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余杭区农业科技创新项目

项目名称: 野生三叶青驯化栽培、 种质筛选及开发利用
负担单位: 杭州鸿越生态农业科技有限企业
合作单位: 杭州职业技术学院 、 浙江大学
联络人: 邬锡伟 联络电话:
电子邮箱:
申报日期: 7月13日

目 录

一、 项目申请表

二、 项目可行性研究汇报

三、 承诺书

余杭区农业科技创新及社会发展项目申报表
申 报 单 位
杭州鸿越生态农业科技有限企业
项 目
主持人
邬锡伟
项 目 名 称
野生三叶青驯化栽培、 种质筛选及开发利用
起止年限
-05-30——-05-30
联 系 电 话

项目类别
农业科技创新项目
项目拟投入经费
50万元
项目申报单位上年度
销售收入
0万元
技术依靠单位
杭州职业技术学院、 浙江大学
上缴税收
0万元
技术开发费
0万元
项目关键研究内容及预期经济效益:
三叶青是中国独有、 极其稀少而珍贵中草药, 含有抗病毒、 抗炎、 镇痛与解热、 保肝等作用且毒副作用小, 是西药无法替换植物抗生素; 加上抗瘤药用价值发觉与应用, 临床上已广泛用于抗癌、 抗肿瘤及抗艾滋病毒等疾病。多年来, 中国有多个中药厂都在使用三叶青作原料生产中成药, 而且其需求量呈大幅度增加趋势。同时因为环境改变及毫无节制地狂采滥挖, 只挖不种, 加上三叶青对生长环境要求苛刻, 致使原本就稀有野生三叶青日渐稀少, 濒临灭绝, 根本不能满足医药市场需求, 更显现它不可多得珍贵。
本项目研究意在为扩大野生三叶青资源,加速三叶青栽培和开发提供新技术, 关键进行该物种遗传育种和保护生物学研究, 并针对三叶青驯化栽培技术、 生态复合间混种及不一样条件下活性成份分析和优质种质筛选与高效栽培进行研究与应用示范。
一、 关键研究内容
1．三叶青生态栽培技术研究与示范推广
研究三叶青引种驯化栽培、 种源繁殖、 肥料使用、 病虫害防治、 采收与加工等标准化栽培技术规程。依据三叶青关键功效性成份变异规律, 对关键技术进行深入研究, 并进行组装配套, 研究、 制订出适宜本市生产管理规范, 从繁殖材料、 栽培、 收获、 初级加工、 商品分级与包装、 贮藏和运输、 人员和设施、 文件档案管理、 质量确保等方面对三叶青生产管理技术进行全方面具体要求, 并加以推广应用。
2．三叶青种质资源搜集及组织培养技术
在本市范围内开展三叶青种质资源调査工作, 摸清三叶青种质资源分布情况及产业发展概况。在系统调査研究基础上, 在本省关键分布区域搜集三叶青种质资源。经过筛选种质进行组织培养扩繁, 培育优质种苗。
3. 不一样栽培条件三叶青有效成份比较研究及栽培体系建立
开展不一样种源、 不一样栽培方法、 不一样立地三叶青有效成份对比分析研究, 筛选出有效成份含量高、 产量高, 适应山地及平原栽培三叶青种苗, 并建立三叶青复合间混作高效栽培技术体系。
二、 关键技术指标
1、 掌握和控制三叶青快速繁殖影响因子技术。
2、 筛选出适合三叶青组织培养培养基, 培养小苗过程中, 采取愈伤组织培养及最好培养基配方技术, 整个过程时间缩短了6个月, 组培苗移栽成活率达90%以上。
3、 能周年生产三叶青, 向大家提供丰富三叶青药材, 满足人民用药需要, 同时也为花卉市场提供插花材料和观叶盆花, 丰富花卉市场种类。
4、 大面积地推广三叶青种植, 投入产出比可达1︰2～1︰3以上。
5、 采取生态栽培技术: 不使用化学合成肥料、 农药、 生长调整剂、 添加剂、 色素等, 也不采取基因工程和离子辐射技术, 而是遵照三叶青自然生长规律, 培肥、 除草、 防治病虫害、 采收和初加工, 形成三叶青药材及其产物安全生产体系。
三、 关键经济指标、 社会效益及结果
1．制订《三叶青生态栽培技术标准》, 建立三叶青试验、 示范基地20亩, 推广300亩, 投产后年增产值万元, 年增利润400万元, 年增税收80万元。
2．确定三叶青有效成份总黄酮提取工艺并建立快速检测技术。
3．揭示三叶青有效成份与栽培条件变异规律, 为确保三叶青品质提供科学依据。
4．开发一批适宜赏药兼用三叶青生态栽培产品, 满足市场需要。
5．发表学术论文2篇, 申请专利1项。
 经过本项目建设, 以企业为龙头, 联结广大农户, 经过“企业+基地+农户”模式发展优质三叶青产业, 全方面利用高新技术和新品种与人工栽培生产新工艺等, 劳动生产效率和资源有效利用显著提升, 从而深入提升三叶青产品附价值。
主管部门或镇乡、 街道意见:

