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细菌性阴道病及其实验室检查
细菌【摘要】
细菌性阴道病是近年来育龄妇女最常见的阴道感染性疾病，并被列为性传播疾病之一，其发病率呈上升趋势。此病是一类在细菌学上表现为生殖道正常菌群数量减少，代之以一组厌氧菌群数量增加的临床证候群。本文就细菌性阴道病的发病机理、病原体致病机制、实验室诊断方法及进展加以综述。
关键词细菌性阴道病阴道加德纳菌实验室检查
细菌性阴道病（bacterialvaginosis，简称bv）是近年来被确定的与性传播有关的疾病，其主要病原体为阴道加德纳菌（gv）。以往由于对它的认识有限，曾报道过很多名称，如非特异性阴道炎、加德纳性阴道炎、阴道嗜血杆菌性阴道炎等，1984年在斯德哥尔摩关于非特异性阴道炎的国际会议上正式定名为细菌性阴道病。由于阴道加德纳菌的感染与传播和性活动有关，故此将细菌性阴道病列入第三代性传播疾病。随着性病病原体感染谱的变化，其发病率有逐年增高的趋势。1细菌性阴道病
细菌性阴道病是育龄期妇女最常见的阴道感染性疾病。在健康妇女中，阴道由于组织解剖和生物化学以及生理方面的特点，对于外界病原体的侵入有着相当强的防御能力，使病原体难以侵犯阴道，保持阴道的正常结构和生理功能。如果阴道的自然防御屏障作用破坏，如经期或妊娠期内分泌激素水平改变、性交、阴道灌洗、抗生素等对阴道固有菌群的抑制，乳酸杆菌丧失其健康状态下的优势地位而使多种致病菌，特别是厌氧菌大量繁殖，导致阴道生态系统紊乱，引起阴道炎症。细菌性阴道病是由多种致病性厌氧菌感染引起的无明显粘膜炎症的一种疾病，感染率在15%～30%，且易复发［1］。患bv孕妇胎膜感染的比例是健康者的3倍［2］，发生胎膜早破及早产的机会是健康者的2倍［3］，容易早产或分娩低体重儿，她们所生下的孩子也很可能会因此带有各种缺陷。越来越多的证据表明，bv是导致组织性绒毛膜炎、羊水感染、剖宫产术后子宫内膜炎及其他妊娠不良和妊娠并发症的危险因素。另外在妇科中，bv主要与输卵管炎、盆腔炎、宫外孕、不孕症、泌尿系感染、术后感染及妇科肿瘤有关［4～7］。有部分女性患者感染后得不到及时治疗，或经过不正规的治疗后，转为慢性感染或带菌者，当机体受外来及生理因素影响时，病原体可再次复活而侵袭传播，使病情反复发作不能痊愈，此时病原体又不易查出，给患者带来极大痛苦。阴道加德纳菌作为一种条件致病菌，在临床上，由于大量抗生素的应用使加德纳菌的感染率在不断地增高，且又与性传播有关，正逐步引起临床的高度重视。2细菌性阴道病的实验室检查
目前对加德纳菌的实验室诊断，主要有阴道分泌物的细菌学检验、免疫学试验、线索细胞检查和细菌代谢产物测定等，近年来，有报道采用聚合酶链反应检测阴道分泌物中的加德纳菌，用于bv的快速诊断［8］。下面简述几种实验室检查方法及相关机理。从1954年gardner发现bv以来，随着对bv病原体认识的改变，认识到引起bv的细菌有多种，最近研究提示，引起感染的微生物数量是决定症状发展的关键［9］，但一致认为本病特征是阴道生态环境的改变，由大量致病性厌氧菌取代了正常乳酸杆菌［10～12］，以加德纳菌形态菌和（或）类杆菌形态细菌为主，其次是弯曲弧菌形态细菌、革兰阳性球菌，这几种细菌可单独感染引起bv，也可混合感染引起bv［13］。