临床微生物的鉴定与药敏.pptx

微生物检验的意义与流程微生物检验的意义与流程标本采集标本采集标本采集标本采集应选择在应用抗菌应选择在应用抗菌药物之前采集标本药物之前采集标本革兰氏染色革兰氏染色 抗酸染色抗酸染色墨汁染色墨汁染色细菌与真菌培养细菌与真菌培养生化鉴定生化鉴定仪器自动鉴定仪器自动鉴定纸片法纸片法MIC法法临床细菌工作者需要从各种标本中分离识别细菌是属临床细菌工作者需要从各种标本中分离识别细菌是属于病原菌、条件致病菌或正常菌群，要正确鉴定分离于病原菌、条件致病菌或正常菌群，要正确鉴定分离出的微生物的归属或种。因为只有明确归属的细菌，出的微生物的归属或种。因为只有明确归属的细菌，才有可能根据特定的形态、培养和生化特征，确立未才有可能根据特定的形态、培养和生化特征，确立未知细菌的分类属相，药敏实验的判断规则，并作为感知细菌的分类属相，药敏实验的判断规则，并作为感染疾病治疗的依据。染疾病治疗的依据。镜检接种镜检接种镜检接种镜检接种培养鉴定培养鉴定培养鉴定培养鉴定药敏实验药敏实验药敏实验药敏实验 血液及骨髓标本血液及骨髓标本 尿液标本尿液标本穿刺液标本穿刺液标本导管导管临床标本主要包括：无菌体液，有不引起疾病的正常菌群寄居临床标本主要包括：无菌体液，有不引起疾病的正常菌群寄居粪便标本粪便标本痰及上呼吸道标本痰及上呼吸道标本 烧伤标本烧伤标本生殖道标本生殖道标本 组织标本组织标本无菌体液无菌体液正常菌群寄居正常菌群寄居临床标本的分类临床标本的分类细菌分类的依据和方法细菌分类的依据和方法 细菌的着色性，形细菌的着色性，形细菌的着色性，形细菌的着色性，形态，芽孢、鞭毛和荚态，芽孢、鞭毛和荚态，芽孢、鞭毛和荚态，芽孢、鞭毛和荚膜结构等膜结构等膜结构等膜结构等 细菌的生物化学特细菌的生物化学特细菌的生物化学特细菌的生物化学特征征征征 如：营养方式、代如：营养方式、代如：营养方式、代如：营养方式、代谢产物特点和对氧分谢产物特点和对氧分谢产物特点和对氧分谢产物特点和对氧分子的需求等子的需求等子的需求等子的需求等细菌的生理、细菌的生理、细菌的生理、细菌的生理、生化表型是由生化表型是由生化表型是由生化表型是由其所含的遗传其所含的遗传其所含的遗传其所含的遗传基因所决定基因所决定基因所决定基因所决定若对细菌作分若对细菌作分若对细菌作分若对细菌作分型，常采用的型，常采用的型，常采用的型，常采用的抗原结构、噬抗原结构、噬抗原结构、噬抗原结构、噬菌体和细菌素菌体和细菌素菌体和细菌素菌体和细菌素敏感性敏感性敏感性敏感性细菌分类要综合其细胞学、生理学、细菌分类要综合其细胞学、生理学、生物化学、免疫学等特征。同时以抗生物化学、免疫学等特征。同时以抗原结构特点，遗传物质原结构特点，遗传物质DNA分子的结分子的结构来阐明各种细菌间的亲缘关系。构来阐明各种细菌间的亲缘关系。