年 月 日
区科技局意见:

年 月 日

余杭区农业科技创新 项目可行性研究汇报

项目名称: 野生三叶青驯化栽培、 种质筛选及开发利用
负担单位: 杭州鸿越生态农业科技有限企业
合作单位: 杭州职业技术学院
浙江大学
联络人: 邬锡伟 联络电话:
电子邮箱:
申报日期: 7月13日

可行性研究汇报提要

一、 项目概况, 中国外同类研究情况（包含技术水平）;
二、 市场需求、 经济、 社会、 生态效益分析;
三、 关键研究内容、 技术关键;
四、 预期目标（关键技术、 经济指标; 应用或产业化前景）;
五、 已经有条件分析（包含原有基础、 技术力量投入、 科研手段和研究结果生产或应用去向）;
六、 实施方案（包含技术路线、 进度安排）;
七、 投资及应用（包含经费起源及用途）;
八、 申请单位概况（包含企业规模、 技术力量、 设备和配套情况、 企业资产及负债情况）。
九、 项目责任人与关键参与人员简历

一、 项目概况, 中国外同类研究情况
（一）项目研究背景及意义
1、 项目研究关键性
从新世纪开始, 中国进入了全方面建设小康社会加紧推进社会主义现代化建设新发展阶段。同时, 在社会经济快速发展今天, 大量野生植物资源破坏和野蛮采集, 使野生植物种类和数量急剧下降, 最终造成生态平衡破坏, 直接威胁着人类生存与发展。而研究野生植物驯化和生态栽培技术是维护生物多样性、 维持生态环境平衡、 挽救濒于灭绝植物、 保留野生植物种质资源与开发利用根本确保。
浙江省是经济强省, 伴随本省经济迅猛发展, 资源短缺, 生态环境压力加大, 自然资源利用和经济发展之间协调关系将显得日益关键。本省明确提出了建设“绿色浙江”战略目标, 这是全方面推进本省现代化建设和经济、 社会、 环境可连续发展战略选择。主动建设“绿色浙江”, 推行以资源节省型、 科技先导型、 质量效益型和清洁生产为特征可连续发展战略, 在率先建立符合可连续发展要求良性生态环境系统已成为浙江省各级政府一项关键战略任务。研究药用濒危植物栽培技术能正确处理自然资源利用和经济发展之间关系, 是实现可连续性发展关键路径。
2、 三叶青是中国濒危珍稀中药材, 毒副作用少, 应用广泛、 疗效确切, 含有极大开发利用潜力
多年来, 伴随大家保健意识增强, 对三叶青药材需求量日益增大。三叶青为葡萄科崖爬藤属植物, 其块根称为蛇附子, 又称三叶扁藤、 金丝吊葫芦等, 以块根或全草入药, 为民间常见中草药, 含有抗病毒、 抗炎、 镇痛与解热、 保肝等作用, 且毒副作用小、 是西药无法替换“植物抗生素”, 临床上已广泛用于抗癌、 抗肿瘤及抗艾滋病毒等疾病。
三叶青因其药效显著, 开发潜力巨大。霍昕（）在三叶青块根乙醚提取物中共分离出21个化合物, 检测出18个组分, 其中含量较高是亚油酸、 棕榈酸、 油酸、 二苯胺、 亚麻酸甲酯和硬脂酸。李瑛琦（）从块根乙酸乙酯萃取物中分离到7个化合物。毛一亮（）分离到4个化合物, 判定为: β-谷甾醇、 山柰酚、 槲皮素和山柰酚-3-O-新橙皮糖苷。Liu D（）报道从三叶青中得到一个新黄酮碳苷。刘东（1999）从其地上部分石油醚萃取物中分离到4个化合物: 蒲公英萜酮、 蒲公英萜醇、 β-谷甾醇和麦角甾醇。槲皮素可诱导肿瘤细胞凋亡, 又可阻止非肿瘤细胞凋亡; 其提取物能经过增强单核-巨噬细胞吞噬功效而发挥抗肿瘤功效。以三叶青为关键成份金丝地甲胶囊, 可显著抑制LEWIS肺肿瘤细胞、 SMMC-7721肝肿瘤细胞、 HT-60人淋巴母细胞性白血病细胞、 SCG-7901胃肿瘤细胞及HCT-116结肠肿瘤细胞生长。按《保健食品检验与评价技术规范》（）“食品安全性毒理学评价试验”载: “三叶青无毒, 无致突变性”, 其提取物对人肝癌细胞HepG2有较强抑制作用。用三叶青研制出一个创新中药, 有抑制和清除乙肝病毒, 调整机体免疫、 保护肝细胞、 阻断肝纤维化等作用。恶性肿瘤病人口服金芪片（含三叶青）, 总有效率达78.33%。以清热解毒为主、 健脾行气活血为辅中肝合剂（含三叶青）, 配合西药诊疗Ⅲ期原发性肝癌, 可提升患者生活质量, 延长生存期。鉴于三叶青良好药用价值, 其深入开发利用含有十分宽广前景。
