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五味子多糖的研究概况分析
【摘要】　目的综述五味子多糖的药理研究、分级方法、检测方法等方面研究。方法通过　数据库检索相关 文献 ，选择部分高质量的研究论文进行概括、整理、　。结果与结论五味子多糖药理作用涉及消化系统、心血管系统、中枢神经系统、生殖系统以及抗氧化，抗衰老等方面；五味子分级是研究分离具有高药效的多糖成分，其方法为不同条件下的沉淀分级法；五味子多糖提取检测研究有热水浸提法-苯酚-硫酸法测定方法、正交设计法—红外光谱法检测方法等；但目前的研究还不够完善，在提取检测方法方面有待进一步研究和。
　　【关键词】　中药；五味子；多糖
　　五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz)Ball.的干燥成熟果实，是着名的滋补性中药，始载于《神农本草经》，列为上品，具有益气强阴 、养五脏、明目壮筋骨等多种功效［1］。用于 治疗 久嗽虚喘，梦遗滑精，遗尿尿频，久泻不止，自汗盗汗，津伤口渴，短气脉虚，内热消渴，心悸失眠等症。目前我国学者在五味子疗效、有效成分提取鉴定、药理作用及植物资源等方面作了大量的研究而且比较深入。在活性成分研究方面，主要的研究重点在五味子的脂溶性成分方面。从五味子中分离得到的木脂素类单体化合物有近40种，其药理作用研究涉及消化系统，心血管系统，中枢神经系统，生殖系统以及抗氧化，抗衰老等各个方面。然而中药传统用药习惯以及许多五味子水提液的显着药理活性提示我们“五味子水溶性有效成分的研究不可忽视”，于是研究者开始从对五味子中木脂素类化合物的研究转向对多糖的研究和探讨。
　　1 概述
　　多糖的概念
　　多糖又称聚糖，可以分为两类。只含有一种单糖单位的多糖，如淀粉叫作同多糖；含有两种或更多种单糖单位的多糖叫作杂多糖，如透明质酸。多糖一般没有精确的分子量，其中的单糖单位可因细胞的代谢需要增加或减少。多糖没有还原性，无甜味，大多不溶于水，有的与水形成胶体溶液，多糖在 自然 界分布很广，其功能是多种多样的，有些多糖是单糖的贮存形式；许多多糖是单细胞微生物、高等植物细胞壁和动物细胞外部表面的结构单元；另一些多糖是脊椎动物结缔和节肢动物外骨骼的组分。结构多糖有保护、支撑的作用。最重要的贮存多糖是淀粉和糖原。
　　中药多糖
　　20世纪80年代以来， 科学 家们对植物多糖，特别是对中药中的多糖研究产生了浓厚的兴趣。研究人员从各种中药中提取、分离得到了大量多糖和糖类物质，如植物类药材：人参、枸杞子、当归、黄芪、五味子等；菌藻类药材：茯苓、猪苓、冬虫夏草、灵芝等；动物类药材：刺参、鹿茸等都含有多糖。在生命科学研究领域里，糖生物学一直处于的该领域的研究前沿和，由于　、细胞生物学及分子生物学的　，使人们认识到免疫系统的紊乱不仅会产生多种疾病，而且与人体衰老及老年人的多发病如肿瘤、高血压病、糖尿病甚至精神病的发生均有密切关系 研究结果得出这些中药多属于扶正固本等补益类中药，所以这类药物不但能促进机体的免疫功能，而且证实了有些多糖确具有抗老延寿、抗肿瘤、降血脂等作用。
　　2 五味子多糖的研究进展
　　20世纪90年代以来，许多学者从五味子水提液中分离得到了五味子多糖(the coarse polysaccharide from Schisandra chinensis，CPSC)，并对其药理活性进行了研究，研究表明五味子多糖具有多种药理作用和功效。
　　药理作用
　　保肝作用金顺姬［2］
　　在研究中发现，五味子对四氯化碳等引起的动物血清谷丙转氨酶(GPI)升高有抑制作用。王艳杰等［3］进一步的研究表明五味子粗多糖对H22，SI80荷瘤小鼠具有抑瘤作用，其不同给药途径均具有抑瘤作用，且彼此之间抑瘤作用无明显差异，提示五味子多糖的药用途径是多方面的；五味子粗多糖的不同剂量表明五味子粗多糖高、中剂量组能够延长H22，S180荷瘤小鼠的生存时间；能抑制S180荷瘤小鼠的增长，其高剂量组抑瘤率达到45．4％,并证实了五味子粗多糖的抗肿瘤作用与剂量有一定的相关性，剂量过低，五味子粗多糖不能很好地发挥抗肿瘤作用。
