流产患者肿瘤坏死因子-α的表达及意义.doc

早期流产患者肿瘤坏子因子-α的表达及意义
【摘要】目的 探讨早期流产患者肿瘤坏子因子-α（TNF-α）的表达以及临床意义。方法 选择2012年1月-2014年1月就诊于我院妇科的早期先兆流产30例（先兆流产组）、早期难免流产30例（难免流产组）以及要求人工流产的正常妊娠女性31例（正常妊娠组）。三组均应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中TNF-α的表达并进行比较；同时对难免流产组及正常妊娠组应用免疫组织化学法检测蜕膜及绒毛组织中TNF-α的表达并进行比较。结果 早期流产两组的血清TNF-α水平明显高于正常妊娠组，分别为（37.52±13.28）ug/l、（11.31±3.92）ug/l，差异具有统计学意义（P＜0.05）；难免流产组血清TNF-α水平高于先兆流产组，分别为（46.72±19.01）ug/l、（28.63±14.47）ug/l，差异具有统计学意义（P＜0.05）；难免流产组TNF-α的免疫染色强度明显高于正常妊娠组，差异有显著性（P＜0.01）。结论 外周血及绒毛组织中高表达的TNF-α可能与早期流产相关。
【关键词】早期流产；肿瘤坏死因子-α
Expression of TNF-α in Women with Early Spontaneous Abortion and its Clinical
Significance
[Abstract] Objective To investigate the expression level and clinical significance of TNF-α in women with early spontaneous abortion.Methods 30 women with early threatened abortion to our hospital during January 2012 and January 2014 were chosen as the group of threatened abortion,and 30 women with early inevitable abortion to our hospital during January 2012 and January 2014 were chosen as the group of inevitable abortion,and 31 normal pregnant women of airificial abortion admitted to our hospital uring January 2012 and January 2014 were chosen as the group of normal pregnant. Enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA) was used to evaluate the protein level of TNF-α in peripheral blood of the three groups． The protein level of TNF-αin villous and decidual tissues of the group of inevitable abortion,and the group of normal pregnant were tested using immunohistochemistry staining． Ｒesults ELISA result showed that the level of TNF-α in peripheral blood of the both groups of early spontaneous abortion were significantly higher than that of the normal pregnancy group, [(37.52 ± 13.28) ug / l vs. (11.31 ± 3.92) ug / l, P <0.05]; the level of TNF-α in peripheral blood of inevitable abortion group was significantly higher than that of the threatened abortion group, [ (46.72 ± 19.01) ug / l vs. (28.63 ± 14.47) ug / l, P <0.05]; Immunohistochemistry staining result showed that the expression of TNF-α in Decidua and villous tissues of inevitable abortion group was significantly higher than that of normal pregnant group ( P ＜0. 01).Conclusion The increase of expression of TNF-αin peripheral blood and decidual tissues may be involved in the pathogenesis of early spontaneous abortion．
[Key words] Early Spontaneous Abortion;TNF-α
临床上早期流产的病因复杂，主要有染色体异常、母体因素、环境因素以及免疫因素。生殖免疫学研究认为胚胎及胎儿属于同种异体移植物，尤其是孕12周内，胎儿与母体的密切联系尚未建立完善，蜕膜及绒毛滋养细胞可合成分泌多种肽类细胞因子参与生殖免疫调节，其正常发育与蜕膜组织中正常的免疫微环境有密切的关系[1]。当母体对胚胎及胎儿的免疫耐受被破坏时即发生先兆流产，甚至难免流产。
