沙棘油抗胃溃疡.doc

沙棘油和兰索拉唑对小鼠实验性胃溃疡的预防作用的实验研究
XXX （中国药科大学，南京 211198）

摘要 目的：研究沙棘油和兰索拉唑对小鼠胃溃疡的预防作用。方法：采用口服乙醇胃粘膜损伤的小鼠胃溃疡模型，观察实验药物对小鼠急性胃溃疡的预防作用；麦特( Mett)氏毛细管法测定胃蛋白酶的活性。结果：沙棘油高、低剂量组都能明显抑制乙醇致小鼠胃溃疡（P<0.01）,兰索拉唑低剂量组的胃溃疡抑制效果不理想（P=0.067）,兰索拉唑高剂量组的胃溃疡抑制效果较明显（P<0.01）。结论：沙棘油能有效预防乙醇致小鼠急性胃溃疡，实验室合成兰索拉唑高剂量组对胃溃疡有一定抑制作用。
关键词 沙棘油；兰索拉唑；胃溃疡；胃蛋白酶；

Study on the Actions of Sea Buckthorn Oil and Lansoprazole Against Gastric Ulcer
Zhou Ruiqi (China Pharmaceutical University, Nanjing 211198)

ABSTRACT: OBJECTIVE: To study the action of sea buckthorn oil and lansoprazole against gastric ulcer. METHOD: Gastric ulcer models were established in mice by ethanol and the anti-gastric ulcer action were determined. RESULTS: Both the high and low dosage of sea buckthorn oil can prevent gastric ulcer (P<0.01) while the low dosage of lansoprazole didn’t show a well effect and the high dosage of lansoprazole inhibited the gastric ulcer evidently. CONCLUSION: Sea buckthorn can prevent gastric ulcer clearly and the high dosage of lansoprazole can inhibit gastric ulcer while the low dosage of lansoprazole was not very well.
KEY WORDS: Sea buckthorn oil; Lansoprazole; Gastric ulcer; Pepsin

沙棘油主要有沙棘籽油和沙棘果油，是分别从沙棘（Hippophae rhamnoides）的种子和果肉中提取出的油液，皆含有维生素E、C、β-胡萝卜素、亚油酸、黄铜醇、生物碱等多种生物活性物质，用于临床防治某些疾病，并用作化妆品等。研究证明，沙棘油具有多种药理活性，在治疗多种常见病上具有重大临床价值。近年来对沙棘油的研究报道日渐增多，据报道沙棘油对心血管系统、血液系统、免疫系统、消化系统等具有广泛的药理作用，还具有抗氧化、抗放射、抗炎、抗过敏等作用。[1]
沙棘含有较多的黄酮类化合物, 具有开发利用价值。它具有消炎、止痛、杀菌的作用; 能促进组织再生, 并对皮肤和粘膜具有特殊的修复作用;沙棘油还能活化胰腺的分泌、抑制胃液的分泌、对肝脏中的脂肪代谢能起到良好的作用; 能保护细胞的生理代谢不受外来化学物质的破坏等。
兰索拉唑(lansoprazole)是一苯并咪唑衍生物，是继奥美拉唑后又一强有效的质子泵抑制剂，通过抑制胃壁细胞质子泵H+/K+-ATP酶的活性,从而有力并持久地抑制胃酸分泌,用药后24h内对基础和刺激引起的胃酸分泌均有较好的抑制作用,对十二指肠活动期溃疡是高效、安全和不良反应轻微的药物.[2]
胃溃疡是我国人群中常见病、多发病之一。男性发病率明显高于女性，可能与吸烟、生活及饮食不规律、工作及外界压力以及精神心理因素密切相关。典型的溃疡疼痛具有长期性、周期性和节律性的特点。胃溃疡症状常不典型可表现为上腹痛及上腹不适等。绝大部分人可出现各种消化不良的症状，但是有的也无任何症状，直至出现并发症。其常见的并发症主要有出血、穿孔、幽门梗阻、癌变。常见的胃肠道症状及全身症状主要有嗳气、反酸、上腹胀、胸骨后烧灼感、恶心、呕吐、纳差等。反酸及胸骨后烧灼感是由于贲门松弛，恶心、呕吐多反映溃疡可能提示溃疡处于活动期。频繁呕吐宿食，提示幽门梗阻。部分患者有失眠、多汗等植物神经功能紊乱症状。
胃溃疡的发病机制多数认为与胃酸增高、胃蛋白酶增多而形成自身消化、胃血管病变、血栓形成、植物神经紊乱有关。由于沙棘油具有促进创伤修复和抑制胃液分泌的作用，因此我们通过本次实验，验证沙棘油和兰索拉唑对小鼠胃溃疡的预防作用以及它们之间的不同。

