细菌测定系统SOP文件.docx

安顺市平坝区人民医院检验科 编写：蒋可乾、黄维华 制定日期：2016.06.05
平坝区平黎大道 审核：蒋可乾 修订日期：2016.06.20
0851- 核准：谭桂林 执行日期：20016.06.20
DL-96细菌测定系统
标准操作程序
1．目的
规范DL-96细菌测定系统的操作程序，保证检验质量。
2．授权操作人
经培训并通过考核的微生物实验室工作人员。
3．原理
DL-96细菌测定系统，是对已分离培养出来的细菌、真菌等微生物进行种、属鉴定，并同时测定该菌对各种抗菌药物MIC的专用设备。细菌测定系统由检测装置、嵌入式控制装置组成，测定系统采用比色、比浊法判定随机体外诊断试剂板微量反应孔阴阳性结果进行检测和分析，并自动生成细菌种类和抗菌药物MIC半定量分析结果。
试剂板由生化反应孔和抗菌药物MIC测定孔组成。在生化反应孔中加入细菌悬液，经35-37℃孵育，在细菌代谢作用下生化反应直接产生颜色变化或经加入显色剂后产生颜色变化;抗菌药物MIC半定量测定采用微量肉汤稀释法，加入含有细菌的M-H肉汤培养基，经35-37℃孵育，试验孔是否出现浑浊（沉淀）确定细菌是否生长.测定系统采用比色法对各项生化反应进行结果(阴性或阳性)判定，按照细菌生化反应的概率来完成细菌的鉴定;测定系统通过比浊法对抗生素进行MIC半定量测定分析MIC值。
4. 工作条件
环境温度: 5℃～40℃； 相对湿度: ≤80%；大气压力: 76 kPa～106 kPa； 电源电压: AC220V+22V, 50Hz+1Hz； 光 照 度: 应避免阳光直射。
5．操作程序
5.1 使用试剂板的基本要求
5.1.1无特殊营养要求的革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和真菌等病原菌;
5.1.2 经18-24小时分离培养的单个纯菌落（或纯培养物）;
5.2随机试剂板的选择
5.2.1根据待测菌的培养特性菌落特征、氧化酶试验、触酶试验结果及革兰染色情况，选择好相应试剂板。
5.2.2试剂板的选择：DL-96E、DL-96NE、DL-96STAPH、DL-96STREP、DL-96FUGNUS。
5.3 试剂板的接种
5.3.1 DL-ZD1浊度仪的校准
连接浊度仪电源，仪器运行正常，放入调“零”和调“幅”试管，调节仪器测试分别达到0和100%即可使用。
5.3.2 菌悬液与药敏液的配制
5．3．2．1菌悬液的配制：挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈细菌悬液要求如下，
DL-96E、DL-96NE、DL-96STAPH的菌悬液都制备为0.5麦氏单位
DL-96STREP菌悬液制备为2麦氏单位。
DL-96FUGNUS的菌悬液制备为1个麦氏单位。
5．3．2．2 药敏液的配制
DL-96E、DL-96NE、DL-96STAPHDL-96、DL-96STREP吸菌悬液50ul，加至M-H肉汤培养基内，充分混匀。DL-96FUGNUS吸取菌悬液20μl加入药敏培养液中，充分混匀。
5．3．3 试剂板的接种与孵育
5．3．3．1生化反应孔和抗菌药物MIC测定孔按照试剂板使用说明书的要求，用连续移液器(配无菌吸头)吸取菌悬液与药敏液加入各孔，每孔100μ。试剂板的接种也可以采用SCAN-10自动加样仪自动接种.
5．3．3．2 撕开不干胶的纸对齐贴于鉴定板，35-37℃孵育(DL-96FUGNUS试剂板放置30℃湿盒内孵育)。
5．4 随机试剂板的检测
5．4．1 试剂板孵育培养18-24h后（个别生长缓慢者可延长至36—48小时）检测试剂板，按照使用说明的要求向DL-96E、DL-96NE、DL-96STAPHDL-96、DL-96STREP测试板加入辅助试剂。
5.4.2 打开细菌测定系统电源开关，打开系统软件,按“+”录入患者信息资料。选择测试板类型后，按“判别”键，测定系统会自动伸出试剂板托盘，将试剂板置入托盘，按“是”，测定系统自动判读试剂板,读板完毕取出试剂板,系统自动得出细菌鉴定和药敏试验结果.
