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永生化胚胎肝细胞系的构建及其生物学特性

作者：李羽，白雪帆，王军，徐哲，张岩

【关键词】 永生化；肝细胞；细胞系；生物学特性；SV40；脂质

体

Establishment and biological characterization of an

immortalized human fetal hepatocyte line

【Abstract】 AIM: To establish an immortalized human

fetal hepatocyte line and to study its biological

characteristics and functions. METHODS: Human fetal hepatocytes

were transfected with pcDNA3.1 recombined vector containing the

Simian Virus 40 large T antigen. Characteristics of the

immortalized fetal hepatocyte line were evaluated by

morphologic and functional detection. RESULTS: One of the

hepatocyte clones displaying highly differentiated in liver

function and immortalized characteristics had been screened

after 40 day selection of 700-300 mg/L G418. The immortalized

hepatocyte line maintained the most morphologic characteristics

of primary hepatocyte. The cell cloneforming rat was 31.2%. The

immortalized human fetal hepatocytes had a normal karyotype and

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were not able to grow in soft agar culture. It had the ability

of composing albumin and the immunohistochemical test showed

that the SV40T gene had been integrated into the transformed cell

genome. CONCLUSION: The immortalized human fetal hepatocyte

line has the similar most morphologic characteristics and

biological function to primary hepatocytes, and it would become

ideal cell material on the study of bioartificial liver and

hepatocyte transplantation.

【 Keywords 】 immortalized; hepatocytes; cell line;

characterization; SV40; liposomes

【摘要】 目的: 构建永生化肝细胞系并对其生物学特性及某

些功能进行研究. 方法： 利用 SV40T 基因和真核表达载体 pcDNA3.1

经脂质体转染至体外分离培养的人胚胎肝细胞，使其永生化，进一步

鉴定其形态学特征和生物学功能. 结果： 经 G418 700～300 mg/L 筛

选，40 d 后获得一株阳性克隆. 形态学观察发现，该细胞具有原代培

养肝细胞的大多数典型特征. 永生化胚胎肝细胞克隆形成率为

31.2%，染色体核型分析表明细胞核型无明显异常，软琼脂集落形成试

验表明细胞在软琼脂中不能生长，免疫组化证明 SV40T 基因已整合入

细胞，而且该细胞具有合成白蛋白的功能. 结论： 新建胚胎肝细胞系

具有与原代肝细胞类似的形态特征及生物学功能，可以成为生物人工

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肝及肝细胞移植研究中的理想细胞材料.

【关键词】 永生化；肝细胞；细胞系；生物学特性；SV40；

脂质体

【中图号】 R512.6

0 引言

原位肝移植可以有效治疗各种原因引起的肝功能衰竭，因而

成为治疗肝功能衰竭的唯一有效手段. 但由于受到技术复杂、价格昂

贵尤其是供肝短缺的困扰，使它的临床应用受到很大限制，难以及时

有效地挽救患者的生命. 研究显示生物人工肝及肝细胞移植可以作为

一种有效的替代治疗手段，帮助患者渡过危险期等待肝移植甚至直接

取得令人满意的疗效， 因而为肝衰竭的治疗提供了一种新的选择 1-5］
［ .

而该项技术的应用需要足够数量肝细胞材料，动物肝细胞或者各种肝

细胞系由于存在病毒感染及潜在的致瘤危险，无法成为理想的选择.

从理论上讲人源性肝细胞应该是最佳材料，但原代细胞体外培养增殖

及传代困难，而且来源同样受到很大限制，为此我们采用脂质体转染

的方法，构建了一株永生化胚胎肝细胞系，并对其生物学特性进行研

究，希望可以为生物人工肝及肝细胞移植的临床开展提供理想而充足

的细胞材料.

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