另外, 三叶青可塑性强, 三叶青是四季常绿藤本植物, 叶片细小、 繁密、 光亮, 可依据环境和观赏要求进行多样化栽培和造型。阴湿室外环境可铺地栽植, 覆盖率很高, 藤蔓生长速度快。作为盆栽, 可做成一般挂盆或中小盆在室内摆放, 也可培育成特大盆供宾馆、 办公大厅装饰, 长久摆放。三叶青庭园栽培表现抗病、 少虫害, 十分耐寒。在长江以南地域, 即使在室外越冬, 也可完全不用任何防寒方法, 室内盆栽则可在江北地域广泛应用。
3、 三叶青野生资源急剧降低, 充足利用优良种质资源, 进行人工栽培是保障三叶青资源可连续利用、 产业可连续发展肯定路径。
长久以来三叶青药材一直依靠野生资源, 资源利用方法是非再生性采挖, 首先造成野生三叶青资源蕴藏量急剧下降, 很多传统产区无药可采, 如不立刻搜集和保留, 有可能造成灭绝; 其次不一样产地野生药材有效成份存在显著差异, 严重影响三叶青质量。所以三叶青驯化栽培是保障三叶青产业连续发展肯定路径。三叶青关键生长在荫蔽度较高山谷、 灌丛林间等腐殖质较高地方, 在阳光直射地方偶有生长, 但生长不良, 其生长环境要求相对严格。不一样种质其生物学特征有较大差异, 尤其是其药用部位块茎变异幅度更大, 有圆形、 椭圆形、 长椭圆形、 葫芦形、 纺锤形或团块状等。三叶青群落结构复杂, 伴生植物丰富, 多年来野生资源遭受人为破坏十分严重, 在本省分布地已经很狭窄, 资源蕴藏急剧降低, 据统计其药材总蕴藏量仅有约24441.20kg, 已远远不能满足市场需求, 价格居高不下, 近几年上涨幅度大, 且有深入攀升之趋势。所以在加强三叶青野生资源种质保护同时进行三叶青驯化栽培、 育种、 野生抚育等方面研究, 在广大农村地域进行推广种植, 有利于三叶青资源连续利用。
本项目研究意在为扩大野生三叶青资源, 加速三叶青栽培和开发提供新技术; 本研究还为开展该物种遗传育种和保护生物学等方面研究提供了良好试验基础, 含有广泛应用前景; 利用快繁技术繁殖三叶青, 能够提升土地利用率开辟了新途经, 对农业结构调整和贫困山区经济发展含相关键现实意义和长远历史意义; 还能够保持自然界生物多样性向大家提供丰富三叶青种质资源, 处理三叶青药材起源匮乏问题, 满足人民用药需要, 可实现可连续性发展。而且也能够改善市场三叶青供给和提升三叶青药材品质, 以及为对应品种深度系列开发提供研究基础。另外, 对探讨药用观赏植物人工驯化栽培、 盆栽培养和快速繁殖都有一定创新价值, 故研究三叶青生态栽培和快速繁殖等方面技术研究有重大经济和科研价值。
二、 中国外研究现实状况和发展趋势
现在中国外对三叶青研究关键集中在化学成份、 药理以及生药判定等方面, 钟晓明等 经过研究三叶青提取物（包含总黄酮、 总氨基酸及多糖成份）对 CCl4 致急性肝损伤小鼠保护作用, 发觉其能够显著降低肝损伤小鼠 ALT (谷丙转氨酶)、 AST (谷草转氨酶) 增高, 减轻肝细胞变性, 炎症浸润及坏死等病变; 降低肝中 MDA (丙二醛) 生成量。伍昭龙等同时开展了三叶青水煎液对 CCl4 致大鼠急性肝损伤保护作用研究, 研究结果表明, 该中药除能降低肝损伤大鼠血清 ALT、 AST 及 MDA 水平外, 还能降低 ALP (碱性磷酸酶) 水平; 而 SOD水平显著升高。基于钟晓明等研究基础, 黄真和毛庆秋深入研究了三叶青总氨基酸对 CCl4 诱导小鼠急性肝损伤保护作用, 研究结果显示, 其能够显著降低急性肝损伤小鼠 ALT和 AST活性升高, 同时还能降低肝脏指数及肝中MDA 生成量, 提升肝中SOD 活性, 减轻肝细胞变性、 炎症浸润及坏死等病变。