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华南理工大学
本科毕业设计（论文）翻译

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中文译名
水溶性过度金属咔咯配合物对DNA连接和氧化裂解的作用
外文原文名
DNA Binding and Oxidative Cleavage by a Water-soluble Carboxyl Manganese(III) Corrole
外文原文版出处
Chinese Journal of Chemistry,,Vol.31(10)
译 文：
吸取光谱，荧光光谱和CD光谱，以及粘度测量已经研究了小牛胸腺DNA(ct-DNA)与锰的咔咯配合物——5,10,15-三(4-羧基苯基)咔咯的互相作用。成果表明锰的咔咯配合物通过外部沟与ct-DNA结合，该结合常数Kb为 4.67×104 L•mol−1 。在多种氧化剂存在下，由MnIIITCPC作用，ct-DNA裂解作用也被研究。在过氧化氢或叔BuOOH存在下，MnIIITCPC可以以缺口和线性形式切割超螺旋质粒pBR322，然而以KHSO5作为氧化剂却并没有观测到核酸酶的活性。克制剂试验表明，羟基自由基，单线氧没有参与MnIIITCPC为介质 的DNA氧化裂解。在这种氧化裂解反应中，氧代锰(V)的咔咯配合物是也许的活性中间体。
关键词：咔咯，锰，DNA联接，核酸酶活性
引言
在自然中，经由水解磷酸二酯是金属酶催化的DNA高效裂解的途径。在过去几十年里，作为探索生物医药的工具和抗癌药物，意在结合并切割DNA的过渡金属配合物已被广泛研究。卟啉及其金属配合物在生命系统中无处不在并发挥了重要的作用，例如细胞色素P450，过氧化物酶和过氧化氢酶。为追求潜在的应用，在光动力疗法，肿瘤显像，人工核酸酶中，许多水溶性卟啉，如阳离子型卟啉，磺化卟啉，羧酸卟啉已经合成，它们中的某些甚至被用在临床诊断和治疗中。类似的研究已扩大到其他类似卟啉的分子。咔咯大环化合物与卟啉是有许多相似之处。咔咯金属配合物的许多性能与卟啉的比较已经引起了人们极大的爱好。
水溶性磺化咔咯及其金属配合物的合成可以被视为咔咯在生物无机化学的最有价值的应用。磺化咔咯可以与人血清白蛋白(HSA)和转铁蛋白紧密结合，并且，它是白蛋白共轭铁与锰配合物产生的一种非常简朴却非常有效的仿生氧化系统。此前的工作证明，该磺化咔咯可以与小牛胸腺DNA(ct-DNA)通过外部结合模式绑定并且体现出氧化裂解或光切割pBR322DNA的活动。阳离子吡啶基取代咔咯形成另一种类水溶性咔咯。这种带正电的咔咯可以稳定G-四链体DNA并由于具有良好的核酸酶活性而体现出的与带负电负的DNA更好的亲和力，锰(III)配合物在KHSO5存在下与非双螺旋区选择性作用，并且能选择性地靠近双链DNA环形及凸起部位的鸟嘌呤。
羧基卟啉已明显体现出与DNA结合和裂解的良好活性。与此相反，水溶性羧基咔咯化合物与DNA的互相作用仍未报道，并且，由锰的咔咯配合物引起的DNA氧化裂解机制仍

不清晰。本论文要论述锰的咔咯配合物——5,10,15-三(4-羧基苯基)咔咯及其与ct -DNA的相
互作用，以及通过凝胶电泳试验证明，在氧化剂的存在下，其对pBR322DNA的氧化裂解
活性，所采用措施已显示在方案1中。
方案一 锰的5,10,15-三（4-羧基苯基）咔咯的合成