5．5 报告的打印
细菌鉴定与药敏试验报告单在测定系统中专家分析系统中打印。
5．6 报告的查询与统计
5．6．1按“查询” 键进入查询界面：输入查询条件，按“查询” 键，观察结果。
5．6．2按“统计” 键进入统计界面：输入统计条件，按“统计” 键，在微生物专家系统中统计，观察结果。
6．质量控制
6.1 质控方法：
6．1．1 DL-96E、DL-96NE、DL-96STAPH、DL-96STREP、DL-96FUGNUS为鉴定与药敏复合试剂板，采用鉴定与药敏一起进行质控。
6．1．2鉴定与药敏的质控：每新进一批鉴定卡做一次质控：每一新生产批号鉴定卡需用相应质控菌株做质控以检测生化反应的可靠性；每一新生产批号药敏卡需用相应质控菌株做质控以检测MIC 结果的可靠性。材料和试剂批号必须记录并保存。
6．2质控菌株
试剂板种类
质控菌株
DL-96E
ATCC25922 大肠埃希氏菌
DL-96NE
ATCC27853 铜绿假单胞
DL-96STAPH
ATCC25923 金黄色葡萄球菌
DL-96STREP
ATCC29212 粪肠球菌
DL-96FUGNUS
ATCC90029 白色念珠菌
6.3 质控步骤：
DL-96E、DL-96NE、DL-96STAPH、DL-96STREP、DL-96FUGNUS质控步骤同5.0,观察质控是否失控.
6.4 失控原因分析和处理
6.4.1如果失控应按以下步骤进行初步分析与处理:
1)错误使用质控菌株；
2)没有按照标准操作程序操作;
3)试剂板超出有效期;
4)测定系统严重误差
6.4.2无上述因素失控应进一步分析与处理:
1)重覆实验以确认误差结果；
2)确认比浊仪校正在有效期内，功能正常；
3)确认所有试剂均在有效期内，并妥尚保存（注：试剂板2-8ºC 储存；开启封后立即使用,辅助试剂常温保存）；
4) 确认培养箱温度是否正常；
5) 确认标准菌株是否污染
6) 确认菌悬液浓度符合要求；
7) 确认标准菌株接种平板正确、孵育时间正确;
8) 确认无菌操作下打开试剂板,以防空气杂菌污染。
6.4.3 如误差无法解决，应联系厂家的技术支持人员。
7．维护与保养
7.1日常保养：检查测定系统开机和关机以及功能是否正常, 仪器表面如有污迹，沾少量纯净水擦拭或可用干净软布沾清洁膏清洁.
7.2 年定期保养:
7.2.1应定期用干净软布沾少量纯净水或可用干净软布沾清洁膏清洁检测托盘。
7.2.2长时间不使用本系统，应用软布或仪器套覆盖仪器防止灰尘进入并定期保养。
7.2.3细菌测定系统为复杂精密仪器，在使用过程中出现严重误差需要校准的，其校准工作需由厂家专业工程师进行校准。
8．校正
8.1年度校正：细菌测定系统为复杂精密仪器，其校准工作一年一次需由厂家专业工程师进行校正。
8.2严重误差、故障、搬迁校正：细菌测定系统为复杂精密仪器当出现严重误差、故障、搬迁应由厂家专业工程师进行校正。
8.3校正后验证：校正后的测定系统，微生物室负责人对各项指标核实验证，达标后方可投入临床使用，并做好相关登记。
9．应急处理
9.1细菌测定系统为复杂精密仪器出现故障应及时报告负责人并联系厂家技术人员处理。
9．2出现影响检验质量而又不能及时维修的故障，应立即停止仪器鉴定及药敏试验，采用其他仪器设备替代试验。
10．注意事项
10．1仪器需放置在坚固台面上正常工作条件下运行，室内通风良好，避免强光直射。
10．2随机试剂板使用时应防止试剂液体以及其他液体溅到仪器上，避免污染和腐蚀。
10．3检测托盘未有放置随机试剂板，请勿检测使用。
10．4测定系统使用完毕需将仪器擦拭干净，测定系统表面严禁用腐蚀性清洁剂清洗。
10．5工作结束后应关闭电源，用软布或仪器套覆盖仪器防止灰尘进入。
10．6用户使用测定系统之前，请仔细阅读使用说明书。
11．记录表单
《DL-96细菌测定系统使用及保养记录表》
12．参考文献
DL-96细菌测定系统使用说明书
DL-96细菌测定系统随机体外诊断试剂板使用说明书
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