　　陈文静等［4］通过研究五味子多糖的抗突变作用，进一步探讨其抗肿瘤作用机制。五味子多糖各剂量组对环磷酰胺诱导的小鼠骨髓微核率有抑制作用。与环磷酰胺对照组比较，高、中、低剂量组都有非常显着性差异()。
　　提高免疫力苗明三等［5］
　　研究表明五味子多糖可提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，促进溶血素、溶血空斑形成，促进淋巴细胞转化，且多糖类成分含量较高可达3%以上，可以认为五味子多糖是其兴奋免疫的主要活性成分。
　　抗衰老苗明三等［6］
　　研究表明五味子多糖具有较好的抗衰老作用，可拮抗因衰老所致小鼠胸腺和脾脏的萎缩,使衰老小鼠已萎缩的胸腺及脾脏明显增大变厚，胸腺皮质细胞数及脾淋巴细胞数明显增加，脾小结增大，使衰老小鼠已退行性变的神经细胞恢复正常，且可使神经细胞胞体增大。黄玲等［7］从其对氧自由基的消除及抗脂质过氧化作用方面探讨了五味子多糖的功效。揭示了五味子多糖灌喂的荷瘤小鼠机体抗氧化作用增强，说明五味子多糖能提高荷瘤小鼠SOD 的活力，抑制自由基的产生，具有一定的抗脂质过氧化作用。谢大泽等［8］采用黄嘌呤-Luminol(XL)和邻苯三酚- Luminol (PL)两个化学发光系统的研究结果表明,五味子粗多糖具有较强的清除氧自由基的能力。
　　抗肿瘤黄玲等［9］
　　研究采用肿瘤移植的动物模型,研究五味子多糖的抑瘤率以及对免疫器官(脾脏、胸腺)的影响,结果表明五味子多糖能抑制S180荷瘤的增长,且浓五味子多糖有较显着的抑瘤作用,浓五味子多糖合并环磷酰胺抑瘤率达%,比单纯用环磷酰胺抑瘤率%有所提高。
　　从病理切片角度观察五味子多糖对瘤体的影响。表明400mg/kg五味子多糖具有轻度抑瘤形态学表现,能促进细胞凋亡,瘤内及瘤周炎症反应明显,而瘤细胞坏死则与对照组相当,推测五味子多糖的抑瘤作用可能不是直接杀死瘤细胞,而与细胞凋亡及活化免疫细胞有关。400 mg/kg五味子多糖具有一定的抑瘤作用，且对肿瘤化疗可能有增效作用。对其进行深入研究有助于癌症的预防和治疗［10］。
　　进一步研究结果表明，经过五味子多糖喂养的荷瘤小鼠比肿瘤对照组小鼠血浆SOD水平明显升高,即能调动或激活机体内源性抗氧化体系,SOD可清除自由基,降低脂质过氧化反应。经过五味子多糖喂养的荷瘤小鼠血浆MDA水平明显降低,揭示五味子多糖能提高荷瘤小鼠SOD的活力,抑制自由基的产生,具有一定的抗脂质过氧化作用,这是五味子多糖抑制S180荷瘤小鼠瘤体生长的原因之一［11］。
　　王艳杰等［12］采用评价细胞遗传学损伤的标准试验，小鼠骨髓PCE微核试验检测了五味子多糖的抗突变作用。同时，做了荷瘤小鼠的生命延长率实验，表明五味子多糖还具有抑制肿瘤细胞生长的作用。
　　五味子多糖的分级
　　近些年来，研究发现多糖具有较高的药用价值。突出表现在增加人体的免疫能力，抗肿瘤、降血脂等方面，这些突出的药理作用已引起医药界高度重视。然而应该指出并不是所有的多糖都具有药用价值，真正具有药用价值的多糖仅是其中的极小一部分。如何将这一小部分分离出来进行研究，以从众多的多糖中提取具有高药效的多糖成分，为提高药物的有效浓度和剂型的改革提供药源，这是化学者的一个重要课题。许多学者已做过相关研究。
　　安秀吉等［13］用乙醇作沉淀剂，根据实际采用沉淀分级法，浓度为1%时多糖可分为4～7级。即在恒温的多糖溶液中缓慢地滴加乙醇， 当出现沉淀时进行离心，其沉淀物为第一个级分，在上层清液中继续加入乙醇可得到第二级分， 这样下去得到了多糖的各个级分。将各级分多糖干燥除醇溶解后定容，用葡萄糖为标准品， 采用酚-硫酸法确定各级分的含量， 同时对各级分的数均分子、 持性黏度、折光率等进行了测定。在对各种性质进行比较后发现，除颜色随分子量降低而变浅外，沉淀形状、特性粘度等没有变化 规律 ，并且差别很大。
