阿司匹林药分.docx

方法名称：阿司匹林原料药—阿司匹林的测定—中和滴定法。 　　
应用范围：该方法采用滴定法测定阿司匹林原料药中阿司匹林的含量。 　　该方法适用于 阿司匹林原料药。 　　

方法原理：供试品加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）溶解后，加酚酞指示液，用氢氧化钠滴定液滴定，根据滴定液使用量，计算阿司匹林的含量。 　　

试剂：1. 中性乙醇（对酚酞指示液显中性） 　　2. 氢氧化钠滴定液（0.1mol/L） 　　3. 酚酞指示液 　　4. 基准邻苯二甲酸氢钾 　　
仪器设备： 　　

试样制备：1. 氢氧化钠滴定液（0.1mol/L） 　　配制：取氢氧化钠适量，加水振摇使溶解成饱和溶液，冷却后，置聚乙烯塑料瓶中，静置数日，澄清后备用。取澄清的氢氧化钠饱和溶液5.6mL，加新沸过的冷水使成1000mL，摇匀。 　　标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.6g，精密称定，加新沸过的冷水50mL，振摇，使其尽量溶解，加酚酞指示液2滴，用本液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。每1mL氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度。 　　贮藏：置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔内各插入玻璃管1支，1管与钠石灰管相连，1管供吸出本液使用。 　　2. 酚酞指示液 　　取酚酞1g，加乙醇100mL使溶解。 　

操作步骤：精密称取供试品约0.4g，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20mL溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1mL氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于18.02mg的C9H8O4。 　　注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