试验
所有购置的试剂，均为分析纯并且未经深入纯化而使用。小牛胸腺DNA买自
Sigma-Aldrich，pBR322DNA购置自上海生工企业。三羟甲基甲氨(Trisbase)，溴化乙锭
(EB)，氯化钠，硼酸酸，二甲亚砜(DMSO)，30％过氧化氢(H2O2)，琼脂糖凝胶加
样缓冲液，和乙二胺四乙酸(EDTA)均来自购置。所有水溶液由去离子水制备。小牛胸
腺DNA的储液（贮存于4℃和所用时间不超过5天），制备缓冲液I与ct- DNA溶液，
ct-DNA的浓度根据其在260 nm处的吸光度和摩尔消光系数值(6600 M-1·cm-1)进行计算。若A260/A280介于1.8和1.9之间，阐明该DNA溶液蛋白质含量足够低，无需做深入处理。
缓冲溶液I(5 mM Tris/ 50 mM NaCl, pH=7.2)，所有波及到ct-DNA的试验均在该溶液中进行。缓冲溶液II(50 mMTris/ 18 mM NaCl, pH= 7.4)，配合物的核酸酶活性研究反应在此溶液中进行。缓冲溶液III(89mM Tris/ 89 mM H3BO3/ 2 mM EDTA，pH =8.3)，凝胶的制备和电泳液均使用该TBE电泳缓冲溶液。
物理测量
Hitachi(日立) 3900H 型紫外可见光谱仪；Hitachi(日立) F-4500荧光分光光度计；JASCO(日本分光) J-810圆二色光谱仪；乌氏粘度计；北京六一31-CN凝胶电泳仪；Bio-rad凝胶自动成像分析仪。
5,10,15-三(4-甲氧基羰基-苯基)咔咯的合成
在250mL圆底烧瓶中加入200 mL 甲醇/ 水(体积比1 :1)，820 mg 4-(甲氧基羰基)苯甲醛(5mmol)和670 mg吡咯(10 mmol), 完全溶解后加入2.1 mL 37% HCl(0.25mmol)溶液，室温下搅拌反应3 h； 反应结束后用DCM萃取, 搜集有机相并水洗3 次,用Na2SO4干燥后过滤, 加入1 g DDQ反应45min。按照措施一中环节纯化，得纯净产物220 mg，产率达19%。UV-Vis
(CH2Cl2) λmax: 420,581, 617,647 nm; 1H NMR (400 MHz CDCl3) δ: 8.73(s, 4H), 8.59 (s, 6H),

8.45 (d, J＝12 Hz, 4H), 8.33 (s,4H), 8.18 (s, 2H), 3.37 (s, 9H); ESI-MS (THF, negative)m/z: 699.1 [M−H]−
锰(III)的5,10,15-三（4-甲氧基羰基-苯基）咔咯的合成
将5,10,15-三（4-甲氧基羰基-苯基）咔咯（50毫克）溶于甲醇溶液（20毫升）中，混
合物在乙酸锰四水合物（100毫克）存在下在回流下2小时。将反应混合物冷却，然后用
CH2Cl2/ H 2 O（200毫升，1:1）洗涤。有机相搜集并用去离子水洗涤两次。将粗产物通过色
谱法纯化（碱性氧化铝，CH2Cl2/ CH 3CN=100:5），通过氯仿/己烷结晶后得到绿色产物。
产物产率为91%。UV-Vis (CH2Cl2) λmax: 414,427, 595, 648 nm; MS (MALDI-TOF,negative)
m/z:752.023 [M−H]−.
锰（III）的5,10,15-三（4-羧基苯基）咔咯的合成
将上述合成的羧酸酯咔咯金属配合物溶解在100 mL甲醇/ THF(2 :1)溶液中，加入6 mL
40%的氢氧化钾水溶液,在40℃下搅拌反应，TLC检测反应进度，原料点完全消失后停止反应，用5%盐酸酸化后用THF/ DCM/ H2O(1:1:2)萃取,搜集有机相并水洗3次，由Na2SO4干燥。减压蒸馏后得到粗产物，以丙酮/正己烷(1:4)重结晶，得到纯净的5,10,15-三(4-羧基苯基) 咔咯金属配合物，产率为87%。UV-Vis (Tris-HCl buffer I, pH＝7.2)λmax: 402, 432, 656 nm; MS (MALDI-TOF, negative)m/z: 709.981 [M−H]−.
DNA氧化裂解试验
紫外——可见光谱显示Mn(III) 咔咯配合物在Tris-盐酸缓冲溶液是非常稳定的并且可以使用3天（图S8）
在缓冲溶液I中，Mn(III) 咔咯配合物吸取滴定使用3mL浓度为2×10−5mol•L−1 的咔咯溶液，并且加入微升的ct-DNA溶液。持续加入DNA溶液并温育5分钟后，记录其吸取值。
荧光光谱测定了溴化乙锭（EB）-DNA系统的发光强度。在3mL具有5μmol•L−1 EB 溶液和30μmol•L−1 DNA溶液的混合溶液中加入微升的浓缩咔咯配合物溶液，并进行荧光光谱测定。每次加入Mn(III) 咔咯配合物后记录荧光光谱数据。所有样本的激发光谱波长为370nm,发射光谱在500-700nm处记录。
ct-DNA（1.5×10−4 mol•L−1）的圆二色光谱测定期，在25℃下，使用氮气流吹扫旋光仪，在1cm比色皿中，测定不加入以及加入不一样浓度Mn(III) 咔咯配合物 (r＝0, 0.1, 0.2, 0.5，其中r是Mn(III) 咔咯配合物与ct-DNA的摩尔比）的数值。CD光谱以500nm/min扫描220~600 nm作为背景，之后所有样品扫描后自动扣除该背景。CD光谱记录三次扫描的平均值。ct-DNA的CD谱的记录作为对照试验。
黏度测定期采用乌氏粘度计，测定期将乌氏粘度计浸没在30.00.1℃的恒温水浴槽中。加入不一样浓度的混合溶液后(r＝0, 0.02, 0.04, 0.06,0.08,0.1,其中r是Mn(III) 咔咯配合物与ct-DNA的摩尔比），恒温培育5min后，使用秒表测得ct-DNA溶液流动的5次时间并求平均值。所得的相对粘度以对咔咯与DNA构成的混合物进行分析，其中和分别为