临床细菌的主要分类临床细菌的主要分类革兰氏阳性杆菌革兰氏阳性杆菌革兰氏阳性球菌革兰氏阳性球菌 触酶试验革兰氏阴性球菌革兰氏阴性球菌革兰氏阴性杆菌革兰氏阴性杆菌 氧化酶实验病原菌病原菌ADBC革兰氏阳性球菌革兰氏阳性球菌葡萄球菌葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌肠球菌肠球菌链球菌链球菌 A群链球菌 B群链球菌 C群链球菌 草绿色链球菌 肺炎链球菌 金黄色为葡萄球菌金黄色为葡萄球菌涂片：革兰阳性球涂片：革兰阳性球菌，葡萄状排列菌，葡萄状排列触酶试验阳性触酶试验阳性血浆凝固酶阳性血浆凝固酶阳性接种于血平皿接种于血平皿有金黄色素有金黄色素 透透明溶血环明溶血环发酵甘露醇发酵甘露醇MRSA肺炎、伪膜性肠炎、肺炎、伪膜性肠炎、肾盂肾炎、心包炎、肾盂肾炎、心包炎、化脓性感染、败血化脓性感染、败血症、脓毒血症症、脓毒血症M1M1M2M2M4M4M3M3凝固酶阴性葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌广泛存在于皮肤表面、口腔及肠道中广泛存在于皮肤表面、口腔及肠道中菌血症患者占菌血症患者占10%心内膜炎的主要致病菌心内膜炎的主要致病菌重要的院内感染菌重要的院内感染菌耐药性高于凝固酶阳性的葡萄球菌耐药性高于凝固酶阳性的葡萄球菌 肠球菌肠球菌涂片：革兰阳性球涂片：革兰阳性球菌，呈短链排列菌，呈短链排列触酶试验阴性触酶试验阴性胆汁七叶苷阳性胆汁七叶苷阳性接种于血平皿接种于血平皿5%羊羊血平皿生长好血平皿生长好灰白色、湿润、光灰白色、湿润、光滑中等大小滑中等大小有有 溶血或溶血或-溶血溶血 尿路感染：尿路感染：尿道炎、膀胱炎、尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎肾盂肾炎糖尿病、恶性肿瘤糖尿病、恶性肿瘤并发并发M1M1M2M2M4M4M3M3感染主要为粪感染主要为粪肠球菌，其次肠球菌，其次为屎肠球菌和为屎肠球菌和鸟肠球菌鸟肠球菌链球菌链球菌A群链球菌群链球菌 又称化脓性链球菌，广泛存在于自然界，正常人的鼻咽部和皮肤。又称化脓性链球菌，广泛存在于自然界，正常人的鼻咽部和皮肤。能产生多种毒素及毒性物质，侵袭力强。其能产生多种毒素及毒性物质，侵袭力强。其M蛋白抗原，具有蛋白抗原，具有吞噬作用，与毒力有关。吞噬作用，与毒力有关。B群链球菌群链球菌 又称无乳链球菌，易引起新生儿的败血症又称无乳链球菌，易引起新生儿的败血症草绿色群链球菌草绿色群链球菌 是亚急性心内膜炎的主要病原菌，常定居在扁桃体、鼻咽部或是亚急性心内膜炎的主要病原菌，常定居在扁桃体、鼻咽部或牙龈肿，可发生局部病灶性感染。牙龈肿，可发生局部病灶性感染。肺炎链球菌肺炎链球菌 人体口腔、鼻咽部的正常菌群，并不会引起疾病。当机体抵抗人体口腔、鼻咽部的正常菌群，并不会引起疾病。当机体抵抗力下降时，可引起大叶性肺炎、支气管肺炎，如处理不当可导力下降时，可引起大叶性肺炎、支气管肺炎，如处理不当可导致血流播散，导致败血症。致血流播散，导致败血症。肺炎链球菌肺炎链球菌涂片：革兰阳涂片：革兰阳性球菌，矛头性球菌，矛头状尖端相背或状尖端相背或短链排列，有短链排列，有荚膜荚膜血平板上为灰白血平板上为灰白色、扁平光滑、色、扁平光滑、湿润半透明、草湿润半透明、草绿色溶血环。培绿色溶血环。培养久后，菌落中养久后，菌落中央凹陷脐窝状央凹陷脐窝状菊糖发酵试验菊糖发酵试验阳性、阳性、胆汁溶胆汁溶菌试验阳性菌试验阳性引起肺炎链球引起肺炎链球菌脑膜炎，支菌脑膜炎，支气管肺炎、心气管肺炎、心内膜炎、胸膜内膜炎、胸膜炎、中耳炎和炎、中耳炎和关节炎关节炎M1M1M2M2M4M4M3M3奈瑟菌属奈瑟菌属 奈瑟菌属属于奈瑟菌科，除奈瑟菌属外，还包括奈瑟菌属属于奈瑟菌科，除奈瑟菌属外，还包括莫拉菌属、不动杆菌属、金氏菌属。