兔抗人NDR2高效价抗血清的制备、纯化及鉴定.doc

兔抗人 NDR2 高效价抗血清的制备、 纯化及鉴
定

作者： 张文红 刘新平 王吉村 韩月恒 邓艳春 周洁 药立

波

【关键词】 免疫血清

关键词: NDR2;基因，Myc 表达;免疫血清;亲和纯化;易感性与特

异性

摘 要:目的 制 备 高 效 价 的 NDR2 抗 体 . 方 法 构建

pRset-A-ndr2，pGEX-4T-1-ndr2-a 和 pGEX-4T-1-ndr2-b 三种重组表

达质粒，并分别在大肠杆菌中诱导表达相应的融合蛋白 ;用全长

GST-NDR2 蛋白免疫兔，然后用 GST-NDR2-A 和 GST-NDR2-B 片段加强免

疫;对包涵体形式表达的 6His-NDR2 进行初步的纯化;利用固定于硝酸

纤维素膜上的 NDR2 抗原亲和吸附纯化抗血清. 结果 经免疫得到了高

效价的兔抗人 NDR2 多克隆抗血清，亲和纯化提高了 NDR2 抗体的特异

性;免疫组化表明 NDR2 是一种胞浆蛋白. 结论 用全长 NDR2 蛋白免疫

兔，再用片段加强免疫，可以提高蛋白的抗原性，制备得到高效价的

抗体.纯化后的特异性 NDR2 抗体， 进一步研究 NDR2 的功能打下了必 为

要的基础.

Keywords:n-myc downsream regulator2;genes，myc;gene

1

sensitivity and expression;immune sera;affinity

purification;specificity

Abstract:AIM To obtain an anti-NDR2polyclonal

anti-body.METHODS Full length of ndr2cDNA was cloned in-to

pRset-A vector and two truncated sequences of ndr2were cloned

into pGEX-4T-1vector respectively.The fusion pro-teins were

expressed in E.coli and partially purified by inclu-sion body

fraction.Immunization in rabbits with the whole NDR2protein was

reinforced with two truncated fragments of NDR2twice.The

anti-NDR2specific antibody was puri-fied by absorbing antiserum

with NDR2antigen immobilized NC filter.RESULTS High titer of

antiserum against NDR2was obtained in immunized rabbits and the

specificity to NDR2was increased after affinity

purification.Immunohis-tochemical test with this antibody

showed that NDR2is a cy-toplasmic protein.CONCLUSION

Reinforcement with trun-cated NDR2proteins can strengthen the

antigenicity of NDR2protein in rabbits.The specific

NDR2antibody can be ob-tained by NC filter affinity

purification.

0 引言

2

Ndr（N-myc downstream regulated gene）家族是研究 N-myc

下游调节基因时从小鼠胚胎中发现的一组新基因.目前已报道的成员

有 4 个:ndr1，ndr2，ndr3 和 ndr4，它们具有较高的同源性，但表达

水平在组织发育阶段和分布上差异明显，具体功能还不清楚.人的

ndr2 是本室于 1999 年从正常成人全脑 cD-NA 文库中最先发现并克隆

得到.其染色体定位于 14q11.2，含有 16 个外显子，15 个内含子;mRNA

全长为 2024nt，编码含有 357 个氨基酸残基，M

r 约 40000 的蛋白质.

深入研究 NDR2 在体内的组织细胞和亚细胞水平分布特点及

其功能，需要高效价和高特异性的 NDR2 抗体.为此，我们在大肠杆菌

中分别融合表达了全长 NDR2 蛋白和两个分别含 289 个氨基酸和 198

个氨基酸的 3'末端的 NDR2 蛋白片段，并对全长的 6His-NDR2 做了初

步纯化.在用全长 NDR2 蛋白免疫兔后， 尝试用两个片段 NDR2 蛋白 我们

加强免疫， 能提高其抗原性;为进一步提高 NDR2 抗血清的特异性， 期望

我们还试着对抗血清做了亲和吸附纯化.高效价和高特异性的 NDR2 抗

体的制备，将为 NDR2 功能的深入研究提供有力工具和重要线索.

1 材料和方法

1.1 材料 重组质粒 pGEX-4T-1-ndr2 由本室构建，JM109，

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