Sanger测序原理.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1977,年，英国人,Fred Sanger,发现，,如果在,DNA,复制过程中掺入,ddNTP,，就会产生一系列末端终止的,DNA,链，并能通过电泳按长度分辨。,不同末端终止,DNA,链的长度是由掺入到新合成链上随机位置的,ddNTP,决定的。,由此诞生了以Sanger命名的测序原理即双脱氧链终止法测序原理。,Sanger简介,1,dNTP和ddNTP,o,H,o,P,H,CH2,碱基,H,OH,2,3,o,o,-,o,P,o,o,-,o,P,o,o,-,o,-,2-脱氧核糖核苷酸,H,H,o,H,o,PH,CH2,碱基,H,H,2,3,o,o,-,o,P,o,o,-,o,P,o,o,-,o,-,2，3-脱氧核糖核苷酸,H,H,2,双脱氧末端终止,o,H,H,CH2,A,H,OH,2,3,H,H,正常延伸,延伸终止,o,H,H,CH2,H,O,2,3,o,P,o,o,-,o,P,o,o,-,o,P,o,o,-,o,-,H,H,o,P,o,o,-,磷酸二酯键,-,-,-,-,-,T,G,C,o,H,H,CH2,T,H,OH,2,3,H,H,o,H,H,CH2,H,2,3,o,P,o,o,-,o,P,o,o,-,o,P,o,o,-,o,-,H,H,o,P,o,o,-,磷酸二酯键,无法形成,-,-,-,-,-,A,C,G,H,dNTP,dNTP,dNTP,ddNTP,继续延伸,3,测序反应,5,DNA Template,3,A,C,T,T,C,G,A,C,A,A,C,T,G,A,T,T,C,G,G,A,A,T,T,G,5,3,ddNTP,Large fragments,Small fragments,毛细管电泳,荧光检测,T,A,C,T,G,A,T,G,T,G,荧光检测结果：53,T,A,C,T,G,A,T,G,T,G,DNA测序结果：35,T,C,A,C,A,G,C,A,T,A,4,