译文成绩（百分制）：

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加入以及未加入样品时的DNA相对黏度，对照样品在EB溶液中以相似措施处理。
超螺旋pBR322DNA（0.1微克）的裂解反应是在37℃，体积为10μL的缓冲液II中进行的。pBR322DNA（0.1微克）的10微升混合以及，氧化剂和不一样浓度的混合物在黑暗培育中30分钟，然后加入2微升缓冲液。得到的反应混合物通过琼脂糖凝胶(1%)电泳进行分析，以70 V为参数电泳2 h后将凝胶放入EB (1 mg/L)中染色，用水冲洗去EB后放入凝胶成像系统中成像并分析。
成果与讨论
DNA结合方式
吸取光谱研究 电子吸取光谱是最以便的为确定复合体和DNA之间结合的工具。DNA碱基对和芳香族发色团之间插入的结合方式一般导致较大的减色效应和红移现象。而外部结合的方式则会引起较小的减色现象和较弱的红移。在ct-DNA存在下的Mn(III) 咔咯配合物的吸取光谱的变化如图1 。在Mn(III) 咔咯配合物溶液中加入ct-DNA导致7.6％增色和一种小的红移（从432至435纳米）。这一成果表明Mn(III) 咔咯配合物与DNA的结合强弱为中等，两者应当以外部结合的方式进行作用。

吸

收

率

波长/nm
图1 Mn(III) 咔咯配合物(2.0×10−5mol•L−1)与ct-DNA互相作用的UV-Vis光谱(pH＝7.2,5 mmol•L−1 Tris-HCl and 50 mmol•L−1 NaCl缓冲溶液加入ct-DNA溶液浓度(1: 0; 2: 2.0×10−6; 3:4.0×10−6;4: 6.0×10−6; 5: 8.0×10−6; 6: 1.0×10−5; 7: 1.2×10−5;8: 1.4×10−5 mol•L−1)).箭头方向是伴随ct-DNA溶液浓度增长吸取度变化

Mn(III) 咔咯配合物与DNA的内在结合常数Kb可以根据从增长在432 nm测定的吸光度的变化并使用吸取光谱滴定数据结合下列公式计算：

式中，εa是配合物与DNA结合时的摩尔消光系数，εf和εb分别为配合物未与DNA结合以及
完全与DNA结合的摩尔消光系数。以[DNA]/ |εa–εf | 对[DNA]作图，拟合直线的斜率与截距的比值即为结合常数Kb。经计算，Mn(III) 咔咯配合物与DNA的内在结合常数Kb 为4.67×104 L•mol−1 。这一结合常数比锰的阳离子咔咯配合物小，但要不小于锰的磺化咔咯配合物。

