基因工程试题.doc

名词解释问题: Primer
 参考答案: 引物。是 DNA 复制先锋, 就象结晶过程中晶核, 引导 DNA 合成。

 名词解释问题: Northern blot
 参考答案: Northern 杂交。用于检测细胞或组织样品中是否存在与探针同源 mRNA 分子检测方法。过程与 Southern 杂交相同, 只不过在 Blotting 过程中转移是 RNA 而不是 DNA 。

 名词解释问题: α-complementation
 参考答案: α-互补。指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段突变体与带有完整近操纵基因区段 α-半乳糖苷酶阴性突变体之间实现互补。这两个无酶学活性产物混合在一起时, 可恢复 α-半乳糖苷酶活性。

 名词解释问题: Real time PCR
 参考答案: 实时 PCR 。经过特定设计 PCR 仪器来实时检测 PCR 扩增过程每一轮循环产物累积数量, 推算模板起始浓度, 这种工作方法就称为实时 PCR 。

 名词解释问题: Southern blot
 参考答案: Southern 杂交。一个检测 DNA 分子方法。将 DNA 片段从琼脂糖凝胶转移到滤膜, 结合了 DNA 分子滤膜先与特定预杂交液进行预杂交, 然后与标识核酸探针和滤膜混合。假如滤膜上 DNA 分子存在与探针同源序列, 那么探针将与该分子形成杂合双链, 从而吸附在滤膜上。在经过一定洗涤程序将游离探针分子除去后, 经过放射自显影或生化检测, 就可判定滤膜上是否存在与探针同源 DNA 分子及其分子量。

 名词解释问题: lytic growth
 参考答案: 裂解生长状态。噬菌体侵染宿主细胞后, 大量复制并组装成子代噬菌体颗粒, 造成宿主细胞裂解现象称裂解生长状态。

 名词解释问题: Genomic DNA library
 参考答案: 指将某生物体全部基因组 DNA 用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围 DNA 片段、 与适宜载体体外重组并转化对应宿主细胞取得全部阳性菌落。

 名词解释问题: Shuttle vector
 参考答案: 穿梭载体。能够在两类不一样宿主中复制、 增殖和选择载体称为穿梭载体。

 名词解释问题: P1 artificial chromosomes
 参考答案: P1 人工染色体载体。结合了 P1 载体和 BAC 载体特征, 是 P1 噬菌体载体改善载体。重组分子不能经过体外包装来感染宿主细胞, 而只能经过电转化来将重组分子导入宿主细胞。

 名词解释问题: Single strand binding protein
 参考答案: 单链结合蛋白。此蛋白能协同地与 ssDNA 结合而不与 dsDNA 结合, 能够减弱链内二级结构稳定性, 从而加速互补多核苷酸重新退火, 并经过消除阻碍 DNA 聚合酶前进链内二级结构, 而提升这些聚合酶连续作用能力。

 填空题问题: 在 DNA 测序中,  Primer walking 定义是（）。
 参考答案: 从目片段一端开始, 利用载体上序列为依据, 设计第一次反应引物进行测序, 然后, 依次依据前一次测序结果, 设计下一次反应引物, 递进测序, 直至完成。

 填空题问题: （）即为质粒拷贝数, 根据质粒拷贝数多少, 质粒能够分为（）和（）, （）质粒多数是部分含有转移能力大质粒; （）质粒多数是部分不含有转移能力小质粒。
 参考答案: 单个细胞中所含有质粒 DNA 分子数目; 严谨型; 松弛型; 严谨型; 松弛型

 填空题问题: 热起始是一个在 PCR 反应中优化目标扩增产物方法, 它可抑制（）扩增。
 参考答案: 非特异性

 填空题问题: 基因操作（Gene manipulation）关键部分是基因克隆（gene cloning）,  gene cloning 基础关键点有（）, （）和（）。
 参考答案: 克隆基因类型; 受体选择; 载体选择

 填空题问题: 绿豆核酸酶起源于绿豆芽, 与 S1 酶相同, 但比 S1 酶更温和, 在（）上才切割, 可使 DNA 突出端变成平端。
 参考答案: 大切口

 填空题问题: 相关感受态出现机制, 现在关键有两种假说: （）和（）。
 参考答案: 局部原生质化; 酶受体假说

 填空题问题: E.coli DNA 连接酶与 T4 DNA 连接酶相同, 但需（）参与, 且其平端连接效率低常见于置换合成法。
 参考答案: 烟酰胺－腺嘌呤二核苷酸（NAD＋）