以上一种或几种大量增多，粘附在上皮细胞表面，使细胞溶解，边缘呈锯齿状模糊不清，形成bv所特有的线索细胞。线索细胞是细菌性阴道病菌群变化后的必然产物，可作为诊断bv的主要指标［14］。从1965年起革兰染色方法用于bv的实验室验证，其敏感性为62%～100%，阳性准确率为76%～100%，重复性好，并与临床表现具有极密切的相关性［9］。其优点还在于它将阴道菌群分为正常态、过渡态和bv。处于过渡态的妇女一般有阴道ph值的略微升高、少量可见的线索细胞以及淡淡的异味等，诊断较为困难。这些人更可能是患有滴虫性阴道炎等病症，比正常妇女则更容易患上bv。同时，该方法简便，具有容易保存及重复读片等优点，不仅可明确诊断bv，也可提高滴虫、霉菌等的检出率。
bv患者阴道生态系统紊乱，造成厌氧菌大量繁殖，将产生丁二胺、三甲胺等氨类物质，使ph值升高，碱化阴道，并进一步促进厌氧菌生长，加重bv的临床症状，引起上皮细胞脱落分泌物增加并产生特殊气味。因此，临床上采用传统的amsel诊断方法，即符合以下4项指标中的3项可诊断为bv：（1）阴道ph>4.5;（2）阴道分泌物增多，稀薄或均质如面糊样粘稠，有异味;（3）胺试验（whiff）阳性，即在阴道分泌物中加入10%koh产生鱼腥味;（4）阴道涂片中可见线索细胞［9］。由于bv是阴道中乳酸杆菌与其他多种菌群间的平衡失调所致，bv发病是混合感染。因此，对单一种类细菌的分离培养在bv的诊断中意义不大，必须同时结合临床表现方能做出判断。在一些与bv密切相关的细菌的培养试验中，不是特异性差，就是敏感性不好。
80年代后期，人们发现了bv与阴道中特有的微生物的代谢产物有关，并依次研究出一系列新的bv诊断技术和方法［15］。一些引起感染的微生物所产生的酶被认为是致病因子。微生物可利用其自身产生的这些酶来干扰阴道的宿主防御体系。例如粘蛋白水解酶类中，粘蛋白酶能够有效地分解生殖道中具有保护作用的粘蛋白外壳成分，改变宫颈防御功能，导致微生物进入宫腔，并激发炎症反应［16］。唾液酸酶则能去除组织中接近末端的糖链，两种作用均可增加细菌在宿主粘膜及组织表面的附着力;在混合性感染中，若有一种微生物产生粘蛋白水解酶便可改变宿主粘膜通透性，使其他细菌更容易与宿主上皮细胞结合并侵入。研究证实，唾液酸酶浓度与bv致病过程有关，其活性与早产、胎膜早破、低体重儿等一系列不良妊娠后果有直接关系;bv妇女阴道分泌物中的唾液酸酶活性明显高于正常妇女，其活性上升的主要来源是存在与阴道中prevotella和bacteroids，他们在妊娠期间上行至生殖道引起感染。已证实子宫颈分泌的粘液以及羊水中均有大量的唾液酸，因此bv妇女明显的比其他妇女容易发展为羊膜内感染和产后子宫内膜炎。随着对bv发病机制的不断深入了解，产生了以检测bv患者阴道分泌物中所特有的微生物的代谢产物为基础的诊断方法。这些方法具有优于上述各方法的特性，客观且适于批量操作。