1 实验材料
1.1 药物与试剂
1%甲醛溶液100ml；无水乙醇；生理盐水；苦味酸；沙棘子油(鄂尔多斯市高原圣果生态建设开发有限公司；批号：010122)；盐酸雷尼替丁胶囊（南京金陵制药厂，批准文号：H13021317,规格：0.15克*30粒）；鸡蛋白；1%盐酸溶液；兰索拉唑（自合成）。
1.2 实验动物
ICR小鼠36只，体重18~25g，♀♂皆用。由中国药科大学药学院动物中心提供。
1.3 仪器和材料：
玻璃棒，滴管，50ml量筒，10ml小量筒，毫米尺，100ml烧杯一只，50ml烧杯2只，1ml注射器及灌胃针2只；棉线，小鼠手术器械，大头针若干，表面皿2只，精密pH试纸，毛细管；水浴锅；培养皿；37°恒温箱，显微镜。

2 实验方法
2.1 沙棘油对小鼠胃溃疡作用的研究
取24只小鼠，雌雄各半，按性别体重均等分成4组，每组6只小鼠。每个小鼠用苦味酸标记。分别为沙棘子高剂量(10g/kg,100% 0.1ml/10g)，沙棘子低剂量(1g/kg,10% 0.1ml/10g)，阳性药物(雷尼替丁)组(0.02g/kg,2% 0.2ml/10g)，生理盐水对照组（0.1ml/10g）。
各组小鼠每天灌胃给药2次，连续4天。最后一天对小鼠进行禁食不禁水，于末次给药后1.5h给各组灌胃无水乙醇（10ml/kg），0.5h~1h后颈椎脱臼处死小鼠，剖腹找到胃部，结扎幽门、贲门后取出胃部。分别把各组小鼠的胃沿胃大弯切开胃壁, 去除残渣, 收集胃液（取少量测定PH值）, 用少量1%盐酸溶液冲洗胃粘膜, 把胃液连同冲洗液混合于器皿内(即混合胃液)，留作用麦氏细管法测胃蛋白酶活性。
采用盲法测量胃粘膜损伤长度以及溃疡面积，根据以下指标计算溃疡指数。胃损伤评定方法：无损伤0分；点状损伤：出血点，0.1分，损伤 ≥ 1 mm ，1点为0.2分，2点为 0. 4 分；条状损伤 1 条为 1 分 ，2 条为 2分，依次类推；胃黏膜全无为5分，有部分黏膜，视严重情况定为4 ,3 ,2分。计算溃疡抑制率，比较各组间的差异。[3]
溃疡抑制率（%）=(模型对照组溃疡指数-给药组溃疡指数)/模型对照组溃疡指数×100%。
2.2 兰索拉唑对小鼠胃溃疡的影响。
另取小鼠12只，雌雄各半，按性别体重均等分为2组：兰索拉唑高剂量组（80mg/kg,0.8% 0.1ml/10g）和兰索拉唑低剂量组(40mg/kg,0.4% 0.1ml/10g)。单次给药后30min 给每只小鼠灌胃无水乙醇（10ml/kg）,0.5~1h后颈椎脱臼处死小鼠，剖腹找到胃部，结扎幽门、贲门后取出胃部。分别把各组小鼠的胃沿胃大弯切开胃壁, 去除残渣, 收集胃液（取少量测定PH值）, 用少量1%盐酸溶液冲洗胃粘膜, 把胃液连同冲洗液混合于器皿内(即混合胃液)，留作用麦氏细管法测胃蛋白酶活性。
按照上述方法测量胃溃疡指数，以沙棘油实验中的对照组为模型对照组计算溃疡抑制率。并以麦特氏毛细管法进行蛋白酶活力的测定。
2.3 麦特( Mett) 氏毛细玻管法
蛋白管的制备: 即制作充满蛋白的玻璃毛细管, 取10cm长、内径1mm干净的玻璃毛细管, 用注射器把鸡蛋清注入灌满( 注意管内应无气泡) , 然后放入100° 沸水中1min, 使蛋白凝固, 取出备用。
实验时取混合胃液5ml, 加入0. 05mol/L Hcl 溶液10ml 于培养皿中, 摇匀, 调pH为2, 放进蛋白管6根, 盖好玻盖, 在37°恒温箱中培养24h,，取出蛋白管, 用尺测量每根蛋白管两端透明部分的长度( mm) , ( 此表示已被消化了的蛋白质部分) , 求其平均值。推算胃蛋白酶活性单位: 胃蛋白酶活性单位=蛋白管两端透明部分长度平均值2×16。
2.4 数据整理和统计学分析
将所有的数据进行汇总，以x±s表示，采用SPSS19.0 统计软件进行单因素方差分析，每两组间比较方差齐性时采用Tukey HSD 检验，方差不齐时采用Tamhane 检验。以P<0.05为差异有显著性。

