序,精液稀释,-,降温和平衡,分装、冷冻,解冻。,1.,精液稀释 使用冷冻保留稀释液,2.,降温：是指由,30,以上温度降至,0,5,过程。为防止低温打击，要迟缓降温。,平衡：是指在,0,5,条件下精子适应过程。目标是重建离子平衡，同时使精子为冷冻做生理上准备。降温平衡时间因不一样种类家禽和用不一样抗冻剂而异。,3.,分装、冷冻 冷冻精液有三种分装方法：塑料细管、颗粒和安瓿法。冷冻多用液氮薰蒸法。,4.,解冻 方法和速度影响精液品质、当前多使用,35,40,水浴解冻和,2,5,水浴解冻。,家禽精液品质的鉴定及保存,第23页,实例：鸡精液冷冻程序,颗粒法,稀释液配方：配方,I 5.7,葡萄糖,85ml,甘油,5ml,印黄,15ml,配方,乙烯二酸,8ml,牛奶,8ml,上面二液均按每,ml,青霉素,1000,单位，链霉素,1000Ug,。精液采下后，普通按,1,：,1,3,稀释。,降温和平衡 用棉花包住精液瓶在,2,5,条件下放置,2,4,小时。,滴冻 在铜纱网上滴冻，滴冻温度为,-56,-118,，铜纱网约距离液氮面,2.53.5,厘米，滴成颗粒后熏蒸,1,2,分钟。颗粒大小可为,0,09,0.llml,。,解冻 解冻液可用,5,7,葡萄糖，解冻温度,35,40,，普通用,0,5ml,解冻液。,家禽精液品质的鉴定及保存,第24页,钢管法（贝尔茨维尔法）,1.,稀释 用贝尔茨维尔家禽稀释剂稀释。,2.,降温和平衡 用,2,小时降温至,5,后，加入,4,二甲基亚砜。再平衡,2,小时 。,3.,分装用,0,5ml,细管分装（并事先印上品种日期等）,4.,冷冻,+5,-20,降温速度,1,分钟,-20,-125,降温速度,50,分钟,-125,-196,降温湿速度,160,分钟,5.,解冻 细管放入,2,水中解冻。,家禽精液品质的鉴定及保存,第25页,