脯氨酸氨肽酶法［9］：应用elisa方法检测bv妇女分泌物中高于正常妇女的脯氨酸氨肽酶活性，检测产物为β-naphthylamin，通过显色剂判断结果。体外实验证明许多细菌和真菌均能产生脯氨酸氨肽酶，但导致bv患者酶活性升高的原因还不十分清楚，该方法存在着一些较为严重的问题。（1）有研究显示，在应用该方法进行bv诊断与阴道滴虫感染有交叉，在相当比例的阴道滴虫感染者中，脯氨酸氨肽酶检测结果为阳性，其原因在于滴虫是一种能够在厌氧环境中大量繁殖的厌氧性病原微生物，它有一种能够产氢的颗粒物质，当滴虫大量存在时，其产生的氢会与阴道中的氧结合生成水，从而加剧阴道中的无氧状况，刺激并加速其他厌氧微生物的生长，导致一些bv的临床表现的出现，其中包括阴道ph升高、分泌物增加并伴以检测bv相关菌群的代谢产物为基础的诊断实验：有异味、厌氧菌数升高以及与相应细菌有关的酶水平的升高等等。由此可见在应用革兰染色方法和本方法诊断bv时均会产生假阳性。（2）其检测产物之一β-naphthylamin有强致癌性。已经有人就此对该方法进行了改进，使产物变成p-nitroanilide，并指出新方法的特异性和敏感性与旧方法无明显差异，但仍需要进一步的临床验证。（3）该方法相对来说比较费时，一次检测至少需要4h。另外，该方法在结果判定方面虽然是通过颜色进行识别，但颜色往往差别不大，阳性和阴性的区别不易判断。唾液酸酶法［9］：最近的研究证实，阴道分泌物中唾液酸酶活性与bv之间存在一定的量的关系，无bv的妇女则不显示异常的唾液酸酶活性。检测唾液酸酶的方法有若干种，但由于技术和成本等原因未能在临床得到普及。90年代，美国公司开发出一种快速诊断试剂盒，用于判定bv治疗用药的临床诊断。该方法利用阴道分泌物进行简便操作，在10min之内即可得出明确结果。试剂盒中包含一种与蛋白水解酶产生颜色反应的结合物，该水解酶是bv的特异性指征。将患者的阴道分泌物样本放入装有具有颜色反应活性的结合物的玻璃管中，于37℃保温10min，加入显色液，由颜色判定结果，黄色表示结果为阴性，绿色至蓝色表示结果为阳性，颜色变化的不同，反映了唾液酸酶活性升高的不同程度。这一成果大大提高了bv的诊断水平。用此方法测定诊断bv，操作简便，出结果快，阳性标准准确，适宜于临床筛查。
检测其他代谢产物的试验方法还有对产生异味的氨类物质的检测，以及应用气-色谱技术检测阴道分泌物中琥珀酸乳酸的量比等等，但前者缺乏特异性，后者则需要用到实验室不常备的仪器，因此不适合广泛应用。近年来研究证实，加德纳菌的致病性与生物分型有关，iis区基因的多态性是导致加德纳菌发生不同生物型的原因之一。根据加德纳菌位于iis-23srrna基因区序列作特异性引物，应用聚合酶链反应扩增阴道或宫颈分泌物中的加德纳菌，证明该引物序列具有较强的特异性和较高的敏感性，可用于对阴道炎宫颈分泌物中加德纳菌的快速检测［8］。pcr法检测的是病原体的遗传物质dna，不受抗生素治疗等药物治疗的影响，对彻底根治病原体有极其重要的意义。由于聚合酶链反应技术方法本身所具有的高特异性和敏感性，采用此方法检测阴道分泌物中的加德纳菌，用于bv的快速诊断，有可能成为今后bv实验室诊断和主要快速检测方法之一。
综上所述，bv严重危害了广大妇女的身体健康，对bv进行系统性的筛查和治疗，可以明显降低与之相关疾病的危险性，并且越早治疗效果越好，对于保护广大妇女身体健康，提高生育水平具有极大的实用价值。参考文献
1张欣，徐行丽，李金风，等.阴道唾液酸酶检测在细菌性阴道病及绒毛膜羊膜炎诊断中的价值.
