自噬的研究进展.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,Autophagy in Yeast:A Review of the Molecular Machinery,Presenter：Han Bing,标题栏,细胞自噬的调控,2,前言,1,选择性自噬,4,自噬体在PAS的形成及降解,3,展望,5,2,1、前言,自噬,（,autophagy,）：,泛指溶酶体（Lysosome）（酵母中为液泡，Vacuole）介导的细胞质降解过程。与蛋白酶体(Proteasome)相比，溶酶体具有更强大的降解能力,因此细胞自噬可以大批量的降解从可溶蛋白到完整细胞器在内的胞内物质。,3,微自噬,2,宏自噬（主要）,1,3,分子伴侣介导的自噬（,CMA,）,：,通过形成具有双层膜结构的自噬体(Autophagosome)包裹胞内物质,最终自噬体与溶酶体（液泡）融合，酵母自噬体的形成是在PAS（自噬体组装位点）发生的。,分子伴侣介导的自噬（,CMA,）：,通过溶酶体或液泡表面的形变直接吞没特定的细胞器 或者蛋白,胞质内蛋白结合到分子伴侣后被转运到溶酶体腔中，然后被溶酶体（液泡）酶消化。,根据细胞物质运到溶酶体内的途径不同,4,自噬的过程,5,2、细胞自噬的调控,生理条件下,细胞自噬受到严格的调控。现在了解得比较多的细胞自噬调控通路主要有两条:,TOR,(Target of rapamycin)通路和磷脂酰肌醇3-激酶(,PI3K,Phosphoinositide 3-kinase),通路。很多其他细胞自噬,调控信号直接或间接的通过这两条通路发挥作用,。,6,TOR通路,TOR 是一,种,丝氨酸,/,苏氨酸蛋白激酶,对细胞自噬起到,负调控,作用,。,在正常生长条件下,TOR处于,激活,状态,细胞自噬受到,抑制,;当细胞处于饥饿或受到雷帕霉素(Rapamycin)刺激时,TOR被,抑制,细胞自噬被诱导,增强,。,在酵母中,TOR,可以形成两种蛋白复合物:TORC1,和,TORC2。,其中，TORC1是主要的自噬调节因子。,7,TORC1,营养丰富,TORC1被激活,磷酸化Atg13,与Atg1的结合能力降低,Atg1的活性低,与Atg17作用弱,自噬水平低,饥饿或雷帕霉素刺激,TORC1被抑制,反之,.,自噬水平高,在TOR通路中，TOR复合体通过与Atg13的作用，间接地影响了Atg1-Atg13-Atg17蛋白复合体的形成，进而影响了自噬水平的高低，Atg13在蛋白复合体中起到了介导作用。,8,3、自噬体在PAS的形成及降解,自噬体的形成是细胞自噬的关键步骤,自噬体的 大小与数量也反应了细胞自噬发生的水平,这一步骤涉及的,过程,包括:PAS 的,形成,、III 型,PI3K,信号,通路,、,Atg9,的,循环,（顺向和逆向）,和,泛素样蛋白,结合系统。,9,PAS的形成,PAS,是自噬体形成的位点，通常位于液泡附近，是酵母特有的现象，所以PAS的形成机制，对于我们了解整个自噬过程具有重要意义,。,10,酵母,富营养,Cvt复合体（prApe1多聚体、Ams1,、Atg19）形成,Atg19与Atg11结合,激活Atg11并募集其他Pro,围绕Cvt复合体形成自噬体-Cvt囊泡,PAS的组装信号,饥饿,非选择性自噬,Atg17起主要作用,PAS的组装信号,11,PI3K复合体及其下游作用蛋白,PI3K可以对膜上的磷脂酰肌醇进行磷酸化修饰，其中,型PI3K,可以将磷脂酰肌醇磷酸化为PI3P,，酵母中的PI3K复合体为型PI3K。,12,酵母中,型PI3K,复合体包括：Atg14、Vps34、Vps15、Atg6，其中Vps15是Vps34的调节亚基，Atg14将Vps34-Vps15与Atg6连接在一起形成复合体，并将PI3K复合体定位于PAS，通过其产物PI3P募集下游蛋白。下游蛋白包括Atg18和Atg21，Atg18随后组成Atg2-Atg18复合体并在Atg9的循环中起作用，Atg18参与非选择性自噬，Atg21参与选择性自噬。