（一）酸碱滴定法
1. 直接滴定法 阿司匹林结构中的游离羧基，可采用碱滴定液直接滴定。各国药典测定双水杨酯的含量也采用直接滴定法。方法：取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml，溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于18.02mg的C9H8O4。
2. 水解后剩余滴定法利用阿司匹林酯结构在碱性溶液中易于水解的性质，加入定量过量的氢氧化钠滴定液，加热使酯水解，剩余的碱用酸溶液回滴。USP(23)方法：取本品约1.5g，精密称定，加入氢氧化钠滴定液（0.5mol/L）50.0ml，混合，缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mol/L）滴定剩余的氢氧化钠，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的氢氧化钠滴定液（0.5mol/L）相当于45.04mg的C9H8O4。
3. 两步滴定法 用于阿司匹林片和阿司匹林肠溶片的含量测定。片剂中除了加入少量酒石酸或枸橼酸稳定剂外，制剂工艺过程中又可能有水解产物（水杨酸、醋酸）产生，因此不能采用直接滴定法，而采用先中和与供试品共存的酸，再将阿司匹林在碱性条件下水解后测定的两步滴定法。中和 精密称取片粉适量（约相当于阿司匹林0.3g），加入中性乙醇溶解后，以酚酞为指示剂，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至溶液显粉红色。此时中和了存在的游离酸，阿司匹林也同时成为钠盐。水解与测定 在中和后的供试品溶液中，加入定量过量的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）40 ml，置水浴上加热使酯结构水解，迅速放冷至室温，再用硫酸滴定液(0.05mol/L）滴定剩余的碱，并将滴定的结果用空白试验校正。含量计算 ASA的标示量百分含量＝ 式中：V0为空白试验消耗硫酸量（ml）；V为剩余滴定时消耗硫酸量（ml）；M为硫酸滴定液的浓度（mol/L）；W为供试品片粉量（g）；为平均片重（g）。
（二）亚硝酸钠滴定法
（三）高效液相色谱法为了分离原料药和制剂中的杂质、辅料以及稳定剂等，采用高效液相色谱法测定阿司匹林栓剂；USP(23)用于测定对氨基水杨酸钠及其片剂，阿司匹林片剂，长效与缓冲片剂，缓释胶囊等。
（四）柱分配色谱－紫外分光光度法阿司匹林制剂的含量测定方法除了两步滴定法和高效液相色谱法外，USP(23)测定阿司匹林胶囊的含量采用柱分配色谱-紫外分光光度法，经柱色谱分离后，可同时定量测定阿司匹林和水杨酸。柱分配色谱法是一种简便快速的色谱方法，尽管其分辨率低于气相色谱法、高效液相色谱法和薄层色谱法，但定量准确度较薄层色谱法要高，可以分离较大量的样品，分离出的组分不仅可以用光谱法定量，有时也可用重量法等经典方法定量。柱分配色谱法也常用作分离净化方法。1.水杨酸的限量测定原理：水杨酸与三氯化铁-尿素试剂生成紫色水杨酸铁配位化合物，保留于硅藻土色谱柱上，用氯仿洗脱阿司匹林，弃去洗脱液；再以冰醋酸-水饱和乙醚洗脱 ，紫色配位化合物解离，水杨酸游离出来，继而被氯仿洗脱。于306nm波长处测定吸收度。方法：色谱柱的制备 于玻璃柱（20 cm×2.5cm）下端塞入少量玻棉，装入两种填充剂，下层为硅藻土1g和磷酸液（5mol/L）0.5ml的混合物，上层为硅藻土3g和新制三氯化铁－尿素试剂 [取尿素60g溶于三氯化铁液(6® 10)8ml和盐酸液(0.05mol/L)42ml混合液中，必要时用盐酸液调节溶液至pH3.2。]2ml的混合物。对照品溶液的制备取水杨酸对照品配成75m g/ml氯仿溶液为贮备液。供试品溶液的制备 取胶囊内容物适量（相当于阿司匹林100mg），精密称定，加入氯仿10ml，搅拌3分钟后，转移入色谱柱填充剂上，并用氯仿数毫升洗净容器后，一并移入柱内。用氯仿50ml分数次洗脱，并弃去之。再用冰醋酸－水饱和乙醚（1® 10）10ml洗脱水杨酸，收集洗脱液于已盛有甲醇10 ml，盐酸2滴的50ml量瓶中，继用氯仿30ml洗脱，并用氯仿稀释至刻度。测定法于306nm波长处，1cm吸收池中，以配制对照品溶液的溶剂为空白，测定对照品溶液和供试品溶液的吸收度，后者不得超过前者的吸收度，即按阿司匹林标示量计,允许水杨酸限量为0.75％。
（1）洗脱时，若有三氯化铁被洗下，则使洗脱液带黄色，影响测定结果，故在色谱柱下层加入拌有磷酸的硅藻土，与Fe3+生成不溶于洗脱液的磷酸铁而避免干扰。
（2）在洗脱SA时，可能有尿素被洗下，故接收液中加入适量盐酸保持酸性。
（3）制备供试液以及整个操作宜快，避免ASA水解。
（4）若紫色环谱带扩散，可能样品量大，则应重新填装色谱柱。
2. 含量测定原理：在硅藻土－碳酸氢钠色谱柱中，阿司匹林及水杨酸成钠盐保留于柱上，先用氯仿洗脱除去中性或碱性杂质，再用醋酸酸化，使阿司匹林游离，被氯仿洗脱后测得其含量。方法：色谱柱的制备 填充剂为硅藻土3g和新制碳酸氢钠液（1® 12）2ml的混合物。以下测定中所用氯仿均应在临用前用水饱和。对照品溶液浓度为50m g/ml，冰醋酸－氯仿(1® 100)液为溶剂。供试品溶液的制备 取胶囊20粒，尽可能完全倾出内容物，精密称定，研细，混匀；取适量细粉（相当于阿司匹林50mg)，精密称定，置于已盛有盐酸甲醇液（1® 50）1ml的50ml量瓶中，加氯仿至刻度，混匀。精密量取此液5ml转入色谱柱填充剂上，用5ml、25ml氯仿相继洗脱后弃去，立即用冰醋酸－氯仿（1® 10）液10ml洗脱，再用冰醋酸－氯仿（1® 100）液85ml洗脱，将洗脱液收集于100ml量瓶中，并用后者溶剂稀释至刻度，混匀。测定法 于280nm波长处，1cm吸收池中，以氯仿为空白，立即测定对照品溶液和供试品溶液的吸收度，用下式计算所取胶囊内容物细粉中含有阿司匹林的量（mg）：所取胶囊细粉中C9H8O4(mg )＝C（AU/AS）式中C为阿司匹林对照品溶液浓度（m g/ml）；AU和AS分别为供试品溶液和对照品溶液的吸收度。柱分配色谱－紫外分光光度法不需特殊仪器，结果重现性较好，但操作较繁琐。
五、血清中阿司匹林（ASA）和水杨酸（SA）浓度的HPLC测定法近年来，临床上已经确认，低剂量服用阿司匹林可抑制血小板过度凝集的疾病，如心肌梗塞和手术后的深部静脉血栓形成；并有预防缺血性脑血管病的作用，由于ASA的服用剂量小，而且易水解，因此可采用反相高效液相色谱法快速、灵敏地同时测定人血清中ASA和SA的浓度。