第二篇：孕妇患有细菌性阴道病是很危险的孕妇患有细菌性阴道病是很危险的
细菌性阴道病以液和细胞样品从阴道看看阴道感染是否存在。细菌性阴道病也被称为非特异性阴道炎，流感嗜血杆菌性阴道炎，或加德纳杆菌性阴道炎。
细菌性阴道炎是通过改变微生物的平衡在一个健康的阴道发现引起。一个健康的阴道通常有很多微生物。参与的微生物包括细菌性阴道病加德纳菌，动弯杆菌，拟杆菌，肺炎支原体。当细菌性阴道病的存在，这些微生物的数量增加而健康的微生物数量减少。
许多妇女细菌性阴道病没有症状。细菌性阴道病最常见的症状是在浅灰色的白色阴道分泌物增多，不像正常的白带。放电经常有鱼腥味。
怀孕的风险
有细菌性阴道炎的妇女在怀孕期间有很高的流产，早期（早产）交付，和感染后交付的，所以对孕妇有症状的患者进行测试，细菌性阴道炎是很重要的。
欧迪玛veva介绍：怎么来发现细菌性阴道炎
湿封片。阴道分泌物的样本混合在显微镜载片上的盐溶液。幻灯片是检查细菌，白细胞，和不寻常的细胞称为线索细胞。如果线索细胞，它是细菌性阴道病。
气味测试。氢氧化钾（koh）溶液数滴加到阴道分泌物的样本是否是产生强烈的鱼腥味。在胺试验鱼的气味通常意味着细菌性阴道病。
阴道ph正常阴道ph值为3.8～4.5。细菌性阴道病常引起阴道ph值必须大于4.5。
寡核苷酸探针。本试验发现的遗传物质（dna）的细菌。寡核苷酸探针测试非常准确，但在所有的实验室是不可用。
第三篇：细菌实验室检查项目细菌室常规检测项目：
一形态学检查（morphologicalexamination）
（一）各种染色
1革兰染色（gramstain）。将细菌分为革兰阳性菌如葡萄球菌属，链球菌属等；革兰阴性菌如大肠埃希菌沙门菌，志贺菌等。
2抗酸染色（acid-faststain）：通过染色将细菌分为两大类：抗酸性细菌和非抗酸性细菌，抗酸性细菌种类较少，如结核分枝杆菌，麻风分枝杆菌等。正常：未见。抗酸染色，找到红色分枝杆菌，及报告“找见抗酸分枝杆菌”，量可以用加号表示：
++每个视野>10根
+++每个视野发现1～10根
++100个视野发现10～99根
+300个视野发现3～9根
±300个视野发现1～2根
3异染颗粒染色（metachromaticgranulastain）：用于检查棒状杆菌。
4墨汁染色（indianinknegativestaining）：用背景着色，而细菌本身不着色的染色方法，用于脑脊液中查找新生隐球菌。正常：未见。
5鞭毛染色（flagellastain）。鞭毛的数目和位置随细菌种类而不同，可分为周毛菌、单毛菌、双毛菌和丛毛菌，是细菌分类和鉴定的重要依据。如霍乱弧菌是单鞭毛菌。
6荚膜染色（capsulesstain）。荚膜是细菌壁外一层粘液性多聚物，赋予致病菌的侵袭力。染色将荚膜染成与菌体不同颜色，可作为细菌鉴定的依据。如肺炎链球菌。
（二）涂片检测（smear）
1便球杆比检查（stoolcocus/bacillus）：即革兰阳性球菌与革兰阴性杆菌之比。
正常值：便球杆比：1：3
临床意义。健康人肠道内寄居着大量厌氧菌和小部分需氧菌。除人乳喂养的婴儿肠道内以革兰阳性球菌为主外，其余人均以革兰阴性杆菌占绝对优势。在肠道发生致病菌如沙门、志贺、弧菌感染时往往由于使用抗生素而是革兰阴性杆菌受到抑制，此时球菌/杆菌比值有可能变大。若比值显著增大，常提示肠道菌群紊乱或发生二重感染。