,13,Atg9的循环,自噬体膜的起源一直是人们致力解决的问题,而其中的关键可能就是Atg9。Atg9是一个整合膜蛋白,含有高度保守的6个跨膜结构域以及位于胞质中的N端与C端。它在相关蛋白的协助下,在 PAS 与外周膜结构(如线粒体、内质网、高尔基体)之间往复循环,参与自噬体的形成过程,故 Atg9 被认为有可能起“膜载体”的作用。,14,Atg9的顺向运输,在选择性细胞自噬 Cvt 途径中,当 Atg11、Cvt复合体或Actin细胞骨架中的组分缺失任一个时,Atg9 从外周膜结构到 PAS 的运输都会被阻断Actin相关蛋白Arp2与Atg9相互作用,直接调节Atg9从外周膜结构向PAS的运输。在饥饿诱导的非选择性细胞自噬中,这种运输需要Atg17的协,助。Atg17 帮助 Atg9 定位于 PAS,进一步完成膜的组装,但这个过程并不需要Atg1的激酶活性,。,15,Atg9的逆向运输,当自噬体形成时,Atg9并不留在自噬体膜上,而是从 PAS 返回细胞质中的膜结构。这一逆向运输途径依赖于,Atg1-Atg13,复合体、,Atg2-Atg18,复合体。其中大家比较公认的模型是:一旦 Atg1-Atg13 复合物与 Atg9 被募集到 PAS,Atg1-Atg13 促使 Atg9 与 Atg2-Atg18 相互作用,这种三元复合物的形成促使 Atg9 从 PAS 返回外周膜。,16,泛素样蛋白结合系统,两个类泛素样蛋白,Atg12、Atg8,分别在泛素样酶（泛素活化酶Atg7，泛素结合酶Atg10）的作用下与,Atg5,、磷脂酰乙醇胺(,PE,phosphatidylethano-lamine)相结合,促进自噬前体囊膜的不断延伸。,17,Atg12-Atg5-Atg16多聚体的形成,Atg7与ATP结合,激活的Atg7与Atg12结合,Atg12激活,在Atg10的作用下,与Atg5结合,Atg5激活,Atg5与Atg16结合,Atg12-Atg5-Atg16多聚体形成,18,Atg8-PE的形成,Atg8,Atg4、Atg7的作用下,激活的Atg8被转移给Atg3(泛素结合酶),Atg8-PE,Atg12-Atg5-Atg16,复合体,最主要的功能便是对 Atg8的辅助作用,而 Atg8-PE 是双层膜不断向外延伸的直接作用者,。,19,自噬体的降解,自噬体在靠近液泡的 PAS 形成后,最终会与液泡融合。这个融合过程与细胞中其他囊泡与液泡的融合相类似,该过程涉及到的蛋白有 SNARE 蛋白(Vam3、Vam7、Vti1、Ykt6),、,小GTP酶 Ypt7,、,HOPS 复合体、Mon1-Ccz1 复合体等。融合的结果是自噬体的外膜成为液泡膜的一部分,其内膜小泡和内含物在液泡内腔被降解,并循环利用,。,20,4、选择性自噬,细胞自噬曾被长期认为是非选择性为主的,但随着研究的深入,选择性细胞自噬的生理意义愈发显著。酵母中选择性细胞自噬的研究是与非选择性细胞自噬的研究同步开展的,现在也积累了大量的结果。酵母中的选择性细胞自噬主要有,Cvt途径,、,线粒体自噬和过氧化物酶体自噬。,21,Cvt途径,它的主要功能是将细胞质中的氨基肽酶(Ape1)、甘露糖酶(Ams1)等酶的前体定向送到液泡,以使其激活并发挥其水解酶活性。Ape1 在细胞质中以无活性的前体 PrApe1 形式存在。PrApe1 会形成一个寡聚体,Atg19 与PrApe1 相结合,而 Ams1通过 Atg19 的另一个位点与 Atg19 相结合,共同形成Cvt 复合物。Atg19 与 Atg11 相互作用,引导 Cvt复合物定位到 PAS 位点;Atg19进而与Atg8-PE相互作用,促进特化的自噬体-Cvt囊泡的形成。,22,前体 PrApe1,A,ms1,Atg19,Cvt复合物,通过Atg19,与Atg11相互作用,Cvt复合物定位到 PAS 位点,23,5、展望,1.,TOR通路的下游效应因子是什么？,2.,Atg9如何逆向转运的？,3.,Atg12复合体如何调节Atg8-PE的？,4.,Atg8-PE如何使双膜结构不断延伸的？,24,25,