肿瘤坏死因子-α（TNF-α）是一种有广泛生物活性的多肽类介质，是NK细胞分泌的一种细胞因子，直接注入可导致孕鼠流产[2]。有学者通过对小鼠的研究发现，流产率高的孕鼠蜕膜组织中有过高的TNF-α表达，并随着母胎界面TNG-α表达的下降，孕鼠流产了亦随之下降[3,4]。本文旨在探讨TNF-α在早期流产中的作用。
1资料与方法
1.1对象 选择2012年1月至2014年1月就诊于我院妇科的先兆流产和难免流产者，纳入条件为停经5-12周；阴道流血或下腹痛坠；彩超提示宫内妊娠；既往无习惯性流产史；无严重全身性疾病；无生殖器官异常；无烟酒、毒品等不良嗜好；无射线、化学毒物接触史。60例符合以上条件者作为研究组，年龄22-32岁，平均年龄25岁，其中30例为先兆流产组，30例为难免流产组。对照组31例为同期同孕龄正常妊娠孕妇，年龄21-33岁，平均26岁。三组年龄及流产时孕周比较差异无统计学意义，具有可比性。
1.2标本采集及处理 三组均抽取空腹静脉血，2ml置于肝素抗凝管中，8h送流式检测，2ml置于不抗凝管中，室温凝固后，离心取其血清于-20℃冷藏以备ELISA检测。取经生理盐水清洗的难免流产组与正常妊娠组蜕膜及绒毛组织，取1g用75%酒精固定，-4℃保存行流失细胞检查，余者用福尔马林固定，石蜡包埋切片，行免疫组化检测。
1.3检测方法 TNF-α测定采用ELISA双抗夹心法, 试剂盒为法国IMMVNOTECH SA公司产品；鼠抗人TNF-α多克隆抗体为美国SantaCruz公司产品；SP试剂盒为美国Zyrned公司提供。
1.4 统计学方法 应用SPSS16.0统计软件对数据进行处理，，计量资料以均数±标准差(± s) 表示，采用t检验进行比较。
2 结果
2.1外周血清中TNF-α的表达 早期流产两组的TNF-α水平明显高于正常妊娠组，分别为（37.52±13.28）ug/l、（11.31±3.92）ug/l，差异具有统计学意义（P＜0.05）；难免流产组血清TNF-α水平高于先兆流产组，分别为（46.72±19.01）ug/l、（28.63±14.47）ug/l，差异具有统计学意义（P＜0.05）。
2.2蜕膜与绒毛组织中TNF-α的表达 难免流产组与正常妊娠组蜕膜、绒毛组织中均检测到TNF-α的表达，但染色强度不同，难免流产组的免疫染色强度明显高于正常妊娠组，差异有显著性（P＜0.01）。
3 讨论
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是由机体单核-巨噬细胞系统产生的一种细胞因子，具有多种的生物活性在女性妊娠过程中也发挥重要作用。研究发现[5],TNF-α在正常孕早期女性血清中的含量较低，随着孕周的增长，至孕中期之后逐渐增加。适量的TNF-ɑ可以对滋养细胞的生长、分化起到一定的调节作用，并促使其分泌孕酮，以利于胚胎的着床以及发育；同时还可以刺激孕妇的分解代谢以便供给胚胎发育所需要的能量，保证妊娠的顺利进行。当母体免疫系统紊乱，单核-巨噬细胞系统被激活，或由于感染的因素导致子宫局部分泌TNF-ɑ时，母血及蜕膜绒毛组织中TNF-ɑ含量就会升高。异常增高的TNF-ɑ可以激活母体辅助性T细胞（Th）1型免疫应答系统，将免疫应答由Th2型为主变为Th1型为主，增强母体对胚胎的排斥反应；促进黄体功能退化，导致血清孕酮水平降低，使妊娠女性内分泌紊乱，不足以维持胚胎的发育；促进前列腺素E2的分泌，兴奋子宫平滑肌，增强其收缩频率和强度；激活母体促凝血系统，加快胎盘血栓的形成，促进滋养细胞凋亡，影响胚胎营养供应，导致流产的发生[6]。
本研究结果显示，母体血清、蜕膜、绒毛组织中高水平的TNF-α可以导致流产的发生，并且早期流产患者血清、蜕膜、绒毛组织中TNF-α的水平与妊娠结局相关。TNF-α在早期流产中起到一定的作用，对先兆流产女性行此项血清学检查，并寻找降低其水平的疗法或可成为日后治疗先兆流产的新方式。
参考文献
[1] Ksouri H，Zitouni M，Achour W，et al． Ｒecurrent pregnancy loss related to immune disorders［J］． Ann Med Interne( Paris) ，2003， 154( 4) : 233-247．
[2] El Far M，El Sayed I H，El Motwally A E，et al． Serum levels of TNF-alpha and antioxidant enzymes and placental TNF-alpha expression in unexplained recurrent spontaneous miscarriage［J］． J Physiol Biochem，2009，65( 2) : 175-181．
[3] Torchinsky A，Markert UR，Toder V．TNF-alpha—mediated stress—induced early pregnancy loss：a possible role of leukemia inhibitory factor[J]．Chem ImmunolAllergy，2005，89(8)：62—71．
[4] Berman J，Girardi G，Salmon G．TNF-alpha is a critical effector and a target for therapy in antiphospholipid antibody-induced pregnan—cyloss[J]．J Immunol，2005，174(1)：485—490．
[5] Sissel L O，Neville C W，Solveig T，et a1．Tumor necrosis factor，inter-Leukin-1，and interleukin-6 in normal human pregnancy[J]．Am J Obstet Gynecol，1993，169(8)：397—404．
[6] 程玲慧，曹云霞．TNF-ɑ在IVF-ET后自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达 [J]．实用妇产科杂志，2007，23(9)：555-557．