 填空题问题: Ecok 通常分子组成为 R2M2S , 在这些亚基中,  R 亚基含有（）作用,  M 亚基含有（）作用,  S 亚基含有（）作用, 当该该酶发生作用时, 需用到辅因子有: （）、 （）、 （）。
 参考答案: 限制酶; 甲基化; 识别 DNA 序列; ATP; SAM; Mg2+

 填空题问题: 在 RNA 分离、 纯化和检测过程中, 需控制 RNA 酶活性, 常见 RNA 酶抑制剂有（）、 （）、 （）。
 参考答案: 人胎盘 Rnase 抑制剂; 氧铜核糖核苷复合物; 硅藻土

 填空题问题: 核糖核酸酶 A 起源于牛胰, 为内切核酸酶, 可特异攻击（）。可除去 DNA:RNA中未杂交 RNA 区, 可用来确定 DNA 或 RNA 中单碱基突变位置。
 参考答案: RNA 上嘧啶残基 3' 端

 填空题问题: 大肠杆菌中最少有三种依靠于甲基化限制系统（）、 （）、 （）。它们识别序列各不相同, 但只识别经过甲基化序列, 都限制 CpG 甲基化酶作用 DNA 。
 参考答案: mcrA; mcrBC; mrr

 填空题问题: YAC 载体基础组成元件有（）, （）, （）, （）和（）。
 参考答案: 复制起点; 着丝粒; 端粒; MCS; 筛选标识

 填空题问题: 染色体步查指（）。
 参考答案: 采取一段分离自某一重组体一端非反复 DNA 片段作为探针以判定含有相邻序列重组克隆。

 填空题问题: 转化（Transformation）是在 1928 年由格里菲思在对（）菌进行研究时发觉。转导（Transduction）是 1952 年由莱德伯格在研究（）菌遗传重组时发觉。
 参考答案: 肺炎双球菌（Diplococcus pneumoniae）; 鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）

 填空题问题: Gene cloning 是指（）, 基因文库（Gene library）是指（）。
 答案: 利用重组DNA技术分离目基因; 由大量含有基因DNA（即某一生物全部DNA次序）不一样DNA片段克隆所组成群体

 填空题问题: 常见双脱氧终止法测定 DNA 序列, 其长度通常不会超出 1Kb , 所以进行大分子 DNA 测序时, 需（）, 常见方法有（）、 （）和（）。
 参考答案: 打断大段目标 DNA , 生成大小适合测序小片断 DNA ; 限制酶消化; 超声处理; 在 Mn2＋ 存在下用胰 DNA 酶Ⅰ消化

 填空题问题: 重组 DNA 导入宿主通常方法有（）, （）, （）, （）和（）等。
 参考答案: 转化; 转导; 转染; 感染; 接合

 填空题问题: 利用 PCR 技术介导定点诱变（Site-directed mutagenesis）。较常见方法通常有三种即（）, （）和（）。
 参考答案: 同源重组法; DpnⅠ 法; 重合延伸

 填空题问题: 重合基因（Overlapping gene）是指（）, 间隔基因（Interrupted gene）是指（）
 参考答案: 一个基因序列中, 单个 DNA 序列可编码一个以上蛋白质; 在编码序列中间插入一段无编码作用碱基序列

 填空题问题: 1 单位 NaeⅠ 或 NarⅠ 定义: （）
 参考答案: 切割 1μg 腺病毒 2 DNA 在 50ul 体系中 1 小时所需酶量

 填空题问题: 质粒载体附加功效要素关键有（）, （）, （）等。
 参考答案: α－互补; ssDNA phage origin, promotor

 填空题问题: 基因突变（Gene mutation）类型有（）, （）, （）等。
 参考答案: 简单插入或缺失; 单个碱基置换 系统缺失、 插入或成串碱基置换

 填空题问题: 构建 Gene library 时, 应依据所要分离外源基因大小选择适宜载体, 这些载体通常包含有 λ 噬菌体、 YAC 以及（）、 （）和（）等。
 参考答案: 粘粒（cosmid）; BAC（细菌人工染色体）; 质粒（plasmid）

 填空题问题: 开启子（Promotor）是指（）。通常一个 Gene 是否表示, （）是关键一步, 是起决定作用。在转录过程中, Promoter还是（）结合位点。
 参考答案: 基因转录过程中控制起始部位; 转录起始; RNA 聚合酶

 填空题问题: DnaseⅠ为内切核酸酶, 在不一样辅因子条件下, 产生不一样酶切效果, 当 Mg2+ 存在时（）; 当 Mn2+ 存在时（）。
 参考答案: 独立作用于每条 DNA 链, 且切割位点; 可在两条链大致同一位置切割 dsDNA , 产生平端或 1 到 2 个核甘酸突出 DNA 片断

