高效液相色谱仪期间核查规程.doc

题目: 高效液相色谱仪期间核查作业指导书
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制订依据: GMP（1998）
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1．目
为了解高效液相色谱仪状态,维护高效液相色谱仪在两次检定时间校准状态可信度,降低因为仪器稳定性改变造成试验结果偏差,特对高效液相色谱仪进行期间检验。
2. 人员及职责
2.1检验员根据指导书负责期间核查计划具体实施及负责期间核查核查统计。
22审核人: 负责审核核查方案、 监督期间核查过程、 确定核查效果、 审核数据。审核人可由中心责任人兼任。
2.2 质量部长审核期间核查结果并负责组织处理核查发觉不符合项目,审核同意核查汇报。
2.3 资料管理员负责仪器设备期间核查统计归档保管。
3. 引用标准
3.1 jjg705-液相色谱仪检定规程
3.2液相色谱仪使用、 维护说明书。
4. 核查条件
4.1 环境条件
4.1.1环境温度5~35 ℃, 相对湿度20%~85%。
4.1.2室内无强烈机械振动和电磁干扰。
4.2 仪器安装要求: 仪器应安装在平稳工作台面上, 电缆线接插件应紧密配合, 仪器接地良好。
4.3 电源要求: 电压为（220±22）V, 频率为（50±1）HZ。
4.4期间核查准备
4.4.1测试设备
秒表: 分度值小于0.1秒
电子分析天平
微量注射器: 10μL, 50μL, （自动进样器不需）
游标卡尺: 15cm/0.02mm以上器具需计量检定合格
4.4.2试药: 萘 甲醇（色谱纯）
4.5人员资格确定 记载全部参与验证工作人员, 并对她们资格进行确定。
姓名
部门
职责
署名
日期

质量部

5. 测试项目和技术指标
确定部件
确定项目
合格标准
输液泵
流量设定值误差SS
0.5ml/min:＜5%; 1.0ml/min:＜3%
流量稳定性误差SR
0.5ml/min:＜3%; 1.0ml/min:＜2%
自动进样器
进样量正确度误差
≤±2%
检测器
基线噪声
≤ 2×10－4AU
基线漂移
≤5×10－3AU/h
整机性能
定性测量反复性误差
RSD≤1.5%（n=6）
定量测量反复性误差
RSD≤3.0%（n=6）
4 测试方法
4.1 流量设定值误差SS和流量稳定性误差SR
选择C18色谱柱, 用100%甲醇为流动相, 流速为1.0ml/min, 开启仪器, 待压力稳定后, 在流动相出口处用清洁、 干燥已称重过容量瓶搜集流动相, 同时用秒表计时, 搜集5分钟, 测量3次, 称重, 计算SS和SR。
SS=（Fm平 - FS）/FS×100%
SR =（Fmax-Fmin）/ F m平 ×100%
式中: SS—流量设定值误差（%）
Fm—流量实测值 Fm=（W2-W1）/ρt·t
W2—容量瓶+流动相质量（g）
W1—容量瓶质量（g）
FS—流量设定值（mL/min）
ρt—试验温度下流动相密度（g/cm3）
t—搜集流动相时间（min）
SR—流量稳定性误差（%）
Fmax—同一组测量中流量最大值（mL/min）
Fmin—同一组测量中流量最小值（mL/min）
F m平 —同一组测量算术平均值（mL/min）
4.2 基线噪声ND和基线漂移
选择C18色谱柱, 用100%甲醇为流动相, 流速为1.0ml/min, 检测波长为254nm, 开启仪器, 待压力稳定后, 统计基线30min, 计算基线噪声（用AU表示）。
基线漂移用1h内基线偏离原点值（AU/h）表示。
4.3 定性、 定量反复性检验
选择C18色谱柱, 用100%甲醇为流动相, 流速为1.0ml/min, 检测波长为254nm, 开启仪器, 待压力稳定后, 精密量取1×10-4g/mL萘/甲醇标准溶液注入高效液相色谱仪, 进样量5～10μL, 连续测定6次, 统计色谱峰保留时间和峰面积, 分别计算相对标准偏差（RSD）。
4.4自动进样器进样量正确度误差试验
取1.5ml进样瓶装入1ml水, 用天平精密称定其重量, 然后置于自动进样器上让其进样10次, 每次50μl。进样完成后再精密称定其重量, 由重量差计算进样量正确度。
5 测试周期
一年
6.责任人对核查结果进行综合评价, 做出核查结论, 发放核查证书, 确定需补充项目立刻间。对验证结果评价应包含:
6.1核查试验是否有遗漏？核查统计是否完整？
6.2核查试验结果是否符合标准要求？偏差及对偏差说明是否合理？是否需要深入补充试验？

附: 反相液相色谱柱性能测试
1.性能指标
项目
标准
理论塔板数
3×104 -- 4×104
不对称因子
0.95 -- 1.05
2.柱性能测试方法
2.1测试条件与标准溶液
2.1.1测试合格液相色谱仪
2.1.2流动相: 甲醇-水（85: 15）; 流速1.0ml/min(直径4.6mm柱); 检测波长254nm
2.1.3标准溶液: 含10-4g/ml尿嘧啶; 10-5g/ml联苯和萘（蒽）甲醇溶液
2.1.4进样量: 10μL
2.1.5游标卡尺
3.测试:
3.1将色谱柱连接到合格色谱仪
3.2进样, 统计色谱图。反复3次, 取平均值。
保留时间需正确到0.02min
3.3计算每米理论塔板数（中国药典附录）
n＝5.54(tR/Wh/2)2 ×1000/L L=柱长（mm）
3.4 依据色谱图计算不对称因子（中国药典附录）

期间核查统计
仪器名称

型号

制造商

系列号

出厂日期

所在部门

正确度等级

安装地点

室温

相对湿度

外观检验

核查方法
柱规格:
流动相: 流速:
标准液:
检测波长
流量设定值误差SS和流量稳定性误差SR
序号

时间min
空称量瓶g
称量瓶加水重g
标准值
流量设定值误差
平均值
1

2

3

计算
流量稳定性误差
结论:
基线噪声ND和基线漂移
见图谱
定性、 定量反复性检验
序号
保留时间
保留时间RSD
峰面积
峰面积RSD
1

2

3

4

5

6

自动进样器进样量正确度误差试验
序号
样品瓶+水重
进样后样品瓶
+水重
进样10次水重
正确度误差
1

2

检测者:
年 月 日
复核者:
年 月 日
确定

检验中心
年 月 日

质量部
年 月 日

验证委员会
年 月 日