人参皂苷Rg2对体外培养低氧心肌细胞的保护作用.doc

人参皂苷 Rg2 对体外培养低氧心肌细胞的保
护作用

【摘要】 目的 观察人参皂苷 Rg2 对低氧心肌细胞的保护作用。

方法 取新生 24 h 的 Wistar 大鼠心肌细胞，体外培养 4 d，随机分为

正常组、 模型组、 人参皂苷 Rg2 组。人参皂苷 Rg2 组加入 0.025 mmol/L

的人参皂苷 Rg2，正常组与模型组加入等量的培养液。孵育 4 h 后，

将模型组与人参皂苷 Rg2 组移入 37 ℃恒温密闭容器中,连续充以体积

分数 0.95 的 N2 和体积分数 0.05 的 CO2 混合气体流速 20 mL/min,持

续 1 h，然后应用锥虫蓝染色计数存活细胞，流式细胞仪检测细胞凋

亡情况，酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）的活性及丙二醛（MDA） 、一

氧化氮 (NO)的含量。 结果 人参皂苷 Rg2 组与正常组心肌细胞凋亡率比

模型组明显降低（F=4.75,q=6.44~8.09,P<0.05） ；人参皂苷 Rg2

组与正常组心肌细胞 SOD 活性、MDA 和 NO 含量与模型组相比差异有显

著性（F=5.67~13.72,q=4.35~13.68,P<0.05） 结论 人参皂苷 Rg2 。

在体外有抗低氧损伤的作用，其作用机制可能是通过抑制细胞凋亡、

提高抗氧化酶的活力、清除自由基而发挥作用。

【关键词】 人参皂苷；肌细胞, 心脏；细胞培养技术；低氧;自

由基

［ABSTRACT］Objective To investigate the protection of Rg2

on hypoxic cardiocytes. Methods Cardiocytes of 24 hour old

newborn rat were cultured for four days then divided into normal

group, model group and Rg2 group. Rg2 (0.025 mmol/L) was added

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to Rg2 group, and culture fluid was added to the normal group

and model group. All were incubated for four hours, and then

model group and Rg2 group were taken to 37 ℃ homeothermic

hermetic container, and given 95% N2 and 5% CO2 and mixed. The

morphological changes were observed. The apoptosis of

cardiocytes were detected by flow cytometry (FCM). The contents

of MDA and NO and the activity of SOD were determined by

biochemical method. Results Compared with the model group, the

apoptosis significantly decreased in the Rg2 and the normal

groups (F=4.75,q=6.44-8.09,P<0.05). Compared with the model

group, the activity of SOD, the contents of MDA and NO in Rg2

group and normal group showed statistical significance

(F=5.67-13.72,q=4.35-13.68,P<0.05). Conclusion The

protective effect of Rg2 on myocardial cells against anoxia in

vitro possibly through inhibiting cell apoptosis, increasing

the energy of antioxidase and eliminating free radicles.

［ KEY WORDS ］ Rg2; Myocytes, cardiac; Cell culture

technique; Anoxia; Free radicle

缺血低氧是众多心脏疾病共有的病理学基础， 而临床上对心脏病

的治疗也是以改善心肌供血，预防及纠正心肌缺血低氧造成的损害为

根本。人参是传统的名贵中药,有重要的药用价值和经济意义。目前，

多种人参的复合制剂已广泛应用于治疗心脏疾病［1～3］ 。人参皂苷

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Rg2 是人参三醇的组成成分，文献报道人参皂苷具有抗细胞凋亡的作

用［4,5］ 。本实验通过体外培养成熟心肌细胞，建立急性气体低氧模

型，锥虫蓝染色细胞计数并做流式细胞仪检测以及酶法测定超氧化

物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MAD)、一氧化氮(NO)的含量，以此来

探讨人参皂苷 Rg2 体外是否有抗低氧损伤的作用及其作用机制，为临

床用药提供依据。

1 材料和方法

1.1 实验动物

新生 24 h 的 Wistar 大鼠 10 只，清洁级，由青岛市药检所动物

实验中心提供。

1.2 主要试剂

水溶性人参皂苷 Rg2 (吉林省中医中药研究院提供)，DMEM、小

牛血清(杭州四季青生物材料工程公司)，SOD、MAD、NO 试剂盒(南京

建成生物工程研究所)，多聚赖氨酸(Sigma 公司)。

1.3 主要仪器设备

OLYMPUS,BX 50,PM-20 系统显微镜(日本),PM-6，OLYMPUS 解剖

显微镜(日本),二氧化碳细胞培养箱(上海福玛实验设备有限公司),YJ

超净工作台（垂直单向流型，苏州市洁净技术研究所） 。

1.4 方法

1.4.1 心肌细胞培养及鉴定 24 h 大鼠乳鼠，以体积分数 0.75

的乙醇浸泡消毒，开胸取出心脏，放入 PBS 中冲洗，尽量去除血迹。

将心尖部肌肉剪成 2 mm×2 mm×2 mm 左右碎块，加入胶原酶、胰蛋白

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