安捷伦型高效液相色谱仪详细操作规程.doc

1.目: 规范Agilent 1260高效液相色谱仪维修、 保养、 校正操作。
2.适用范围: 本企业化验室Agilent 1260高效液相色谱仪维修、 保养。
3.相关责任: 化验室精密仪器室
4.引用标准: 仪器说明书及Agilent化学工作者现场操作培训教材
5.规程内容:
5.1开机前准备
5.1.1依据试验要求配制流动相, 须经0.45μm滤膜过滤, 以后再进行脱气处理, 使用前必需用超声波振荡l0-15min, 按无机相和有机相分开别装入溶剂瓶A（装有洗盐装置, 最好固定盛放无机盐水相）、 B中; 对照品和样品溶液进样前要经0.45μm滤膜过滤。
5.1.2若流动相中含有缓冲盐,则必需以每分钟2～3滴速度虹吸10%异丙醇水冲洗seal-wash, 以防有盐结晶在泵头产生而损坏泵头。
5.2.采样前准备
5.2.1打开计算机,进入 Windows 系统, 从上到下依次打开各模块电源。
5.2.2待各模块自检完成后, 双击桌面上“仪器1联机”图标, 将自动进入化学工作站画面。
5.2.3从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,也可单击工作站画面左侧“方法和运行控制”项, 进入方法和运行控制窗口。
5.2.4打开Purge阀（逆时针）, 右击“泵”图标出现参数设定菜单单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。
5.2.5设“流量”逐步增大流速至5ml/min , A通道设到100%, 单击“确定”。
5.2.6单击“泵”图标, 出现参数设定菜单, 单击“泵控制“选项选中“开”单击“确定”则系统开始Purge, 直到管路内由溶剂瓶A到泵入口无气泡为止; 切换B通道(B通道设到100%)继续Purge直到全部通道管路内均无气泡为止。(查看柱前压力, 若大于10Bar, 则应更换排气阀内滤芯/过滤白头。)
5.2.7将泵流量设到0.5ml/min, 若使用双泵则应设定溶剂配比, 如A=80%, B=20%; 关闭排气阀（顺时针）; 再将流量设到0.8ml/min, 2分钟后设定至方法所需流速, 冲洗色谱柱20-30min。
5.2.8单击泵下面瓶图标, 输入溶剂瓶A、 B内流动相实际体积（为保护泵和色谱柱, 请按实际体积输入）和停泵体积单击“确定”, 假如各溶剂瓶溶剂体积小于停泵体积, 泵将自动停止。
5.2.9把缓冲液（用于柱子过渡, 与流动相等百分比乙腈/水、 甲醇/水或10%水溶液）换成流动相, 排气后, 逐步增加至所需流速, 待柱压基础稳定后, 打开检测器等, 观察基线情况。
5.3.数据采集
5.3.1采集方法编辑
5.3.1.1编辑完整方法: 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项, 选中除“数据分析”外三项, 单击“确定”进入下一画面。
5.3.1.2方法信息: 在“方法注释”栏中加入（如方法用途等 单击“确定”进入下一画面。
5.3.1.3泵参数设定: 在“流速”处输入方法所需流量（如1ml/min）; 默认为A为100%, 如需二元高压, 在“溶剂B”处输入所需百分比,则溶剂A=100-B , 也可“插入”一行“时间表”编辑二元梯度; 在“压力限”处输入柱子最大耐高压（提议设定200bar）以保护柱子 ,单击“确定”进入下一画面 。
5.3.1.4 VWD检测器参数设定: 在“波长”下方空白处输入所需检测波长, 如254nm; 在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框,选择适宜响应时间（如>0.1min (2s)）; 如有特殊要求, 也可在“时间表”中能够“插入”一行输入随时间切换波长（如1min 波长=300nm）, 点击“确定”。
5.3.1.5在“运行时选项表”中选中“数据采集”选项, 单击“确定”。
5.3.1.6单击“方法”菜单选中“方法另存为”输入方法名, 单击“确定”。
5.3.1.7从“视图”菜单中选中“在线信号”,选中“信号窗口1”,然后单击“改变”钮,将所要查看信号移到右边框中,单击“确定”。