杨雄志采取小鼠尾静脉注射BCG 和LPS 方法成功造出免疫性肝损伤模型, 该模型小鼠血清转氨酶和 LDH (乳酸脱氢酶)显著升高, 肝匀浆 MDA 含量也显著升高, 但 SOD 水平显著降低; 对照病理模型组, 杨雄志发觉不一样剂量三叶青提取液给药组小鼠血清 AST ALTLDH 水平降低 肝损伤不一样程度减轻, 研究结果表明, 三叶青提取液对BCG 和 LPS诱导小鼠免疫性肝损伤含有良好防护作用。恶性肿瘤诊疗现在在医学界尚无理想药品和方法, 且这类疾病药品耐受性显著增高, 但同时中医中药及相关营养支持疗法为诊疗恶性肿瘤开辟了新路径。据1998年报道三叶青乙酸乙酯溶部分关键成份为 6’-0－苯甲酰基胡萝卜甙(6’－O－benzoyldau－costerol) 含有一定肿瘤抑制和抗病毒作用; 丁钢强等 年研究发觉, 三叶青提取物中乙酸乙酯溶部分对人肝癌细胞HepG2 活性含有较强抑制作用正丁醇部分也有一定作用, 有力支持和验证了以上研究结果。研究同时发觉, 三叶青提取物对正常原代培养大鼠肝细胞活性没有显著影响, 对 LDH 活力影响也较对 HepG2 要小, 提醒三叶青各部分提取物对正常细胞影响较肿瘤细胞要小, 在此基础上魏克民等 年深入进行了三叶青抗恶性肿瘤机制试验研究, 结果表明, 三叶青提取物对人肝癌细胞 HepG2 活性含有较强抑制作用, 研究结果再次证实 三叶青提取物中乙酸乙酯溶部分确含有很好肿瘤细胞毒作用; 魏克民等还发觉, 三叶青提取物对小鼠 HepG2 细胞端粒酶基因表示有抑制作用, 并有增强小鼠细胞免疫和体液免疫功效作用, 而对正常原代培养大鼠肝细胞活性没有显著影响。临床上令人振奋是 魏克民等用三叶青、 黄芪、 人参皂苷配制而成金芪片诊疗恶性肿瘤 120 例, 完全缓解 52 例, 部分缓解 42 例、 稳定 18 例、 进展 8 例, 缓解及部分缓解共 94 例, 总有效率 78．33％; 姜初明和龚黎燕采取清热解毒为主, 健脾行气活血为辅中肝合剂, 含三叶青配合西药诊疗Ⅲ期原发性肝癌, 提升了Ⅲ期原发性肝癌患者生活质量, 延长了其生存时间。同时发觉, 中国外对三叶青生物学和栽培繁殖特征上研究比较少, 现在只有沈宗根 、 戴雅娟、 吕洪飞 等人研究了不一样遮荫处理对三叶青光合作用, 叶绿素荧光以及叶绿素含量影响, 对于三叶青人工繁殖和生态栽培技术研究却极少报道, 中国学者只研究了用三叶青进行人工繁殖技术, 但成活率低, 产量不高, 还未见其三叶青种质筛选方面报道。因为三叶青含有很高药用和观赏价值, 药材市场三叶青需求量很大, 而人工繁殖又极少, 大家开始大量采集野生三叶青, 造成野生三叶青资源锐减。笔者在其它园林植物人工繁殖基础上, 以三叶青为试材,对三叶青引种和快速繁殖进行研究, 利用茎叶进行容器苗快速繁育, 使三叶青工厂化生产成为可能, 从而处理三叶青药材起源匮乏问题, 满足人民用药需要, 并能带来可观经济效益, 同时还能够保护野生三叶青资源。二十世纪80年代以来广大科学工作者一直从事三叶青块根（三叶青）化学成份、 药理以及生药判定等方面研究。本世纪初也有学者开始研究了三叶青生长发育与光照强度、 温度、 激素、 pH值关系和三叶青人工繁殖技术。总而言之, 对三叶青化学成份、 药理作用研究已经很多, 未来对三叶青研究发展趋势关键是对其块根形态发育以及三叶青种质筛选及高效生态技术等方面进行研究。
综观中国外药用植物栽培动态能够看出, 三叶青发展正展现出这么多个基础趋势: 三叶青生产消费总量在连续上升; 三叶青产业化、 科学化程度快速提升; 三叶青育种工作加强、 质量不停提升; 在重视经济效益同时, 兼顾社会效益和生态效益; 重视研究三叶青生物学特征, 加强三叶青种植、 推广适应性与针对性; 形成集团企业, 集三叶青研究、 种植、 推广、 加工、 销售等等。
所以, 针对三叶青驯化栽培技术研究、 标准化栽培技术制订和推广, 开展三叶青有效成份分析、 三叶青种源搜集、 优良种质筛选及高效栽培研究是非常必需。

