1、单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,菌种保藏,要求各保藏管理中心所保藏菌种，必须含有该菌种详细历史及相关试验资料。并对其所负责保藏菌种均应采取妥善、可靠方法保藏，,防止菌种污染或死亡,。,中国微生物菌种保藏管理条例,1986年,微生物菌种保藏专家讲座,第1页,微生物,个体微小,，,代谢活跃,，,生长繁殖快,，假如保留不妥轻易发生,变异,，或被其它微生物,污染,，甚至造成细胞,死亡。,所以，在保藏过程中，必须使微生物代谢处于最不活跃或相对静止状态，才能在一定时间内使其不发生变异而又保持生活能力。,微生物菌种保藏专家讲座,第2页,微生物菌种保藏
2、基本原理,在挑选优良纯培养物并使其处于休眠状态基础上，人为地创造一个有利于休眠环境，使其长久保留后仍能保持菌种原有优良特征。,微生物菌种保藏专家讲座,第3页,微生物菌种保藏,基本办法,传代培养保藏法,液体石蜡覆盖保藏,载体保藏法,真空,干燥,低温,寄主保藏法,冷冻保藏法,冷冻,干燥,保藏,法,微生物菌种保藏专家讲座,第4页,1,传代培养保藏法,又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于46冰箱内保留。,2,液体石蜡覆盖保藏法,是传代培养变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌液体石蜡，首先可预防因培养基水分蒸发而引发菌种死亡，另
3、首先可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。,微生物菌种保藏专家讲座,第5页,3,载体保藏法,是将微生物吸附在适当载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥保藏法，比如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。,4,寄主保藏法,用于当前尚不能在人工培养基上生长微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于普通微生物传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其它方法如液氮保藏法,微生物菌种保藏专家讲座,第6页,5,冷冻保藏法,可分低温冰箱（-20-30，-50-80）、干冰酒精快速冻结（约-70）和液氮（-196）等保藏法。,6,冷冻干燥保藏法,先使微生物在极低温度（
4、70左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。,微生物菌种保藏专家讲座,第7页,有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以预防因冷冻或水分不停升华对细胞损害。保护性溶质可经过氢和离子键对水和细胞所产生亲和力来稳定细胞成份构型。,保护剂,有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。,微生物菌种保藏专家讲座,第8页,滤纸保藏法,微生物菌种保藏专家讲座,第9页,方法步骤,1）将滤纸剪成0512cm小条，装入068cm安瓿管中，每管12张，塞以棉塞，（105kg/cm2），1213灭菌30分钟。,2）将需要保留菌种，在适宜斜面培养基上培养，使充
5、分生长。,3）取灭菌脱脂牛乳12ml滴加在灭菌培养皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。,4）用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。,微生物菌种保藏专家讲座,第10页,5）将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂干燥器中，用真空泵抽气至干。,6）将棉花塞入管内，用火焰熔封，保留于低温下。,7）需要使用菌种，复活培养时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热部位，使玻璃破裂，再用镊子敲掉口端玻璃，待安瓿管开启后，取出滤纸，放入液体培养基内，置温箱中培养。,微生物菌种保藏专家讲座,第11页,优缺点,细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前二者可保藏2年左右，有些丝状真菌甚至可保藏1417年之久。此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。,微生物菌种保藏专家讲座,第12页,Thank you！,微生物菌种保藏专家讲座,第13页,
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