5.3.1.8进样器参数设定: 在进样模式中输入“进样量”xxμl, 默认为20μl。“标准进针”只能输入进样体积, 此方法无洗针功效。“针清洗后进样”能够输入进样体积和洗瓶位置为xx, 此方法针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针。
进样器进样程序参数设定: 选中使用进样程序, 在“函数”中添加对应函
数即可按程序进样。
5.3.1.9 TCC检测器参数设定: 在“温度”左侧下面方框内输入所需温度, 并选中它, 右侧选中“与左侧相同”——使柱温箱温度左右一致。
5.3.2运行方法
5.3.2.1单针进样
5.3.2.1.1选择“单针进样”图标。
5.3.2.1.2从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项, 输入“操作者名称”, 数据存放目录路径中子目录, 子目录即为数据图谱存放文件夹, 输入后, 鼠标点击其她地方, 会自动弹出“E: \——不存在, 要创建它吗？”单击“确定”。“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”区分:“手动”--每次做样之前必需给出新名字,不然仪器会将上次数据覆盖掉; “前缀/计数器”在“前缀”框中输入前缀, 如0505,在“计数器” 框中输入计数器起始位,仪器会自动命名如、 等等。）“样品位置”填写进样瓶位置。
5.3.2.1.3点击画面中“开始”运行方法, 中间停止采样点“结束”。
5.3.2.2 序列进样
5.3.2.2.1“序列”下“序列参数”, 设置同单针进样, 样品位置不填。
5.3.2.2.2“序列”下选择“序列表”, 在表格中可进行“插入”、 “剪切”“复制”“粘贴”“追加行”等操作, 表格中必需填写“样品瓶”“样品名称”“方法名称”“进样次数”“数据文件进样量”等信息, 其她信息可选择编辑。编辑完成后, 单击“确定”。在“序列菜单中选择“序列模板另存为”为新建序列命名。
5.3.2.2.3在“仪器”菜单中选择“运行序列”运行目前序列。停止采集数据选择“仪器”菜单中“停止运行/进样/序列”。或者同单针进样方法。
5.4.数据分析方法编辑
5.4.1 从“视图”菜单中单击“数据分析”进入数据分析画面。
5.4.2从“文件”菜单选择“调用信号”选中所做数据文件, 单击“确定”, 也可直接双击打开。
5.4.3做谱图优化: 从“图形”菜单中选择“信号选项”, 再从“范围”中选择“自动量程”及适宜显示时间单击“确定”或选择“自定义量程”调整,反复进行直到图百分比适宜为止。
5.4.4积分优化
5.4.4.1从“积分”中选择“自动积分”, 若积分结果不理想,再从菜单中选“积分事件”选项, 选择适宜“斜率灵敏度”、 “峰宽”、 “最小峰面积”、 “最小峰高”。
5.4.4.2从“积分”菜单中选择“积分”选项, 则数据被积分。
5.4.4.3如积分结果还不理想, 则修改对应积分参数直到满意为止。
5.4.4.4单击左边“保留并退出”图标将积分参数存入目前方法中。
5.5打印汇报
5.5.1从“汇报”菜单中选择“设定汇报”选项。
5.5.2单击“定量结果”框中“定量”右侧黑三角选中所采取汇报方法（如面积外标法等 单击“确定”。
5.5.3从“汇报”菜单中选择“打印”则汇报打印结果将显示在屏幕上, 如想输出到打印机, 则单击“汇报”底部“打印”钮即可。
5.6关机
5.6.1关机前, 用95%水冲洗柱子和系统0.5-1小时, 流量0.5-l.0ml/min, 再用100%有机溶剂冲0.5小时, 然后关闭系统。
5.6.2退出化学工作站, 及其它窗口, 关闭计算机（用shutdown关）。
5.6.3关掉主机电源开关。
5.7注意事项:
5.7.1氘灯是易耗品, 应最终开灯, 不分析样品即关灯。
5.7.2 流动相不要使用多日存放蒸馏水（易长菌）。
5.7.3流速忽然忽然变大或变小会造成柱压忽然改变, 时间久了柱子填料会坍陷或松动, 最终柱压下降, 所以泵开始和结束前要注意缓慢改变流速。
6. 变更历史