图2 是[DNA]/|εa-εf |与[DNA]的关系图

荧光光谱研究 无论与ct-DNA结合与否，锰咔咯配合物并未在荧光光谱窗口中观测到明显荧光现象，为了研究锰咔咯配合物与ct-DNA的结合，通过变化加入的咔咯配合物的浓度，进而测得EB-DNA系统的荧光发射光谱。单独的EB是一种弱荧光试剂，但当它与DNA结合后，其发射光谱强度会大大增长。当某些小分子加入EB-DNA系统后，小分子可以取代EB，发光强度减少。EB与Mn(III) 咔咯配合物结合后引起的荧光猝灭示于图4。可以看出，一旦加入Mn(III) 咔咯配合物，发射强度将会减小，这意味着加入Mn(III) 咔咯配合物将会释放EB。
根据经典的Stern-Volmer方程：

式中，I0 和I 分别代表EB-DNA自身荧光强度以及与咔咯结合时的荧光强度，[Q]代表配合物的浓度，以I0 / I对[Q]作图,线性拟合的斜率即为KSV 。由图四可知，MnIIITCPC的KSV为7.22×104 L•mol−1。这一成果与电子滴定谱成果相似，这两类试验都证明MnIIITCPC与DNA以外部结合模式结合。

荧

光

强

度
a.u.

波长/nm

图3. EB与ct-DNA结合的发射光谱(pH＝7.2,5 mmol•L−1 Tris-HCl and 50 mmol•L−1 NaCl缓冲溶液, r＝ [MnIIITCPC]/[DNA],[EB]＝5.0 μmol•L−1, [DNA]＝30 μmol•L−1, λex＝370 nm)箭头表达伴随MnIIITCPC浓度增长荧光强度的变化

图四 I0/I对咔咯浓度作的线性图

圆二色光谱研究 在化合物与DNA结合时，圆二色光谱是一种高效的探究DNA形态变化的措施。ct- DNA一般显示两个峰，由于右旋螺旋性导致在246纳米产生负峰值；由于基堆叠，在272纳米产生正峰值。在DNA与小分子作用时，其圆二色光谱的观测值的变化

一般与DNA构造变化有关：简朴的外部沟结合方式和化合物的静电作用对基堆叠（272nm）和螺旋性（246nm)并没有明显的作用；而内部插入方式会加强两个波段的强度并且稳定ct-DNA右手B的构型。一般说来，还原卟啉与ct-DNA的结合会导致圆二色光谱的减弱，这一特性被用来检查还原卟啉与DNA的结合方式：负ICD带证明是内部插入结合，而正ICD带证明是外部勾结合。而双功能结合模式(又称混合模式)，会产生一种正的ICD峰和一种负的ICD峰。随MnIIITCPC浓度增长，DNA的圆二色光谱成果示于图5。正峰和负峰都证明强度有明显的减弱，并且当MnIIITCPC浓度增长时，最大的峰值出现一种微小的红移。然而，当MnIIITCPC与DNA结合时，无论是正的还是负的ICD带都没有观测到。这些成果强有力的证明了外部结合方式。圆二色光谱同步阐明当ct-DNA与MnIIITCPC结合时，其构造并没有明显变化。

CD/mdeg

波长/nm
图5. ct-DNA(1.5×10−4 mol•L−1)的圆二色光谱(pH＝7.2,5 mmol•L−1 Tris-HCl and 50 mmol•L−1 NaCl缓冲溶液, r＝ [MnIIITCPC]/[DNA]),箭头表达伴随MnIIITCPC浓度增长强度的变化
黏度研究 为了深入阐明ct-DNA与MnIIITCPC的结合方式，同步进行了黏度试验，这是在没有结晶以及NMR数据的状况下，最明确也是最重要的措施来确定DNA的结合方式。一般状况下，当化合物以插入DNA时，DNA相邻碱基对的距离会随之变大，导致DNA双螺旋伸长，使DNA溶液的粘度增大；相反的，当化合物以部分插入模式与DNA 作用时， 也许会使DNA的双螺旋发生扭结,，反而会导致DNA溶液黏度减小；而当小分子化合物以静电、沟面结合等非插入方式与DNA 作用时，DNA溶液的黏度无明显变化。当加入MnIIITCPC后，DNA的黏度并没有明显变化（如图6），这阐明MnIIITCPC与DNA以外部方式结合，这与光谱的结论一致。此外，内消旋—四（4-羧基苯基）卟啉（TCPP）已被报
道与ct-DNA通过外部沟模式结合，其中TCPP内的羧基和DNA碱基对之间氢键起重要作用。结合试验成果以及MnIIITCPC与TCPP构造的相似性，我们推断出MnIIITCPC与ct-DNA
结合方式也是外部沟模型。