 选择题问题: SDS 是分离 DNA 时常见一个阴离子去污剂, 下列对其作用描述不正确是（）
 参考答案: D  消除反应中泡沫
点评: 消除反应中泡沫是异戊醇。

 选择题问题: 下列 DNA 聚合酶中, 哪一个酶只切割双链 DNA 中一条链, 产生单链切口, 即切口酶（）
 参考答案: A  DnaseⅠ
点评: 在 Mg2+ 存在下, 独立作用于每条 DNA 链, 且切割位点。在 Mn2+ 存在下, 它可在两条链大致同一位置切割 dsDNA , 产生平端或 1～2 个核苷酸突出 DNA 片段;  Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase 经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去 5'--3' 外切活性多肽大片段, 而聚合活性和 3'--5' 外切活性不受影响;  T4 噬菌体 DNA 聚合酶与 Klenow DNA 聚合酶相同, 但 3'--5' 外切活性强 200 倍, 且不从单链 DNA 模板上替换引物;  T7 噬菌体 DNA 聚合酶活性功效与 T4 噬菌体 DNA 聚合酶和 Klenow DNA 聚合酶类似, 但 3'--5' 外切活性为 Klenow  1000 倍。

 选择题问题: 粘粒（cosmid）是一个人工建造载体, 下列对它描述中哪一项是不正确（）
 参考答案: D  进入受体细胞后, 可引发溶源化反应
点评: 粘粒指带有将 DNA 包装到噬菌体颗粒中所需 cos 序列质粒。包含质粒复制起点, 能够像质粒一样转化并增殖; 包含 cos 位点, 能够像噬菌体颗粒一样包装、 侵染。

 选择题问题: 以下各项中不是 PCR 反应所必需是（）
 参考答案: D  甘油
点评: 甘油能够增加引物与 DNA 链结合, 但不是必需。

 选择题问题: 限制性内切核酸酶能够特异性地识别（）
 参考答案: C  双链 DNA 特定碱基序列
点评: 了解限制性内切酶识别序列。

 选择题问题: 用碱法分离质粒 DNA 时, 染色体 DNA 之所以能够被除去, 是因为（）
 参考答案: B  染色体变性以后不及复性
点评: 碱法分离质粒 DNA 利用关键原理就是质粒超螺旋构象。

 选择题问题: 松弛型质粒: （）
 参考答案: A  在寄主细胞中拷贝数较多
点评: 了解松弛型质粒概念。

 选择题问题: 下面相关限制酶叙述哪个是错误（）
 参考答案: A  限制酶是外切酶而不是内切酶
点评: 了解限制性内切酶特征。

 选择题问题: 以下不属于 PCR 介导克隆为（）
 参考答案: D  DpnⅠ 法
点评: DpnI 法是 PCR 介导诱变方法。

 选择题问题: 限制性内切酶通常保留在（）浓度甘油溶液中。
 参考答案: C  50%
点评: 适宜浓度甘油和二甲基亚砜能够作为冰冻保护剂, 保护生物大分子活性。

 选择题问题: 限制性图谱与限制性片段长度多态性（RFLP）图谱最显著区分在于（）
 参考答案: A  前者是物理图谱后者是连锁图
点评: 具体了解二者概念

 选择题问题: 能够在切口部位起作用酶是（）
 参考答案: B  S1 核酸酶
BAL31 核酸酶关键活性为 3' 外切核酸酶活性, 能够从线性 DNA 两条链 3' 端去掉单核苷酸;  S1 核酸酶可降解单链 DNA 或 RNA , 产生带 5' 磷酸单核苷酸或寡核苷酸, 中等浓度可在切口或小缺口处切割双链; 核糖核酸酶 A 能够特异攻击 RNA 上嘧啶残基 3' 端, 可除去 DNA:RNA 中未杂交 RNA 区;  λ 外切核酸酶能够作用于 dsDNA , 连续逐一释放5’单核苷酸。

 选择题问题: 相关 PCR 描述下列哪项不正确: （）
 参考答案: C  扩增对象是氨基酸序列
点评: 了解 PCR 反应工作原理。

 选择题问题: 以下相关 T4 多核苷酸激酶标识 5' 端制备探针描述中（）是不正确
 参考答案: A  能标识单链 DNA
点评: T4 多核苷酸激酶活性催化 ATP  γ－磷酸基转移至 DNA 或 RNA  5' 末端。

 选择题问题: 同一个质粒 DNA , 以三种不一样形式存在, 电泳时, 它们迁移速率是（）
 参考答案: B  SC DNA>L DNA>OC DNA
点评: DNA 分子结构越紧凑, 泳动时受到阻力越小, 迁移速率越大。