3 实验结果
3.1 沙棘油对小鼠胃溃疡的预防作用
由实验结果分析，溃疡指数沙棘油高、低剂量组都与雷尼替丁（阳性药）组比较无统计学显著性差异（P>0.05），而与空白对照组相比具有极显著性差异(P<0.01)，且雷尼替丁组与空白对照组相比具有显著性差异，说明沙棘油可以抑制小鼠乙醇致急性胃溃疡的发生。通过比较各组胃蛋白酶活力的大小可以得出，雷尼替丁组、沙棘油高、低剂量组都与空白对照组相比具有极显著性差异(P<0.01)，沙棘油高剂量组与阳性药比较P=0.612，实验结果表明雷尼替丁，沙棘油都对胃蛋白酶活性具有抑制作用，而在两者都可以抑制胃溃疡发生的同时，沙棘油对胃蛋白酶活力的影响较小，尤其以沙棘油高剂量组的影响更小。

表1 沙棘油对乙醇致小鼠急性胃溃疡的影响（x±s, n=6）
组别
剂量（g/kg）
溃疡指数
抑制率/%
胃蛋白酶活力
空白对照

3.15±1.54 #
---
412±148 #
雷尼替丁
0.02
0.50±0.27 *
84.1 ±9.1*
76±73 *
沙棘油高剂量
10
0.52±0.50 *
83.5 ±16.2*
205±143 *
沙棘油低剂量
1
0.83±0.34 *
73.7±10.5 *
139±117 *
* P<0.01 vs 空白组；# P<0.01 vs 雷尼替丁组
3.2兰索拉唑对小鼠胃溃疡的作用
兰索拉唑低剂量组溃疡指数与雷尼替丁组相比具有显著性差异（P<0.05）而与空白对照组相比不具有显著性差异（P=0.067）;溃疡抑制率与空白组相比具有极显著性差异（P<0.01）,而与雷尼替丁组相比也具有极显著性差异（P<0.01）;低剂量组的胃蛋白酶活力较低与空白对照组的胃蛋白酶活力相比具有显著性差异（P<0.01）而与阳性对照组相比无显著性差异（P=0.598）,这些结果都表明兰索拉唑低剂量组的抗胃溃疡活性较低，对胃蛋白酶活力影响较明显。
兰索拉唑高剂量组的溃疡指数与空白对照组相比具有极显著性差异（P<0.01）而与阳性药相比无显著性差异（P=0.158）；其溃疡抑制率与空白对照组相比具有极显著性差异（P<0.01）而与雷尼替丁组具有具有显著性差异（P=0.011）;蛋白酶活力比兰索拉唑低剂量组有所提高，但与空白对照组具有极显著性差异（P<0.01）而与阳性药组无显著性差异（P=0.866）。这些结果说明高剂量兰索拉唑可以有效抑制胃溃疡，且对蛋白酶活力的提高比低剂量兰索拉唑强。

