洁净车间沉降菌检验规程.doc

题 目
洁净车间沉降菌检验规程
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质量管理部
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1 目
对洁净车间沉降菌进行检测, 确保其符合相关要求要求。
2 范围
本规程适适用于洁净车间沉降菌检测。
3 责任者
质量管理部责任人及QC检验员。
4 内容
4.1 测试方法
4.1.1 方法提要
本规程采取沉降法, 即经过自然沉降原理搜集在空气中生物粒子于培养基平皿, 经若干时间, 在适宜条件下让其繁殖到可见菌落进行计数, 以平板培养皿中菌落数来判定洁净环境内活微生物, 并以此来评定洁净车间洁净度。
4.1.2 人员职责及培训
洁净车间测试人员应进行本专业培训并取得对应资格后才能推行对洁净车间测试职责, 其中包含包含卫生知识和基础微生物知识。
洁净车间测试人员应选择与生产操作空气洁净度等级要求相适应穿戴方法, 外面衣服不能带进100000级以上区域。
4.1.3 仪器与器具
包含:
a) 培养皿;
b) 培养基;
c) 恒温培养箱;
d) 高压蒸汽灭菌器。
4.1.3.1 培养皿
通常采取φ90mm×15mm规格培养皿。
4.1.3.2 培养基

大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）。
4.1.3.3 恒温培养箱
必需定时对恒温培养箱进行校验。
4.1.4 测试步骤
4.1.4.1 测试前培养皿表面必需严格消毒。
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4.1.4.2 将已制备好培养皿按采样点部署图逐一放置, 然后从里到外逐一打开培养皿盖, 使培养基表面暴露在空气中。
4.1.4.3 静态测试时, 培养皿暴露时间为30min以上, 动态测试时, 培养皿暴露时间为小于4h。
4.1.4.4 全部采样结束后, 将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
4.1.4.5 大豆酪蛋白琼脂平板培养基经采样后, 在30~35℃培养箱中培养, 时间不少于2d。
4.1.4.6 每批培养基应有对照试验, 检验培养基础身是否污染。可每批选定3只培养皿做对照培养。
4.1.5 菌落计数
4.1.5.1 用肉眼对培养皿上全部菌落直接计数、 标识或在菌落计数器上点计, 然后用5~10倍放大镜检验, 是否有遗漏。
4.1.5.2 若平板上有2个或2个以上菌落重合, 可分辨是仍以2个或两个以上菌落计数。
4.1.6 注意事项
4.1.6.1 测试用具要作灭菌处理, 以确保测试可靠性、 正确性。
4.1.6.2 采取一切方法预防人为对样本污染。
4.1.6.3 对培养基、 培养条件及其她参数作具体统计。
4.1.6.4 因为细菌种类繁多, 差异甚大, 计数时通常见透射光于培养皿后面或正面仔细观察不要漏计培养皿边缘生长菌落, 并须注意细菌菌落与培养基沉淀物区分, 必需时用显微镜判别。
4.1.6.5 采样前应仔细检验每个培养皿质量, 如发觉变质、 破损或污染应剔除。
4.2 测试规则
4.2.1测试条件
在测试之前, 要对洁净车间相关参数进行预先测试, 这类测试将会提供测试沉降菌环境条件, 比如: 这种预先测试或可包含:
a) 温度和相对湿度测试。洁净车间温度和相对湿度应与其生产工艺及工艺要求相适应（无特殊要求时, 温度在18~26℃, 相对湿度在45%~65%为宜）, 同时应满足测试仪器使用范围;
b) 室内送风量或风速测试, 或压差测试;
c) 高效过滤器泄漏测试。
4.2.2 测试状态
静态和动态两种状态均可进行测试。
静态测试时, 室内测试人员不得多于2人。
沉降菌测试前, 被测洁净车间由使用者决定是否需要预先消毒。
测试汇报中应标明测试时所采取状态和室内测试人员数。
4.2.3 测试时间
4.2.3.1 在空态或静态a测试时, 对单向流洁净室（区）而言, 测试宜在净化空气调整系统正常运行时间不少于10 min 后开始。对非单向流洁净室（区）, 测试宜在净化空调调整系统正常运行时间不少于 30 min 后开始。在静态 b 测试时, 对单向流洁净室（区）, 测试宜在生产操作人员撤离现场并经过 10 min 自净后开始; 对非单向流洁净室（区）, 测试宜在生产操作人员撤离现场并经过20 min 自净后开始。
4.2.3.2 在动态测试时, 则须统计生产开始时间以及测试时间。
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4.2.4 沉降菌菌落数计算
4.2.4.1 采样点数目及其部署
在空态或静态测试时, 沉降菌采样点数目及其部署应努力争取均匀, 并不得少于最少采样点数目, 采样点部署规则见附录A。在动态测试时, 沉降菌采样点数目及其部署应依据产品生产及工艺关键操作区设置。
4.2.4.1.1 最少采样点数目
最少采样点数目可从表 1 查到。
表 1 最少采样点数目