2标本真菌涂片（fungi）：经革兰染色如发现革兰阳性卵圆形芽生孢子或假菌丝，可初步报告为：找到真菌孢子和菌丝。
正常值。未见真菌。
3痰涂片检查（sputumsmear）：
临床意义：目的确定标本是否适合做细菌培养，初步判定是否有致病菌存在。首先应确定标本是否为来自下呼吸道的痰，其标准为革兰染色wbc>25/lpf（低倍视野），上皮细胞1）肺炎链球菌：革兰染色为阳性球菌，成双或短链状排列
2）结核分枝杆菌：抗酸染色，找到红色分枝杆菌，及报告“找见抗酸分枝杆菌”，量可以用加号表示：++++每个视野>10根
+++每个视野发现1～10根
++100个视野发现10～99根
+300个视野发现3～9根
±300个视野发现1～2根
3）真菌：经革兰染色如发现革兰阳性卵圆形芽生孢子或假菌丝，可初步报告为：找到真菌孢子和菌丝。
4）放线菌及奴卡菌：革兰染色后，插件中央部分菌丝为革兰阳性，而四周放射的末梢菌丝为革兰阴性，切部分菌株有抗酸性。可报告：找见疑似放线菌或奴卡菌。
4淋球菌涂片检查（neisseriagonorrhoeae）
临床意义：标本：男性以灭菌盐水清洗尿道口，取尿道脓性分泌物涂片；女性尿道炎患者清洗尿道口后从阴道后壁从后向前方压迫尿道使分泌物排出，涂片。子宫颈炎患者先用灭菌盐水清洗宫颈口和阴道壁，再用阴道窥镜压迫子宫阴道部使分泌物排出。涂片革兰染色后镜检，中性粒细胞内有革兰氏阴性双球菌具有诊断价值。报告结果：“中性粒细胞内（或/和）外见到革兰阴性双球菌”。正常：未见。
二细菌分离培养（isolationandcultureofbacteria）
1血培养（bloodculture）：临床意义：正常人体的血液是无菌的，当人体局部感染向全身播散和出现全身感染时，血液中可出现细菌，依据程度不同称为菌血症或败血症.菌血症往往需要以多次血培养证实，如表皮葡萄球菌，即可是致病菌，也是较常见的污染菌.
正常。无菌生长。最终阴性报告时间为7天。亚急性心内膜炎患者标本如5～6天无菌生长，应继续培养至2周方可报告阴性结果。布鲁氏菌培养第3周做出最终阴性报告。厌氧菌培养应在第2周做出最终阴性报告。真菌血症应在第3周做出最终阴性报告。结核血培养应在第6周做出最终阴性报告。
2尿液培养（urineculture）：临床意义：正常人体膀胱中的尿液是无菌的，用膀胱穿刺取出的尿液应是无菌的。当尿液经尿道排出体外，受到尿道中细菌的污染而混有细菌。取经尿道排出的中断尿，细菌数不会超过10ml，因而，以此界限作为诊断泌尿道系感染的依据。
尿液培养反映肾脏、尿道、前列腺等的炎症变化，帮助临床选择有效抗菌药物。正常48小时仍无菌生长可做最终阴性报告。24小时如有细菌生长即做细菌鉴定及药敏。
3痰培养：（sputumculture）：临床意义：痰中的病原菌不少属于机会致病菌，与正常菌群同在，在报告时应做说明。对于机会致病菌，一般仅当其数量超过正常菌群时才可报告鉴定结果及药敏试验结果。
检出致病菌时，除报告该菌的鉴定名称外，还需同时报告正常菌群情况。通常以报告甲型链球菌和奈瑟氏菌作为正常菌群存在的指标。
如：甲型链球菌+
奈瑟氏菌+
肺炎克雷伯氏菌2+
此报告表明肺炎克雷伯氏菌在数量上多于正常菌群，诊断为病原菌。未检出致病菌时，应报告“正常菌群”。
4咽拭子培养（pharynxswabculture）：临床意义：鼻、咽部的细菌感染病原菌源于口腔，口腔中既有需氧菌，也有厌氧菌。同痰培养一样，病原菌不少属于机会致病菌，与正常菌群同在，要正确区分。未检出致病菌时，应报告“正常菌群”。