表2 兰索拉唑对乙醇致小鼠急性胃溃疡的影响（x±s, n=6）
组别
剂量（g/kg）
溃疡指数
抑制率/%
胃蛋白酶活力
空白对照
--
3.15±1.54 #
---
412±148 #
雷尼替丁
0.02
0.50±0.27 *
84.1 ±9.1*
76±73 *
兰索拉唑高剂量
0.08
1.50±0.75 *
52.4±24.3*##
11±22*
兰索拉唑低剂量
0.04
1.95±0.83 ##
38.1±26.1**#
32±35 *
* P<0.01，**P<0.05 vs 空白组；# P<0.01 ,## P<0.05 vs 雷尼替丁组

3.3 胃部组织观察
空白对照组（生理盐水）出现明显的大面积严重出血性溃疡，胃体厚薄不均，黏膜受损明显，溃疡面积大，点状出血和条状出血均出现很多，而且出血部分相连成块；雷尼替丁组溃疡面好转明显，点状出血和条状出血均发生较少，胃壁厚薄均匀，黏膜光滑完整，个别可见小疤痕；兰索拉唑低剂量组胃溃疡面较小，但仍存在点状出血以及条状出血，个别出血创面连接成片，形成明显的出血块，胃壁厚薄较为均匀，黏膜较为完整但可见大量损伤；兰索拉唑高剂量组胃溃疡明显好转，胃壁厚薄均匀，胃粘膜完整光滑，少见条状出血以及点状出血，个别见点状出血；沙棘油低剂量组胃壁厚薄均匀，胃粘膜完整光滑，极少见出血症状，溃疡面小，个别胃粘膜可见小疤痕；沙棘油高剂量组胃壁厚薄均匀，胃粘膜完整光滑，几乎无溃疡面出现，点状出血和条状出血均较小且不明显。

图1 实验组胃部组织观察比较

4 讨论
沙棘油对乙醇致小鼠急性胃溃疡具有良好的预防作用，其高剂量组与雷尼替丁的效果相当。与合成化学药雷尼替丁相比，沙棘油对胃的刺激更小，保护作用更强，同等溃疡抑制作用之下其对胃蛋白酶的活力影响较小，不会造成对胃消化能力的影响，更适合于应用于日常保健。作为一种天然植物成分，将其用于日常保健预防胃溃疡的发生将会具有良好的效果。
兰索拉唑的胃溃疡抑制效果并不理想，其低剂量组的溃疡溃疡抑制率较低，溃疡指数与空白对照组无显著性差异；其高剂量组的溃疡抑制效果相对较好，与空白对照组相比溃疡指数具有极显著性差异，溃疡抑制率相对低剂量组较高，可以达到明显的抑制胃溃疡的效果。但是实验结果表明兰索拉唑对胃蛋白酶的活力影响较大，其刺激性较大，在抑制胃溃疡的同时容易造成消化不良。兰索拉唑低剂量组的康胃溃疡活性较差的原因很可能是因为我们所使用的兰索拉唑原料药为自己合成，未经过分离纯化，其中含有大量无活性的杂质，所以当按照文献剂量给药时，不能达到预期的治疗效果。但其高剂量组的有效性也表明了产品药效的存在。

5 结论
沙棘油对于胃溃疡有很好的预防作用，其高剂量抑制胃溃疡发生的能力堪比胃溃疡治疗药物雷尼替丁，但与雷尼替丁不同的是，沙棘油对为蛋白酶活性的影响较小，且剂量越大胃蛋白酶活力越大。低剂量兰索拉唑的抗胃溃疡活性较差，高剂量抗胃溃疡活性较好，但对胃蛋白酶的活力影响较大，分析兰索拉唑活性低的原因是原料药中含有较多无活性杂质，降低了整体的抗胃溃疡效果。

参考文献：
[1] 刘凤云 沙棘油的药理研究[J] 生物学通报 2005,40（2）：13-15
[2] 李晓昕，张宜山，张方信 注射用兰索拉唑治疗十二指肠溃疡出血临床观察[J] 重庆医学 2010,39（1）：107-108
[3] 刘红艳，张莉华，方步武，田在善 柴郁汤对小鼠应激性胃溃疡的预防作用[J] 中国中西医结合外科杂志 2010,16（2）：206-208