关键参考文件:

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[4] 程伟,陆曙梅．三叶青提取物对肺癌A549细胞体外抑制作用[Ｊ]．中国试验方剂学杂志, 13（10）: 53-56．
[5] 汪珍, 冯健, 王晓华等．三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞凋亡影响[Ｊ]．浙江中医药大学学报 , , 32（3）: 321-324．
[6]杨学楼, 罗经, 孙松柏, 等．三叶青抗病毒作用研究［J］．湖北中医杂志, 1989 ( 4) : 40.
[7]钟晓明, 毛庆秋, 黄真, 等．三叶青提取物对烫伤大鼠肠道局部和全身免疫功效影响 ［J］．中药材, , 29( 9) : 953.
[8]]刘东, 杨峻山.中国特有植物三叶青化学成份研究.中国中药杂志, 1999, 24(10):611-
612.
[9] 魏克民, 丁刚强.中草药三叶青抗肿瘤作用机制试验研究和临床应用.医学研究杂志,
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[10]冯正权, 倪克锋, 何煜, 等．三叶青黄酮诱导 SGC- 7901胃癌细胞凋亡试验研究 ［J］．中国临床药理学与诊疗学, , 11 ( 6): 669.
[11]毛一亮, 张佳佳, 丁萍月, 等．正交设计法优化三叶青中总黄酮提取工艺［J］．西北 药学杂志, , 12(28) : 369.
[12] 倪克锋, 金波, 蒋福升, 等. 三叶青黄酮对H22荷瘤小鼠TIMP 2mRNA 表示影响 [J].中国中医药科技, ,163 :195-196.
[13] 徐彩菊, 白宁宁, 孟佳, 等. 三叶青提取物体内抑瘤作用及其机理研究[J].中国卫生检验杂志,,19 2 :278-280.
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二、 市场需求、 经济、 社会、 生态效益分析
（一）市场需求分析
三叶青是一个用途广泛中草药, 含黄酮类如槲皮素及三萜类化合物、 蒲公英萜醇等关键有效化学成份, 在临床上已广泛用于抗癌及抗艾滋病毒、 诊疗血液病与心脑血管疾病、 肝炎、 脑膜炎、 急性支气管炎、 肺炎、 肠炎及咽喉炎、 小儿外感高热等疾病。以三叶青为关键原料成功研发中成药金芪片、 金丝地甲胶囊是含有中国特色新一代防治恶性肿瘤药品, 尤其是三叶青抗癌疗效被发觉和应用后, 三叶青价格飞速上涨, 在市场上供不应求, 由下表可知, 平均价格只有85元/kｇ到上涨到250元/kｇ, 是价格2.9倍, 上涨速度最快是-增加率达28％。现在, 中国外对三叶青研究方兴未艾, 研究不停深入, 其药用价值不停被开发和利用, 且野生资源日渐枯竭, 栽培资源需要周期长, 其价格肯定会继续攀升。
-三叶青药材市场价格
年份
平均价格元/kg-1
增加率/%

