骨碎补检验方法验证方案.doc

骨碎补检验方法验证方案

TS-56-001

安徽谓博中药股份有限公司

验证立项申请表

立项部门
质量部
申请日期

立项题目
骨碎补检验方法验证方案
要求完成日期

验证原因
确认骨碎补检验方法是否符合本公司产品
类别
前验证
验证要求目的：

确认骨碎补检验方法是否符合本公司产品。确保骨碎补成品质量合格。

立项部门负责人签名

化验室意见

签名 年 月 日
质量部意见

签名 年 月 日
验证管理
部门意见

签名 年 月 日
质量副总经理
意见

签名 年 月 日
指定编制验证方案部门及人员
部门：质量部化验室
人员：化验员、化验室主任
编制验证方案要求及完成日期
按照公司验证管理文件的规定编制出该验证项目的验证对象、验证的目标和范围，验证的要求与内容、所需的条件、测试方法以及时间进度，并设计出验证所需的表格。此方案应在 月 日前编制完成。
验证完成要求及日期
验证小组严格执行该验证方案，验证结束后，拟订出该方法的验证周期
和验证报告报验证领导小组批准。此验证应在 月 日前验证结束。
验证小组签名 年 月 日

备

注

验证方案审批表
3
审批

程序
部门
负责人签名
日期
备注
起

草

审

核
QC主管

质量部

验证管理部门

批

准

备
注

参加验证人员
姓 名
所在部门
职务/职称
验证分工

化验室
QC
检测

化验室
QC主任
方案的制定

质量部
质量部负责人
验证方案的审批，指导、组织、落实验证工作

其 它

安徽谓博中药股份有限公司
验 证 文 件
题 目
骨碎补检验方法验证方案
编 码

页 码
第 1 页/共 页
起 草 人

起草日期

审 核 人

审核日期

批 准 人

批准日期

一、简介
 取净骨碎补或片，照烫法（通则0213）用砂烫至鼓起，撞去毛。
本品形如骨碎补或片，体膨大鼓起，质轻、酥松。
二、验证目的：
骨碎补检验质量标准收载在《中国药典》2015版一部, 为保证生产出的成品符合检验标准的要求,确认该检测方法是否适用于本公司生产的成品检验。现对质量标准分析方法进行验证，确保检验结果的准确可靠。
三、验证范围
①、鉴别
②、含量测定
四、验证小组成员及职责
4.1验证小组成员
4.2人员职责
人 员
职 责
验证小组组长
组织相关的验证培训；负责起草验证方案、组织项目的具体验证、督促验证小组成员按照验证方案的要求做好验证记录；起草并完成验证报告，对整个验证项目负责。
验证小组成员
按照方案实施验证、并做好记录、意外情况及时汇报和记录、协助起草验证方案和报告。
表1：

五、验证实施步骤
1、为了确保验证数据的准确可靠，采取以下几个先行保障措施
1.1仪器：己经过校正并在有效期内
1.2人员：均经过培训，熟悉方法及使用的仪器
1.3对照品：
1.4材料：均符合检验要求
1.5参考资料：
《中国药典》2015年版一部及四部
2、鉴别
2.1试验A：取本品粉末0.5g，加甲醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（1:12:2.5：3）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
2.2试验B：取甲醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取试验A项下对照品溶液，照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（1:12:2.5：3）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。

2.3检测结果:表2

检验结果
结果判断
试验A

试验B

检测人: 检测日期:
2.4 验证标准:试验A供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。试验B供试品溶液在与对照品溶液相同的位置未显荧光斑点。
2.5检验结果评价

3、含量测定
照高效液相色谱法测定。
仪器： 高效液相色谱仪，编号：
3.1专属性
3.1.1色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-醋酸-水（35:4:65）为流动相；检测波长为283nm。理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。
流速：1.0ml/min；进样量：10μl。
3.1.2对照品溶液的制备：取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含柚皮苷60μg的溶液，即得。
3.1.3供试品溶液的制备： 取本品粗粉约0.25g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇30ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.1.4空白溶液的制备：
直接取甲醇作为空白溶液。
3.1.5将结果填入下表。
表3 含量测定专属性试验表