奈瑟菌属共莫拉菌属、不动杆菌属、金氏菌属。奈瑟菌属共含含10个种。个种。淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌 脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌 嗜乳糖奈瑟菌嗜乳糖奈瑟菌 干燥奈瑟菌干燥奈瑟菌 浅黄奈瑟菌浅黄奈瑟菌 金黄奈瑟菌金黄奈瑟菌 粘膜奈瑟菌粘膜奈瑟菌 灰色奈瑟菌灰色奈瑟菌 细长奈瑟菌细长奈瑟菌 多糖奈瑟菌多糖奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌奈瑟菌属奈瑟菌属脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌 前列腺炎、睾丸炎、前列腺炎、睾丸炎、尿道周围脓肿、附件炎、尿道周围脓肿、附件炎、盆腔炎和关节炎盆腔炎和关节炎革兰阴性双球菌，呈卵圆形或革兰阴性双球菌，呈卵圆形或肾形。肾形。只发酵葡萄糖。只发酵葡萄糖。氧化酶、触酶阳性氧化酶、触酶阳性 流行性脑脊髓膜炎流行性脑脊髓膜炎 脑膜炎球菌菌血症脑膜炎球菌菌血症革兰阴性球菌，成双排列，菌体呈革兰阴性球菌，成双排列，菌体呈肾形或豆形肾形或豆形只分解葡萄糖、麦芽糖，产少量酸。只分解葡萄糖、麦芽糖，产少量酸。氧化酶阴性氧化酶阴性在巧克力平皿上培养在巧克力平皿上培养2448小时或小时或72小时生长较好。菌小时生长较好。菌落隆起、光滑、湿润、边缘整齐。易乳化、无色素、生落隆起、光滑、湿润、边缘整齐。易乳化、无色素、生理盐水不自凝。理盐水不自凝。在在在在在在5%CO25%CO25%CO2条件下生长良好条件下生长良好条件下生长良好条件下生长良好条件下生长良好条件下生长良好.革兰氏阴性杆菌革兰氏阴性杆菌肠杆菌肠杆菌 伤寒沙门菌、副伤寒沙门菌、大肠埃希菌、气单胞菌、肺炎克雷伯、变形杆菌、布鲁菌和沙雷菌等。在血平皿、中国蓝培养基上都能生长。非发酵革兰阴性杆菌非发酵革兰阴性杆菌 是指一群不能利用葡萄糖或仅能以氧化形式利用葡萄糖的革兰阴性杆菌。包括：铜绿假单胞菌、不动杆菌属、沙麦芽窄食单胞菌、洋葱克雷伯菌大肠埃希菌大肠埃希菌 引起肠道感染的大肠埃希菌引起肠道感染的大肠埃希菌引起肠道感染的大肠埃希菌引起肠道感染的大肠埃希菌肠致病性大肠埃希菌肠致病性大肠埃希菌肠致病性大肠埃希菌肠致病性大肠埃希菌肠道聚集肠道聚集肠道聚集肠道聚集-粘附性大肠埃希菌粘附性大肠埃希菌粘附性大肠埃希菌粘附性大肠埃希菌产肠毒素性大肠埃希菌产肠毒素性大肠埃希菌产肠毒素性大肠埃希菌产肠毒素性大肠埃希菌肠侵袭性大肠埃希菌肠侵袭性大肠埃希菌肠侵袭性大肠埃希菌肠侵袭性大肠埃希菌肠出血性大肠埃希菌肠出血性大肠埃希菌肠出血性大肠埃希菌肠出血性大肠埃希菌发热，呕吐，腹泻，便中多粘液无血痉挛性腹痛等发热，呕吐，腹泻，便中多粘液无血痉挛性腹痛等革兰氏阴性杆菌，氧化酶试验阴性革兰氏阴性杆菌，氧化酶试验阴性 