　　谭晓虹等［14］在研究中加入乙醇使乙醇含量为80％放置12 h，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮反复洗涤，得到棕色粗多糖。将粗多糖溶于水，用seveg法除去蛋白，加入1％活性碳脱色，抽滤，滤液加入乙醇，使溶液含醇达80％ ，静置过夜，抽滤，残渣用无水乙醇、丙酮反复洗涤，真空干燥，即得精制北五味子多糖。并在实验结果中表明，北五味子多糖提取两次即可，平均含量为％。
　　韩学忠［15］采用恒温沉淀法对五味子多糖进行分级，得到5个级分。按照硫酸-酚法测定各级组分含量，并对各级组分多糖的实际含量进行矫正。结果表明，第1级分和第4级分占据了多糖的近90%，五味子多糖主要集中在这两部分；五味子多糖水溶液可直接用40%的乙醇溶液分成两部分,且有药效作用的多糖都集中在乙醇40%(V/V)没有沉定下来的多糖。40%乙醇浓度下多糖，水溶性较强,在水中稳定,选择此种多糖做注射剂原料不仅能保证应有的疗效,而且还能使稳定性得到保证；低浓度乙醇沉淀出的多糖是絮状,有一定的粘性,没有最大药用价值。而且它的存在还会造成多糖注射剂的浓度降低90%,稳定性也较差。五味子多糖注射剂采取分级的方法制取,不仅提高了其稳定性和质量,同时在提高其疗效的情况下,具备 工业 化生产的条件,具有广泛的应用前景。
　　制备方法及结果分析
　　近年来对五味子多糖提取工艺的研究方法很多。谭晓虹等［14］采用热水浸提法，用苯酚-硫酸法测定北五味子多糖的含量，结果测得北五味子中多糖含量为%，平均回收率为%。并且得出该苯酚-硫酸法测定北五味子多糖的含量时，以40℃恒温，30 min较好。加入苯酚量 ml以上时,反应能完成。对于硫酸的用量,经实验对比认为硫酸占总体积%以上时,在重复性、稳定性及回收率方面都有明显的优越性。
　　范荣军等［16］采用正交实验设计对蒸馏水、碱水、醇碱3种提取溶剂、提取时间、提取溶剂体积及五味子多糖的脱色工艺进行优选，并采用红外光谱法对所得多糖进行检测，同时应用光学显微镜对不同提取方法的残渣的细胞形态进行观察。结果确定五味子多糖的最佳提取工艺为加入30倍量的醇碱溶液煮沸提取3h。活性炭脱色最佳工艺为在40℃下、加入1%活性炭、搅拌40 min。张兰杰等［17］在恒温 70℃下将北五味子水提取3次(稀NaOH溶液调 pH=8)；滤液浓缩、醇析、Savage法脱蛋白、脱脂 、脱色 、DATE纤维素柱洗脱等步骤 ，分离出两种多糖组分,含量分别为 %和%。
　　采用不同提取工艺，对粗多糖的提取效果会产生影响。同时，多糖在提取纯化过程中的损失以及产地，季节差异也会使测得的含量有所差别。
　　3 五味子多糖研究的　趋势
　　综上所述，五味子多糖药理活性强，在保肝、提高免疫、抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤等方面具有广泛的应用前景。但目前的研究还存在很多不足，亟待提高，突出表现为：所制得的多糖多为粗品，含较多杂质，仍需进一步纯化；含量测定方法大多为测定总糖的比色法，不能如实地反映多糖含量，需要进一步矫正；结构的精密的鉴定分析严重不足；药理实验主要停留在行为学，器官和水平, 活性机理不清等等。我国是五味子资源大国，应用 历史 悠久，市场前景广泛。如果我们能进一步优化五味子多糖提纯工艺，深入到分子水平充分研究其各级结构、数量分布、及药理构效机制，开发出一批具有自主知识产权的创新药物、中药、非专利重点品种和药物新制剂，相信在提升五味子这一我国传统中药的品牌竞争力和国际市场份额以及加大该资源可持续综合开发利用方面将大有作为。
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