 选择题问题: Agarose-EB 电泳法分离纯化 cccDNA 原理是（）
 参考答案: B  EB 不轻易插入到 cccDNA 中, 所以迁移速度快
点评: 了解 cccDNA 性质和 EB 工作原理。

 选择题问题: 相关 cDNA 最正确说法是（）
 参考答案: A  以 mRNA 为模板合成双链 DNA
点评: 正确了解 cDNA 概念。

 选择题问题: 构建 cDNA 文库时, 首先需分离细胞（）
 参考答案: C  总 mRNA
点评: 构建 cDNA 文库先抽提总 mRNA 出来, 然后反转录成 cDNA 。

 选择题问题: 在下列进行 DNA 部分酶切条件中, 控制哪一项最好（）
 参考答案: D  酶量
点评: 多种酶都有适合自己反应温度; 同时依据酶反应动力学, 酶切反应一定时间后酶活性就会减弱或丧失, 所以控制酶量是最适宜

 选择题问题: 在 DNA 测序化学裂解法中需要（）
 参考答案: B  用同位素或荧光标识 DNA 5'端
点评: 了解 DNA 测序化学裂解法原理。

 简答题问题: 构建粘粒文库时会碰到哪些问题？你怎样处理？
 参考答案: 利用粘粒构建基因文库时会碰到很多困难: ①载体分子会本身连接, 从而造成效率大大降低甚至失败。经过对载体作去磷酸化处理或使用双 cos 位点载体或对载体酶切产物进行部分补平可处理这一问题; ②多个外源片断插入载体中, 会误将两个原来不相连 DNA 片断认为是基因组中连续 DNA 片断。经过搜集 35～45kb 部分酶切外源 DNA 片断与载体连接、 使用双 cos 位点载体或对载体和外源片断酶切产物进行部分补平, 可处理这一问题。③提取基因组 DNA 长度小于 200kb , 将使部分酶切后形成 35～45kb 片断只有少部分在其两端带有酶切位点, 致使目标 DNA 可用性大大降低。在对外源 DNA 片断作部分酶切之前, 应检验其大小, 假如小于 200kb 则不能用于构建文库; ④提取总 DNA 纯度不高, 可能因为出现酶解抑制物而得不到理想酶切产物。所以, 在制备总 DNA 时, 应小心避免混入有机相和水相交界处物质。假如问题依旧出现, 可用氯化铯梯度离心方法纯化 DNA 或重新制备总 DNA ; ⑤在构建文库中常常出现不含外源片断克隆。这种“空”克隆百分比依载体不一样和操作小心程度而不一样 通常而言, 使用单 cos 位点载体, 约有 5％ 克隆是空。使用双 cos 位点载体, 产生空克隆百分比要低得多; ⑥不一样重组质粒拷贝数能够有很大差异, 造成收获量相差悬殊。每当对文库作一次噬菌体扩增, 这些差异将会被深入放大; ⑦尽管文库似乎全方面, 但可能不能取得目克隆。限制酶位点非分布、 包装蛋白污染限制酶、 重组引发序列缺失和扩增时目克隆可能被淘汰等都是产生这种现象原因。

 简答题问题 得到一段未知功效基因序列, 怎样对它进行分析？
 参考答案: ①基因信息序列分析。比如, 两种序列比较; 基因编码领域, 开启子或增强子序列估计; 蛋白质序列氨基酸次序确定; ②新基因发觉, 经过分析 EST （Expressed Sequence Tag）序列结合 DNA Chip 技术寻求新基因; ③基因多型性分析, 分析基因多型性尤其是 SNP （Single Nucleotide Polymorphi）, 发觉并定位功效性基因, 作为人类群体进化, 或者疾病关联标识; ④高级结构估计, 依据测序所得到核酸一级结构信息, 能够估计核酸和蛋白质二级结构及其三级结构, 从而估计其功效。依据测序所得到核酸一级结构信息, 能够估计核酸和蛋白质二级结构及其三级结构, 从而估计其功效。

 简答题问题: 何谓 S1 核酸酶作图？有何应用？
 参考答案: S1 核酸酶作图指: 预先判定 mRNA 端点位置, 设计一段覆盖该端点寡核苷酸, 并作末端放射性标识。然后将该标识寡核苷酸与 mRNA 混合, 退火, 形成杂交体。在 S1 核酸酶作用下, 呈单链状态 DNA 和 RNA 被降解, 保留 DNA-RNA 杂交体双链, 最终经过凝胶电泳检测 DNA-RNA 杂交体中标识 DNA 单链分子量大小, 从而推断 mRNA 末端序列。