API，compact进一步鉴定，血清进一步鉴定，血清O1，O139临床表现临床表现镜检与趋向性试验镜检与趋向性试验鉴定鉴定可见中等大小、圆形、凸起的灰白色菌落少数呈可见中等大小、圆形、凸起的灰白色菌落少数呈-溶血溶血，发酵乳糖，硝酸盐还原试验阳性，发酵乳糖，硝酸盐还原试验阳性接种及生化接种及生化铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 术后伤口感染、褥疮、脓肿、烧伤后感染、化脓性术后伤口感染、褥疮、脓肿、烧伤后感染、化脓性中耳炎，菌血症和院感的主要致病菌中耳炎，菌血症和院感的主要致病菌革兰阴性杆菌，菌体呈多形体，球杆状革兰阴性杆菌，菌体呈多形体，球杆状和长丝状，成对或成链排列，有鞭毛和长丝状，成对或成链排列，有鞭毛 氧化酶、触酶试验阳性，有动力精氨酸水氧化酶、触酶试验阳性，有动力精氨酸水解酶阳性，氧化分解葡萄糖，但不发酵解酶阳性，氧化分解葡萄糖，但不发酵临床临床镜检染色镜检染色鉴定鉴定菌落周围有透明溶血环，金属光泽。菌落周围有透明溶血环，金属光泽。特殊生姜气味特殊生姜气味的灰绿色或蓝绿色菌落。多数产生绿脓素或荧光素的灰绿色或蓝绿色菌落。多数产生绿脓素或荧光素接种血平皿接种血平皿嗜血杆菌属嗜血杆菌属隶属于巴斯德菌科隶属于巴斯德菌科流感嗜血杆菌副流杆嗜血杆菌溶血嗜血杆菌副嗜沫嗜血杆菌杜克雷嗜血杆菌埃及嗜血杆菌副溶血嗜血杆菌嗜沫嗜血杆菌迟缓嗜血杆菌流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌临床临床致病物质主要为内毒素和荚致病物质主要为内毒素和荚膜的抗吞噬作用膜的抗吞噬作用主要引起呼吸道感染，脑膜主要引起呼吸道感染，脑膜炎，关节脓肿和其他化脓感炎，关节脓肿和其他化脓感染染接种与镜检接种与镜检接种于巧克力平皿上接种于巧克力平皿上5%CO2,35培养培养 菌菌落为细小，灰白，光滑，湿落为细小，灰白，光滑，湿润，半透明菌落润，半透明菌落，革兰阴性小杆菌，呈多形性革兰阴性小杆菌，呈多形性生长因子生长因子把可疑菌密涂于脑心浸液琼脂平把可疑菌密涂于脑心浸液琼脂平皿上，把皿上，把X、V和和X+V因子纸片贴因子纸片贴在平皿上，细菌只在在平皿上，细菌只在X+V因子周因子周围生长，不在围生长，不在X因子或因子或V因子周围因子周围生长生长卫星现象卫星现象把可疑菌株涂在平皿上，将把可疑菌株涂在平皿上，将金黄色葡萄球菌点种于培养金黄色葡萄球菌点种于培养基划线区，在葡萄球菌落周基划线区，在葡萄球菌落周围的菌落大，远离金葡菌的围的菌落大，远离金葡菌的菌落小菌落小真菌检验真菌检验目前自然界已发现超过目前自然界已发现超过10万种真菌，广泛分布于土壤、水和空气中，也可万种真菌，广泛分布于土壤、水和空气中，也可见于正常人的皮肤及与外界相通的腔道中见于正常人的皮肤及与外界相通的腔道中真菌的分类真菌的分类 一一.按真菌菌落形态分类按真菌菌落形态分类 -霉菌霉菌 多细胞，产生菌丝和孢子，一般为毛样菌落多细胞，产生菌丝和孢子，一般为毛样菌落 -酵母酵母 单细胞，菌落为乳酪样单细胞，菌落为乳酪样 -双相真菌双相真菌 受环境因素改变的影响，形态由霉菌型变为酵母型受环境因素改变的影响，形态由霉菌型变为酵母型二二.