85
-

120
41

150
25

180
17

250
28
（二）经济、 社会、 生态效益分析
1、 经济效益分析
本项目采取生态高效栽培, 包含容器盆栽及间套种技术, 试验期间三叶青每亩可取得净收益20万元, 150亩三叶青实现净收益3000万元。三叶青是多年生常绿植物, 一次种植科连续收获, 伴随栽培技术提升, 以后单位面积产量还可逐年递增。因为三叶青高投入、 高风险、 高科技, 所以利润很高, 效益非常显著。假如考虑其深加工潜力, 经济效益愈加可观。该项目实施可增加产量60%左右, 150亩每年可增加净收益1800万元。下图是试验区三叶青栽培模式:

图1 三叶青高效栽培方法研究

图2 三叶青套种技术研究

图3 经过筛选三叶青栽培形成发达块根
2、 社会效益分析
(1)本项目实施, 能使本市三叶表生产率先实现集约化、 标准化, 从而改变了现在三叶青种植业品质低下、 技术含量低传统模式, 促进本市乃至浙江省中药材产业可连续发展。

(2)本项目建成最少可处理50至60人劳动就业, 同时直接带动发展其她就业人员140人以上, 并经过提供种子种苗、 技术培训、 产品订协议办证收购等方法带动周围中药材生产基地300-500亩, 对当地农业增效农民增收含有辐射和示范作用。
(3)经过本项目建设, 以企业为龙头, 联结广大农户, 经过“企业+基地+农户”模式发展优质三叶青产业, 全方面利用高新技术和新品种与人工栽培生产新工艺等, 劳动生产效率和资源有效利用显著提升, 从而深入提升三叶青产品附价值。
3、 生态效益分析
项目实施后, 可开发山区部分荒地复耕, 提升土地综合利用。从耕地资源角度看, 耕地是一个极为宝贵、 不可再生资源, 这对于缓解及处理日益严重耕地问题, 有着深远意义。
从种质资源保护角度看, 企业充足研究利用当地中药材资源, 保护了野生三叶青资源, 有利于维护当地生态平衡。
三、 项目关键研究开发内容、 技术关键
（一）进行优良品种质筛选及品种选育。
开展种源与无性系选择, 并筛选可大力推广高品质优良三叶青。项目采取野生种子, 筛选原原种, 采集种子和外植体进行人工仿野生条件下栽培。
（二）对三叶青人工组织培养技术、 小苗培养技术、 改善大田栽培技术等方面进行深入探索研究。
1、 人工组培育苗
筛选择2—3个培养基与原来采取培养基比较、 观察后, 选定最好培养基进行愈伤组织培养、 扩繁。
目标要求: 组培过程即由原种外植体进行组培——愈伤分裂。培养小苗过程中, 愈伤分裂速度加紧, 幼苗根系发达, 分叶清爽, 整个过程时间缩短7个月。
2、 小苗扩繁后, 经过驯化炼苗达成壮苗出圃过程中, 经过假植基质选择、 改善种植方法、 严格控制肥水管理同时, 采取“脱离净化条件下自然光炼苗”技术方法。既便于管理, 出苗率由原来70%—80%提升到90%以上, 同时又能节省30%电能, 节省了成本。在试验中已得到验证。
（三）壮苗培育、 生态复合间混栽培安全高效生产技术。
栽后促早发、 降低僵苗、 死苗, 采取种植基质改良, 调整基质配比, 进行营养土容器栽培。大棚排灌通畅, 安装喷灌、 雾喷设备, 夏天防晒防高温, 降温安全度夏。冬天盖膜防冻, 确保安全过冬。春秋经过保护地栽培法延长三叶青生长最适温度时间。成品苗成活率由原来40%—50%提升到90%。
（四）经过一定栽培环境和技术控制, 确保三叶青中黄酮类有效成份含量, 达成甚至超出野生三叶青含量水平, 在确保其品质前提下提升单位面积产量, 尤其大棚栽培产量, 实现批量生产, 并达成有机食品生产标准要求。
四、 预期目标（要达成关键技术经济指标; 自主知识产权申请拥有设想）
（一）技术经济指标
1、 掌握和控制三叶青快速繁殖影响因子技术。
2、 筛选出适合三叶青组织培养培养基, 培养小苗过程中, 采取愈伤组织培养及最好培养基配方技术, 整个过程时间缩短了6个月, 组培苗移栽成活率达90%以上。
3、 能周年生产三叶青, 向大家提供丰富三叶青药材, 满足
人民用药需要, 同时也为花卉市场提供插花材料和观叶盆花, 丰富花卉市场种类。
4、 大面积地推广三叶青种植, 投入产出比可达1︰2～1︰3以
上。
5、 采取生态栽培技术: 不使用化学合成肥料、 农药、 生长调整剂、 添加剂、 色素等, 也不采取基因工程和离子辐射技术, 而是遵照三叶青自然生长规律, 培肥、 除草、 防治病虫害、 采收和初加工, 形成三叶青药材及其产物安全生产体系。
（二）应用和产业化前景
现在三叶青高效栽培技术已经成为三叶青产业可连续发展最大障碍, 经过本项目研究, 获取三叶青优质种质利用技术、 三叶青快速繁殖技术、 三叶青容器栽培技术及三叶青套种生态栽培技术, 使三叶青产业化生产成为可能, 从而满足市场对三叶青需求, 同时可降低对其野生资源和环境破坏, 而且可取得可观经济效益, 所以含有广泛应用前景。
（三）预期获取自主知识产权
1、 获取自主知识产权三叶青繁殖和栽培技术方面专利1项;
2、 在关键期刊发表论文3篇以上。
五、 项目现有技术基础和条件
（一）现有工作基础
项目组对三叶青开展了大量前期研究工作, 近四年来已对三叶青种质筛选及高效栽培方面进行前期研究, 经过物候观察, 包含萌芽期、 生长久、 开花期、 结果期以及块根发育期等; 植物学特征观察, 包含芽、 叶、 花、 块根习性等; 抗性、 耐贮性等。
另外, 还开展了田间栽培试验, 如培养土配制试验, 间套种试验及育苗技术等。经过观察和试验, 初步明确了三叶青能在山地不一样海拔高度驯化栽培, 而且伴随海拔提升, 夏季清凉而春季回暖迟, 有利于三叶青种块根发育, 田间生育期显著延长, 为争取培育大块根发明了有利条件; 也明确了三叶青培育需要较大荫蔽度, 需在荫棚内栽培或与乔木木混作, 适合套种和间混种。
（二）研究支撑条件
1、 研究队伍
课题组组员共有6人, 其中高级职称有3人, 中级职称3人（专职试验员1人）, 对三叶青种质采集与判定、 影响三叶青生长与块根发育试验、 组织扩繁及相关栽培试验都能自行完成。