图6. ct-DNA溶液与EB溶液（a）和不一样浓度的MnIIITCPC（b）作用的相对粘度(pH＝7.2,5 mmol•L−1 Tris-HCl and 50 mmol•L−1 NaCl缓冲溶液)

pBR322 DNA质粒的氧化断裂 我们都懂得，在过氧化氢存在下，锰的咔咯以及卟啉配合物都能使DNA裂解。本文研究了在不一样氧化剂存在下，例如过氧化氢，叔-BuOOH和KHSO5存在时，锰咔咯配合物的核酸酶活性研究。我们使用琼脂糖凝胶电泳研究pBR322DNA质粒的裂解反应。DNA链的断裂发生在一条链还是两条链上会对应形成圆形（形式II）或者直线（形式III）。这两种形式会慢于完整的超螺旋形式（形式I）迁移，而圆形是迁移最慢的。图7显示了在过氧化氢，叔-BuOOH和KHSO5等氧化剂存在时，加入MnIIITCPC后， pBR322 DNA质粒的氧化断裂。只有氧化剂（泳道2-4）和MnIIITCPC（泳道5）存在并未观测到DNA的裂解，当在DNA和过氧化氢或叔-BuOOH混合液中加入咔咯溶液后，从形式I和形式II可以看出DNA的裂解，同步，叔-BuOOH体现出更好的裂解活性（泳道6-7）。然而，加入KHSO5氧化剂后，并未发现DNA 裂解。

形式I
形式II
图7 加入不一样氧化剂MnⅢTCPC (15μmol•L−1)对pBR322 DNA (0.1 μg) 的裂解成果(pH＝7.2，50 mmol•L−1 Tris-HCl and 18 mmol•L−1 NaCl 缓冲液) .泳道1, DNA 对照;泳道2, DNA＋H2O2 (20 mol•L−1); Lane 3, DNA＋叔-BuOOH (20 mmol•L−1); 泳道 4, DNA ＋ KHSO5 (150μmol•L−1); 泳道 5, DNA＋MnⅢTCPC;泳道 6, DNA＋H2O2 (20mmol•L−1) ＋ MnⅢTCPC; 泳道 7, DNA ＋ 叔-BuOOH (20mmol•L−1) ＋ MnⅢTCPC; 泳道 8, DNA ＋ KHSO5 (150μmol•L−1)＋MnⅢTCPC
图8显示了在过氧化氢存在时，加入不一样浓度MnⅢTCPC后 pBR322 DNA质粒的氧化断裂状况。成果显示伴随MnⅢTCPC浓度增长形式Ⅱ增长（泳道4-8）。当叔BuOOH作氧化剂时也观测到类似成果。有趣的是，在过氧化氢或叔-BuOOH存在时，当MnIIITCPC的浓度到达30微摩尔•L-1时，形式III出现。因此，该羧基锰咔咯在叔-BuOOH或过氧化氢作为氧化剂时可以有效地切割DNA。

形式I
形式Ⅱ
形式Ⅲ

图 8 在H2O2 (20 mmol•L−1)存在下,不一样浓度MnⅢTCPC对 pBR322 DNA (0.1 μg) 的氧化裂解 (pH＝
7.2，50 mmol•L−1 Tris-HCl and 18 mmol•L−1 NaCl 缓冲液). 泳道 1, DNA 对照; 泳道2, DNA＋H2O2; 泳道 3,DNA＋MnⅢTCPC (30 μmol•L−1); 泳道 4, DNA ＋H2O2 ＋MnⅢTCPC (5 μmol•L−1); 泳道 5, DNA＋H2O2＋MnⅢTCPC (15μmol•L−1); 泳道 6, DNA＋H2O2＋MnⅢTCPC (30 μmol•L−1);泳道 7, DNA ＋H2O2 ＋MnⅢTCPC (45 μmol•L−1); 泳道 8,DNA＋H2O2＋MnⅢTCPC (60 μmol•L−1).