按感染部位分类按感染部位分类 -浅部真菌感染浅部真菌感染 指侵犯皮肤、指甲、毛发指侵犯皮肤、指甲、毛发 -深部真菌感染深部真菌感染 指侵犯皮下组织、内脏及全身的感染指侵犯皮下组织、内脏及全身的感染三三.按真菌致病性分类按真菌致病性分类 -致病性真菌致病性真菌 -条件致病性真菌条件致病性真菌 指在机体免疫力低下时才致病的真菌，通常指在机体免疫力低下时才致病的真菌，通常 与人处于共生状态，为人体正常菌群的一部分与人处于共生状态，为人体正常菌群的一部分真菌检验真菌检验念珠菌属念珠菌属-属酵母样真菌，产生假菌丝，与酵母菌不同属酵母样真菌，产生假菌丝，与酵母菌不同 而称其为类而称其为类酵母菌，也成为假丝酵母菌。常见酵母菌，也成为假丝酵母菌。常见12种。种。隐球菌属隐球菌属-新型隐球菌新型隐球菌-白色隐球菌白色隐球菌-罗伦隐球菌罗伦隐球菌-浅黄隐球菌浅黄隐球菌-地生隐球菌地生隐球菌-指甲隐球菌指甲隐球菌 其他酵母及酵母样真菌其他酵母及酵母样真菌-包括包括9个属，与人类感染有一定关系个属，与人类感染有一定关系厌氧菌厌氧菌难辨梭菌难辨梭菌接种接种 在CCFA平板上呈不透明、淡黄色、边缘不整 齐的粗糙型菌落染色染色 革兰阳性粗大杆菌，卵圆形芽胞位于次极端生化生化 发酵果糖毒素筛查毒素筛查 接种的同时做mini vidas的上机操作 抗生素概念抗生素概念概念概念 抗生素是能抵抗致病微生物的药物，是抗菌消炎药中最大的一类 来源来源 抗生素是由细菌、真菌或其他微生物在生活过程中所产生的物质，具有抑制或杀灭细菌、真菌、螺旋体、支原体、依原体等致病微生物的作用，故能治病。抗生素分类抗生素分类(1)-内酰胺类：内酰胺类：这是品种最多，用得最多、最广的一类，此类包括两部分。青霉素：主要对不产-内酰胺酶的需氧革兰阳性菌、部分苛养菌、需氧革兰阴性杆菌以及部分厌氧菌具有抗菌活性。常用的品种有青霉素钠、青霉素钾、氨苄西林钠、阿莫西林、哌拉西林、青霉素V钾等。头孢菌素：对需氧和厌氧的革兰阳性和阴性菌的抗菌谱不尽相同。常用品种有头孢氨苄、头孢羟氨苄、头孢唑啉钠、头孢拉定、头孢曲松钠等。(2)氨基糖苷类：氨基糖苷类：是结构相关的抗菌药物，可在核糖体水平上抑制细菌蛋白的合成。主要治疗革兰阴性杆菌。常用品种有链霉素、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、小诺米星等。抗生素分类抗生素分类(3)四环素类：四环素类：在在核糖体水平上抑制某些革兰阳性和革兰阴性菌的蛋白的合成。常用四环素、土霉素、多西环素、米诺环素等。(4)大环内酯类：大环内酯类：在核糖体水平上抑制细菌蛋白的合成。常用地红霉素、阿奇霉素、克拉霉素、泰利霉素等。(5)氯霉素类：氯霉素类：常用的品种即氯霉素。(6)林可霉素类：林可霉素类：林可霉素、克林霉素。(7)其他主要抗细菌的抗生素：其他主要抗细菌的抗生素：常用的有去甲万古霉素、磷霉素、卷曲霉素、利福平等。(8)抗真菌抗生素：抗真菌抗生素：常用的品种有两性霉素B、灰黄霉素、制霉菌素、克念菌素等。(9)抗肿瘤抗生素：抗肿瘤抗生素：常用的有丝裂霉素、阿霉素放线菌素D、博莱霉素等。(10)有免疫抑制作用的抗生素：有免疫抑制作用的抗生素：如环孢素。L/O/G/O Thank You!