保留时间
供试品溶液

对照品溶液

空白溶液

检测人： 检测日期：
3.1.6验证标准：供试品溶液中应呈现与柚皮苷对照品保留时间相同的色谱峰；空白溶液中在这点应无色谱峰。
3.1.7结果评价

3.2准确度
3.2.1色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-醋酸-水（35:4:65）为流动相；检测波长为283nm。理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。流速：1.0ml/min；进样量：10μl。
3.2.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。
3.2.3供试品溶液的制备：取3.1.3项下的供试品溶液，作含量测定用。
3.2.4取本品粉末(过三号筛)约0.25g，置50ml量瓶中，共称九份。
3.2.4.1三份中分别加3.1.2项下的对照品溶液10ml，置50ml量瓶中，加甲醇30ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.2.4.2三份中分别加3.1.2项下的对照品溶液20ml，置50ml量瓶中，加甲醇30ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.2.4.3三份中分别加3.1.2项下的对照品溶液30ml，置50ml量瓶中，加甲醇20ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.2.5计算　
回收率%=（C－A）/B×100%
式中 A为供试品所含被测成分量；
B为加入对照品量；
C为实测值。
回收率限度要求：90~108
RSD限度要求3
3.2.6计算结果填入下表：

表5 含量测定柚皮苷加样回收率试验表
序号
样品称量（g）
样品中柚皮苷的含量（mg）
对照品加入量（mg）
实测值（mg）
回收率（%）
回收率的平均值（％）
RSD（%）
1

2

3

4

5

6

7

8

9

检测人： 检测日期：
3.2.7结果评价

3.3精密度
3.3.1重复性（设操作人员A）
3.3.1.1色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-醋酸-水（35:4:65）为流动相；检测波长为283nm。理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。流速：1.0ml/min；进样量：10μl。

3.3.1.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。
3.3.1.3供试品溶液的制备：取取本品中粉约0.25g，精密称定，共称6份。置锥形瓶中，加甲醇30ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.3.1.4计算
F对＝

供试品峰面积×稀释倍数
含量= ×100%
×物重×（1﹣水份%）×1000
式中：：平均峰面积
f对：对照品稀释倍数
W对对照品称重
S 对照品纯 度
F对响应因子
平均响应因子
3.3.1.5将计算的结果填入下表
表6 含量测定柚皮苷重复性试验表
序号
样品称量（g）
含量（g/g）
含量的平均值（g/g）
RSD（%）
1

2

3

4

5

6

检测人： 检测日期：
3.3.1.6结果评价

3.3.2中间精密度（换一时间，换一操作人员，设操作人员为B）
3.3.2.1色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-醋酸-水（35:4:65）为流动相；检测波长为283nm。理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。流速：1.0ml/min；进样量：10μl。
3.3.2.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。
3.3.2.3供试品溶液的制备：：取取本品中粉约0.25g，精密称定，共称6份。置锥形瓶中，加甲醇30ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.3.2.4计算

F对＝

供试品峰面积×稀释倍数
含量= ×100%
×物重×（1﹣水份%）×1000
式中：：平均峰面积
f对：对照品稀释倍数
W对对照品称重
S 对照品纯 度
F对响应因子
平均响应因子
3.3.2.5将计算的结果填入下表
表7： 含量测定柚皮苷中间精密度试验表

序号
样品称量（g）
含量（g/g）
含量的平均值（g/g）
RSD（%）
操作员A
1

2

3

4

5

6

操作员B
1

2

3

4

5

6

检测人： 检测日期：
3.3.2.6结果评价

3.4耐用性
3.4.1以流动相的组成比例、同一规格的色谱柱为变动因素，得出测定结果不受影响的程度，为使方法用于常规检验提供依据。
3.4.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。
3.4.3供试品溶液的制备：取3.1.3项下供试品溶液作为供试品溶液。
3.4.4色谱条件1：以甲醇-醋酸-水（35:4:65）为流动相，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为250nm，流速：1.0ml/min；进样量：10μl。
3.4.5色谱条件2：流动相组分比例改变，其他条件不变。
⑴以甲醇-醋酸-水（55:4:45）为流动相，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为250nm，流速：1.0ml/min；进样量：10μl。。
⑵以甲醇-醋酸-水（15:4:85）为流动相，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为250nm，流速：1.0ml/min；进样量：10μl。
3.4.6将数据整理，填入下表。

表8 含量测定耐用性试验表

保留时间
分离度
理论板数
色谱条件1

色谱条件2
⑴

⑵

检测人： 检测日期：
3.4.7结果评价

六、验证的结果评价及建议
七、再验证周期：质量部门根据验证结果确定再验证周期