爪蟾卵母细胞固醇调控通路的建立及姜黄素的作用.doc

爪蟾卵母细胞固醇调控通路的建立及姜黄素
的作用

作者：沃立科 范春雷 沃兴德

【摘要】 ［目的］在爪蟾卵母细胞中建立人类 SCAP/SREBP

固醇调控系统，利用此系统研究姜黄素对 SCAP/SREBP 调控通路的作

用。 ［方法］构建带有绿色荧光报告蛋白基因的 PLXRN 4SRE fpa

质粒，将构建质粒和其他几种质粒分别提取混和成实验组质粒和对照

组质粒，通过微注射的方法分别共注射到Ⅴ、Ⅵ爪蟾卵母细胞核内，

与不同浓度的姜黄素共孵育 3 天， 使用荧光定量 PCR 检测荧光表达量。

［结果］相同浓度的姜黄素对注射含有固醇调节元件质粒的卵母细胞

荧光表达量要明显高于不含相应元件的质粒。 ［结论］构建的质粒

pLXRN 4SRE fPA 能在爪蟾卵母细胞中有效地应答 SCAP、SREBP 调

控因子； 通过影响 SCAP/SREBP 调控通路调节 SRE 1 下游基因的表达

可能是姜黄素调脂作用的机理之一；利用核内共注射的方法在爪蟾卵

母细胞中建立的 SCAP/SREBP 调控系统可作为 SCAP 配体类药物快速筛

选和作用机制研究的细胞模型。

【关键词】 爪蟾卵母细胞 姜黄素 SCAP/SREBP 固醇调控通路

Abstract: ［ Aim ］ The expressed system of sterol

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regulation by SCAP/SREBP Pathway was established in the oocyte

of the Xenopus laevis and was applied to investigate the effect

of cucurmin on the SREBP pathway.［Methods］ The plasmid of PLXRN

4SRE fpa was restructed and injected into the nucleus of

Xenopus Oocytes in phase V or VI. The oocyte was incubated with

different concentrations of the curcumin. After three days the

fluorescence intensity on the membrane of the Oocytes was

measured by Fluoroanalyzer. ［ Results ］ The fluoresecence

intensity on the membrane of the oocyte increased with

increasing of the concentration of the curcumin. The trail group

which have all regulation elements of SCAP/SREBP pathway can

express more fluorscence protein than the control group.

［Conclusion］ The experiment provides that the curcumin can

upgrade the expression of low density lipoprotein receptor by

SCAP/SREBP regulation pathway. The model can be applied for

quick screening of the scap ligand drugs and inverstigating the

mechanism of the drugs.

Key words: Oocyte of Xenopus Laevis; curcumin;

SCAP/SREBP regulation pathway

活血化瘀中药姜黄中提取的姜黄素具备降血脂抗动脉粥样硬

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化作用，特别是能够降低血清胆固醇和甘油三酯,［1 2］其作用可

能是通过对脂酶和低密度脂蛋白受体的调节。 3 ［ 5］我们考虑姜黄

素可能是通过 SCAP/SREBP 固醇调控系统，以 SCAP 配位体形式出现的

高效低毒新型降脂药。 为了证明这一作用我们构建了 SCAP/SREBP 固醇

调控系统质粒，经核注射方法注入两栖类爪蟾卵母细胞中进行高效表

达，经与不同浓度姜黄素孵育，通过检测绿色荧光的量来分析姜黄素

的作用。

1 材料与方法

1 1 材料 成年雌性非洲爪蟾，购自中国科学院上海细胞

所，由本室饲养，可供常年使用。大肠杆菌感受态细胞 DH5a购自上

海生物工程有限公司； PCMV SREBP 1a460,PCMV SCAP 购自 ATCC

公司；pQBI25 fPA 购自 Qbiogene 公司；pBSK SRE 委托上海生物

工程有限公司合成；PLXRN 由 BD Bioscience Clontech 提供。姜黄素

(纯度³97%，HPLC)，购自安徽甙尔塔天然有机化合物信息中心。

1 2 方法

1 2 1 基因合成：我们应用 PBSK 质粒，根据调节 SREBP

表达的调控元件 SRE 的碱基序列（5′ ATCACCCCAC 3′）设计了

含有 SRE 调控元件的基因， 调节元件下游设计了多克隆酶切位点， 并在

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