面积 m2
洁净度等级
100
10000
100000
300000
＜10
2~3
2
2
2
≥10~＜20
2
2
2
2
≥20~＜40
8
2
2
2
≥40~＜100
16
4
2
2
≥100~＜200
40
10
3
3
≥200~＜400
80
20
6
6
≥400~＜1000
160
40
13
13
≥1000~＜
400
100
32
32

≥≥
800
200
63
63
注: 对于100级单向流洁净室（区）, 包含100级洁净工作台, 面积指是送风口表面积; 对于10000级以上非单向流洁净室（区）面积指是房间面积。
4.2.4.1.2 采样点位置
采样点位置应满足以下要求:
a) 工作区采样点离地面 0.8 m ~ 1.5 m 左右;
b) 可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。
4.2.4.2 最少培养皿数
在满足最少采样点数目同时还要满足最少培养皿数, 见表 2 。
表 2 最少培养皿数
洁净度等级
最少培养皿数（φ90mm）
100
14
10000
2
100000
2
300000
2
4.2.4.3 采样次数
每个采样点通常采样一次。
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4.2.4.4 采样注意事项
4.2.4.4.1 对于单向流洁净室（区）, 采样器采样口应正对气流方向; 对于非单向流洁净室（区）, 采样口宜向上。
4.2.4.4.2 部署采样点时, 应尽可能避开尘粒较集中回风口。
4.2.4.4.3 采样时, 测试人员测试员应在采样口下风侧, 并尽可能少活动。
4.2.4.4.4 应采取一切方法预防采样过程污染和其她可能对样本污染。
4.2.4.4.5 培养皿在用于检测时, 为避免培养皿运输或搬动过程中造成影响, 宜同时进行对照试验, 每次或每个区域取一个对照皿, 于采样皿同法操作但不需暴露采样, 然后与采样后培养皿一起放入培养箱内培养, 结果应无菌落生长。
4.2.5 统计
测试汇报应包含以下内容:
a) 测试者名称和地址, 测试日期;
b) 测试依据;
c) 被测洁净室（区）平面位置（必需时标注相邻区域平面位置）;
d) 悬浮粒子粒径;
e) 相关测试仪器及其方法描述: 包含测试环境条件, 采样点数目以及部署图, 测试次数, 采样流量或可能存在测试方法变更, 测试仪器检定证书等; 若为动态测试, 则还应统计现场操作人员数量及位置, 现场运转设备数量及位置等;
f) 测试结果: 包含全部统计计算资料。
4.2.6 结果计算
4.2.6.1 用计数方法得出每个培养皿菌落数
4.2.6.2 每个测点沉降菌计算其平均菌落数。
4.2.7 结果评定
4.2.7.1 每个测点沉降菌平均菌落数必需低于所选定评定标准界限。
4.2.7.2 在静态测试时, 若某测点沉降菌平均菌落数超出评定标准, 则应重新采样两次, 两次测试结果均合格才能判为合格。
4.3 相关文件
GB/T 16294- …………………………………医药工业洁净室（区）沉降菌测试方法
4.4 相关统计
《沉降菌检验汇报》