项目组组员表
姓 名
其她信息
任全进
职务（职称）
讲师
出生年月
1969-06-13
从事专业
园艺
工作单位
杭州鸿越生态农业科技有限企业
在本项目中分工
引种驯化与品种筛选、 生产管理
夏更寿
职务（职称）
高级工程师
出生年月
1966-05-16
从事专业
园艺
工作单位
杭州鸿越生态农业生态有限企业
在本项目中分工
生态栽培研究、 田间试验
何国强
职务（职称）
总经理
出生年月
1975-06-18
从事专业
园艺
工作单位
杭州鸿越生态农业科技有限企业
在本项目中分工
示范基地建设、 产品试验示范
朱岩
职务（职称）
教授
出生年月
1962-06-20
从事专业
化学分析
工作单位
浙江大学
在本项目中分工
化学检验与品质评价
徐明仙
职务（职称）
副教授
出生年月
1966-03-16
从事专业
环境分析
工作单位
杭州职业技术学院
在本项目中分工
生物产品试验、 水土环境分析

2、 研究试验条件
本单位含有以下试验设备:
拥有面积达5000m2栽培试验基地。
植物生理试验室和组培试验室各一个。
生物倒置显微镜XD101一台。
人工气候箱SPX-250LC三台。
垂直超净工作台SW-CT-2FD四台。
立方法高压灭菌锅LDZX-40-1二台。
电子精密天平BS110S二台。
冰箱205L三台。
生化培养箱SPX-2501二台。
一般显微镜五十台。
调温调湿箱DR302二台。
培养皿、 锥形瓶等玻璃器皿若干。
本单位含有以下试验条件:
企业始, 前后总投资300余万元, 进行基地建设, 其中按GMP要求建设20亩三叶青生产专用基地, 搭建钢架大棚60个, 连栋大棚8000平方米, 基地水、 电、 路配套。20亩三叶青基地大棚全部安装地喷、 雾喷、 肥、 水管网, 进行人工智能控制。企业建有500平方米组培工厂一座, 按年生产能力80万瓶设计, 现在年生产组培苗20万瓶左右。企业已形成一个以三叶青为关键, 其她中药材种植为辅特色农业生产基地和中草药生产科技型企业。
另外, 合作单位分析测试中心含有很多现代化仪器设备, 能在试验室和栽培基地完成所需各项研究。
六、 实施方案（包含技术路线、 进度安排）
经过严谨、 优异试验手段和方法, 取得可靠试验数据, 筛选出三叶青无菌培养最好培养基和环境条件; 利用生态栽培技术手段进行三叶青高效栽培, 探讨三叶青快速繁殖与生态栽培环境条件和栽培基质; 建立三叶青安全生产及品质确保技术体系。
本项目以三叶青种质筛选、 快速繁殖、 生态栽培及活性成份分析为根本, 按以下技术路线进行研究。
三叶青种质搜集
种质筛选并判定
三叶青快速育苗技术研究
三叶青高效复种技术研究
三叶青生态栽培模式
三叶青安全高效栽培体系与示范
总结及推广应用
三叶青活性成份分析与对比