 简答题问题: 何为载体？一个理想载体应含有那些特点？
 参考答案: 将外源 DNA 或目基因携带入宿主细胞工具称为载体。载体应含有: ①在宿主细胞内必需能够自主复制（含有复制原点）; ②必需含有适宜酶切位点, 供外源 DNA 片段插入, 同时不影响其复制; ③有一定选择标识, 用于筛选; ④其它: 有一定拷贝数, 便于制备。

 简答题问题: 苏云金芽胞杆菌基因组大小为 5×106bp, 若 p＝99％ , 平均克隆片段为 100kb , 计算构建这么一个完全基因文库所需克隆数。
 参考答案: n=ln(1-p)/ln(1-f) n:一个完全基因文库所包含重组体克隆数 p:所期望目基因在基因文库中出现几率 f:插入片断平均大小与基因组 DNA 大小比值 依据以上公式可得到所需要克隆数为228

 简答题问题: 利用细胞中止杂交（intermit hybridization）能够进行基因定位, 请说出其原理？
 参考答案: 1961 年 Jacob 和 Wollman 利用中止杂交方法建立了一个绘制 E.coli 物理图谱方法。将 Hfr×F－ 杂交, 在混合后不一样时间进行搅拌, 以使接合管断裂, 中止染色体向受体细胞转移。越是排在前面基因进入受体机会越高, 反之排在离起点较后基因进入受体机会越低, 所以用不一样时间来中止杂交, 就能推断出基因次序。

 简答题问题: 试简述 λ 噬菌体 Lytic growth 和 Lysogenic state 两种循环分化及其调整过程？
 参考答案: Lytic growth 是 λ 噬菌体在宿主中大量复制并组装成子代 λ 噬菌体颗粒, 造成宿主细胞裂解。 Lysogenic state 为 λ 噬菌体基因组 DNA 经过位点专一性重组整合到宿主染色体 DNA 中随宿主繁殖传到子代细胞。调整过程:  由感染复数和细胞营养状态决定, 感染复数越高, 营养状态越差, 则溶源化频率就越高。溶源现象生化媒介可能是 3'--5' cAMP, 它在细胞内浓度会随营养条件改变而改变, 当细胞在富营养培养基中生长时, cAMP 浓度较低, 有利于裂解生长; 在缺乏 cAMP 突变细胞中, 更有利于裂解生长另外一个关键调整原因是噬菌体 CⅡ 蛋白, 它是噬菌体基因转录激活子, 抑制裂解功效基因表示, 催化噬菌体 DNA 整合到细菌染色体中去。高浓度 CⅡ 蛋白促进溶源化, 而低浓度 CⅡ 蛋白促进裂解生长。当 CⅡ 蛋白浓度足够时, 激活 CⅠ蛋白和基因 int 表示, 造成噬菌体 DNA 与染色体整合, 朝着溶源态生长。

 简答题问题: 怎样从原核生物中克隆复制子？
 参考答案: ①载体抽提（该载体无复制子或复制子被切除）及酶切; ②将所需要研究外源 DNA 进行不完全消化; ③将经过不完全消化外源 DNA 片断连接到载体多克隆位点; ④在抗性平板上能生长质粒即为含有复制子目标片段, 可用此方法深入将复制子定位。

 简答题问题: 简述基因克隆两个基础特征？
 参考答案: 基因克隆两个基础特征是一是强调外源核酸分子（通常情况下都是 DNA）在不一样宿主中繁殖, 打破自然种界限未来自于不相关物种基因放入一个宿主中是基因操作一个关键特征, 基因操作另一个关键特征是繁殖。

 简答题问题: 简述 T4 多核苷酸激酶活性和用途？
 参考答案: T4 多核苷酸激酶活性催化 ATP  γ－磷酸基转移到 DNA 或 RNA  5' 末端。可表现为两种反应, 正反应指 ATP  γ－磷酸基被转移到去磷酸化 DNA 5' 端, 用于对缺乏 5'－磷酸 DNA 进行磷酸化。在交换反应中, 过量 ATP 可使该激酶将磷酸化 5' 端磷酸转移给 ADP , 然后 DNA 从【γ－32P】ATP 中取得放射性标识 γ－磷酸而重新磷酸化, 所以可用于 DNA 末端标识。用途: 该酶关键用于对缺乏 5'－磷酸 DNA 或合成接头进行磷酸化, 同时可对末端进行标识。经过交换反应, 用于标识 5' 末端, 以供 Maxam－Gilbert 法测序、  S1 核酸酶分析以及其它须使用末端标识 DNA 步骤。