生防木霉拮抗黄瓜枯萎病菌的初步研究.docx

生防木霉拮抗黄瓜枯萎病菌的初步研究
摘要木霉是一种重要的生防菌，对黄瓜枯萎病菌有很强的拮抗作用，主要作用方式有：竞争、重寄生、抗生、溶菌作用。温室盆栽试验显示，木霉可显著防治黄瓜枯萎病菌。
关键词木霉;黄瓜枯萎病菌;生防
木霉（trichodermaspp.）属真菌界、双核菌门、半知菌亚门、丝孢纲、丛梗孢目、丛梗孢科、真菌属，是迄今为止研究和应用最多的一类生防菌[1]。木霉的生防机制复杂，主要包括竞争、重寄生、抗生、溶菌等[2]。研究木霉对病原菌的作用机制及防治效果，可以优选木霉菌株，从而提高生防效率。
1材料与方法
1.1试验材料
以病株上分离的黄瓜枯萎病菌（fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum）为拮抗对象，土壤中分离的木霉菌株为拮抗菌。
1.2试验方法
1.2.1竞争作用。采用对峙培养法[3]，在直径为9cm的pda平板一侧接种直径为5mm的病原真菌菌丝块，在平板另一侧接种拮抗菌，28℃共培养，观察两菌的生长情况。
1.2.2重寄生作用。在pda培养基中央放置1块20mm×20mm无菌盖玻片，在左侧距盖玻片40mm处接种木霉，右侧距盖玻片20mm处接种黄瓜枯萎病菌，28℃恒温培养。取下盖玻片，于显微镜下观察菌丝体的作用方式。
12.3抗生作用。在装有100mlpdb的三角瓶中接入直径5mm的木霉菌块，28℃、150rpm培养6d，取滤液离心后过0.22μm细菌滤器。在90ml、45℃的pda中加入10ml上述滤液，摇匀倒成平板，接种直径为5mm的黄瓜枯萎病菌菌块。28℃恒温培养，观察生长情况。
1.2.4溶菌作用。将培养4d的木霉发酵液8000rpm离心10min。取15ml上清液倒入培养皿中，接入黄瓜枯萎病菌菌块。浅层培养5d后观察生长情况。以高温灭菌的木霉上清液中培养的病菌菌块为对照。
1.2.5盆栽试验。将黄瓜种子经70%乙醇消毒1min，2%naclo消毒5min，55℃温水浸15~20min，25℃浸泡2~3h，无菌水冲洗3次，25~30℃下催芽1~2d。将黄瓜枯萎病菌接种到麸皮∶玉米粉为3∶1的培养基中，28℃恒温箱中培养至长满整个三角瓶。将催芽基本一致的黄瓜苗在木霉菌悬液（约1×108cfu/ml）中浸1h，取出于灭菌滤纸片上干燥1h后，播种于拌有黄瓜枯萎病菌制剂的土壤中。以无菌水浸种处理为对照。2结果与分析
2.1竞争作用
平皿对峙试验显示，木霉生长迅速，可快速占据空间，有很强的生长竞争优势，能有效抑制黄瓜枯萎病菌的生长。
2.2重寄生作用
显微镜下观察到木霉菌丝体缠绕着黄瓜枯萎菌丝生长，并在病菌菌丝上产生大量分枝，产生寄生作用。
2.3抗生作用
在pda培养基中加入10%的木霉发酵液后，黄瓜枯萎病菌菌丝生长不旺盛，与对照有显著的差异。
2.4溶菌作用
在未灭菌的木霉上清液中培养的黄瓜枯萎菌块，仅有细小菌丝的生长，数量较少;而在灭菌后的上清液中，黄瓜枯萎菌生长旺盛，形成大块菌丝团。
2.5盆栽防效试验
盆栽试验结果表明，与对照相比，木霉浸种处理的黄瓜幼苗死亡率为25.0%，显著低于对照的66.7%。
3结论与讨论
作为安全而环境友好的生防因子，木霉在田间的施用可有效地防治作物病害，从而避免大量使用农药导致病原菌抗药性的产生、作物农药含量超标及环境污染等问题[4-6]。因此，对木霉生防机制深入而全面的研究，将对绿色农业的可持续发展产生重要的推动作用。
4参考文献
[1]辛雅芬，商金杰，高克详.拮抗木霉菌的生防机制研究进展[j].东北林业大学学报，2005，33（4）：88-91.
[2]harmang，howellcr，viterboa，etal.trichodermaspecies-opportunistic，avirulentplantsymbionts[j].nature，2004（2）：43-56.
[3]蒲金基，曾会才.绿色木霉ltr12-1对黄瓜枯萎病菌防治作用机制的初步研究[j].热带农业科学，2002，22（4）：22-25.
[4]吕天晓，徐凤花，李世贵，等.生防木霉菌原生质体的制备及再生研究[j].生物技术通报，2009（4）：130-134.
[5]庄敬华，陈捷，杨长成，等.生防木霉菌生物安全性评价[j].中国农业科学，2006，39（4）：715-720.
[6]王勇，王万立，刘春艳，等.生防木霉菌tr9701的鉴定及其生物学特性[j].华北农学报，2006，21（1）：100-104.
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