课题研究采取产学研结合, 实施课题制管理, 在课题责任人负责基础上, 分“课题-子课题”两级管理, 由课题责任人负责签署课题分级协议, 并报归口部门立案。子课题由课题组组员分工研究。
课题分解:
1、 三叶青种质资源搜集与优质种质筛选;
2、 三叶青扩繁与容器栽培关键技术;
3、 三叶青复种高效生态栽培关键技术及不一样栽培条件下活性成份分析。
六、 计划进度安排
本项目根据生产要求设计生产工艺, 实施规范化操作, 严格, 根据科学选种、 科学培育、 科学用药、 科学管理等工艺技术方案, 确保项目提供三叶青品种好、 质量高、 效益好。
.05—.12
1、 进行优良种质选育。开展种源与无性系选择, 并筛选可大力推广高品质优良三叶青种苗。项目采取野生种子, 筛选原原种, 采集种子和外植体进行人工仿野生条件下驯化栽培。
2、 采集种子或外植体进行组织培养, 筛选择2—3个培养基进行。观察后选定最好培养基进行愈伤组织培养、 扩繁。
3、 中药材GAP种植准备: 选择周围无污染源土地, 进行大气、 水质、 土壤检测, 达成环境保护标准。（浙江省无公害蔬菜标准）
4、 设计实施三叶青生态种植模式。
.1—.9
1、 进行脱离净化条件下自然光炼苗。
2、 开展三叶青种植方法和肥水管理研究。
3、 人工栽培三叶青与野生三叶青活性成份分析研究, 确定优质三叶青生产和质量控制指标。
.10—.5
1、 进行大田栽培, 培育管理。
2、 开展三叶青培养土配比、 适应有机肥料和病虫害防治研究。
3、 利用优质三叶青质控指标, 于花前、 花期和花后等分别测定质量改变, 使采收更合理。
4、 三叶青生态栽培光温湿度控制研究, 确保三叶青最适生长环境。
5、 喷滴灌系统设施安装, 确保供水立刻、 安全、 节能。
6、 测土配方施肥。经过设计理想配方肥(包含专用复合肥、 系列专用复合肥), 实现养分平衡。
7、 进行重金属、 农药残留量与微生物检测。
8、 三叶青优质品系栽培生理与光合生理研究, 三叶青高产优质栽培技术体系研究。
9、 项目验收, 课题总结。
七、 项目预算（包含经费起源及用途）
项目经费预算以下: 杭州市科技局经费20万元, 经费关键用于购置试验材料、 试验外协、 资料印刷、 会议、 调研、 人员劳务、 管理等。

附表:
市级科技计划项目经费概算表
项目名称: 金额单位: 万元
序号
概算科目名称
累计
市财政拨款
经费
地方部门配套经费
自筹经费
（1）
（2）
（3）
（4）
（5）
1
一、 经费支出（累计）
20
20

2
1、 设备费

0

3
（1）购置设备费

4
（2）试制设备费

5
（3）设备租赁费

6
2、 材料费

6.0

7
3、 测试化验加工费

2.0

8
4、 燃料动力费

1.0

9
5、 差旅费

1.0

10
6、 会议费

1.0

11
7、 合作、 协作研究与交流费

2.0

12
8、 出版/文件/信息传输/知识产权事务费

1.0

13
9、 人员劳务费

2.0

14
10、 教授咨询费

1.0

15
11、 管理费

1.0

16
12、 其她开支

2.0

1
二、 经费起源（累计）
20

2
1、 申请市财政经费

20

3
2、 地方、 部门配套拨款

4
3、 自筹经费

5
（1）单位自有货币资金

6
（2）其她资金

八、 申请单位概况
项目主持单位 是一家集科研、 生产、 销售、 技术服务于一体规模化专业型农业科技企业。企业组建有一批技术力量雄厚, 管理科学, 人才精锐活力团体, 企业把握现代农业产业发展方向, 加紧科技结果产业化进程, 努力使产品