为了估计观测到的线性化与否表达非随机线性的过程，我们对双链裂解进行了记录学计算。我们根据Poisson分布公式计算在反应切段线性DNA和质粒后单链断裂(n1)和双链断裂(n2)的平均个数。根据FreiMnlder-Trumbo关系，通过随机断裂过程得到1个线型DNA至少需要120个超螺旋DNA，n1/ n2越小表达配合物使DNA发生双链断裂的活性越高。MnⅢTCPC的n1/ n2值在10-16之间变化（表S1），阐明是一种非随机断裂过程。由于MnIIITCPC的羧基与DNA的碱基对之间的氢键作用，在发生一次断裂后配合物分子仍然停留在断裂位置的附近，并催化下一次裂解反应的进行。在这种状况下，MnIIITCPC的活化起了重要作用。
为了探究裂解机制，我们使用更多的添加剂深入试验。加入DMSO（二甲亚砜）、叔丁醇、羟基自由基（•OH）对DNA裂解影响很小。 NaN3和L—组氨酸会限制DNA裂解，单态氧(1O2)的作用也可以忽视不计。这些成果有力地表明该DNA裂解机制与任何羟基自由基或单线态氧无关。

形式I
形式Ⅱ

图 9 在H2O2 (20 mmol•L−1)存在下,MnⅢTCPC(15μmol•L−1)对 pBR322 DNA (0.1 μg) 的氧化裂解 (pH＝
7.2,50 mmol•L−1 Tris-HCl and 18 mmol•L−1 NaCl 缓冲液).泳道 1, DNA 对照;泳道2, DNA＋H2O2; 泳道 3, DNA＋MnIIITCPC; 泳道 4, DNA＋H2O2＋MnIIITCPC ; 泳道 5, DNA＋H2O2＋MnIIITCPC＋DMSO (500 μmol•L−1); 泳道6, DNA＋H2O2＋MnⅢTCPC＋叔-BuOH (500 μmol•L−1); 泳道 7, DNA＋H2O2＋MnⅢTCPC＋NaN3 (50 mmol•L−1); 泳道 8, DNA＋H2O2＋MnⅢTCPC＋L—组氨酸 (50 mmol•L−1)
在叔-BuOOH存在时，MnIIITCPC对pBR322 DNA裂解会观测到由绿变红的明显地颜色变化。为了研究DNA裂解反应的中间体，在叔-BuOOH存在时，记录了MnIIITCPC的吸取光谱的变化。在MnIIITCPC溶液加入叔-BuOOH前后可以发既有一明显变化（图10）叔-BuOOH存在下的MnIIITCPC紫外可见光谱与（氧代）锰（Ⅴ）咔咯相似，这意味着（氧代）锰（Ⅴ）咔咯也许为中间体。然而，过氧化氢存在与否并未发现类似的颜色变化（当该溶液褪色至近无色仅可以发现轻微的红色），当在MnIIITCPC溶液中加入过氧化氢后，吸取强度才变小。两个氧化剂之间的差异也许重要是两方面的原因：第一，它们产生（氧）锰咔咯的能力不一样；另一方面，过氧化氢可与（氧代）锰（Ⅴ）以更快的速度反应，这也表明该反应需要迅速消耗（氧代）锰（Ⅴ）咔咯。由MnIIITCPC引起的DNA裂解反应在过氧化氢存在下效率较低也许是由于过氧化氢与DNA竞争相似的中间体（例如（氧代）锰（Ⅴ））引起的。总之，由MnIIITCPC引起的DNA氧化裂解反应重要波及（氧代）-Mn中间体的形成，其构造类似于锰卟啉。

吸

收

率

波长/nm
图10 不一样步间下,叔-BuOOH(20 mmol•L−1)存在下,MnIIITCPC (4.0 × 10−5mol•L−1) 的吸取光谱 (pH＝7.2,50 mmol•L−1 Tris-HCl and 18 mmol•L−1 NaCl 缓冲液) 箭头表达伴随时间变化的吸取率
结论
总之，我们合成并表征了一种新的水溶性锰（III）的羧基咔咯化合物（MnIIITCPC）。这种化合物通过外部沟模式与ct- DNA互相作用，并在叔-BuOOH或过氧化氢存在下，可以有效地催化pBR322DNA的质粒氧化裂解，且前一种前氧化剂具有更好的效率。当KHSO 5作氧化剂时，并未观测到核酸酶活性。克制测试表明，羟基自由基或单线态氧在DNA氧化
裂解试验中并不是活性物质。在叔-BuOOH存在下，紫外—可见光谱表明形成了（氧代）锰咔咯，因此MnIIITCPC也许导致DNA断裂。水溶性MnIIITCPC展示了与DNA结合和断裂的良好的活性，它在核酸化学中代表了一类新的人造限制性内切酶。

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