5穿刺液标本（包括胸腹水、关节液、心包液）的培养（serouscavityeffusionculture）：临床意义：正常的穿刺液是无菌的，有感染的情况下，只要检出细菌，通常都可视为是病原菌。正常：无菌生长。6粪便培养（stoolculture）：临床意义：一方面从肠道大量细菌中找出致病菌，对肠道疾病进行病原学诊断并通过药敏试验为临床提供合适的用药；另一方面可对肠道菌群进行监测，在疾病治疗中预防菌群紊乱。正常：未检出致病菌。
7脑脊液培养（csfculture）：临床意义：正常人体脑脊液是无菌的。
当人体患有脑脊髓膜炎时，在脑脊髓液中可以出现病原菌。常见的病原菌有细菌、真菌和结核菌等。正常：无菌生长。
8化脓及创伤感染标本的培养（purulentsecretionculture）：临床意义
组织或器官的化脓性感染，其病原菌的来源可以分为两类
内源性：感染源是炎症局部周围的器官中的正常菌群（常在菌群），由于损伤等因素造成常在菌群进入无菌4-
5状态的组织内，发生感染.
外源性：感染源是存在于人体外部自然界的微生物，由于外伤和直接接触，外界微生物通过人体表面进入人体，造成感染.
常见细菌有金黄色葡萄球菌、链球菌、消化链球菌；阳性杆菌有炭疽芽孢杆菌、破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、溃疡棒状杆菌；阴性杆菌有肠杆菌、嗜血杆菌、产碱杆菌、假单胞菌、无色杆菌、拟杆菌、弧菌、气单胞菌；其他有放线菌、奴卡氏菌、念珠菌、结核分枝杆菌。
三手工试验
1触酶试验（catalasetest具有触酶（过氧化氢酶）的细菌，能催化过氧化氢，放出新生态氧，继而生成分子氧出现气泡。
2凝固酶试验（coagulasetest）。金黄色葡萄球菌产生的结合凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白附着于细菌表面，发生凝集反应。
3c试验。b群链球菌具有“c”因子，能促进葡萄球菌β溶血素的活性，使两种细菌在划线处呈现箭头形透明溶血区。
4optochin敏感试验。optochin（ethylhydrocupreine，乙基氢化去甲奎宁的商品名）可干扰肺炎链球菌叶酸的生物合成，抑制该菌的生长，故肺炎链球菌对其敏感，其他链球菌对其耐药。
5氧化酶试验（oxidasetest）。该试纸条适用于g-杆菌的氧化酶实验。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素c氧化，再由氧化型细胞色素c使盐酸对二甲氨基苯胺氧化，并与α萘酚结合，生成靛酚蓝而成蓝色。用于初步判断奈瑟氏菌属及肠杆菌科的非发酵菌。
6超广谱β-内酰胺酶的测定（esbls检测）。有些大肠和肺克能产生超广谱β-内酰胺酶，他不仅能水解第一代和第二代头孢菌素，还能水解第三代头孢菌素类抗生素，如头孢他啶、头孢噻肟等和单酰胺酶，使其失去抗菌作用，但对碳青霉烯类无明显作用。
7mrsa和mrs检测：用30ug纸片的头孢西丁的药敏结果及新的折点能预测meca介导的耐药。8d－试验：大环内脂类耐药的葡萄球菌可以改变、诱导克林霉素耐药。由erm基因导致23srrna甲基化耐药，与大环内脂类，林可霉素，和链霉素b型有交叉，又叫mlsb耐药，或只耐大环内脂类（msra基因编码的泵出机制）
四血清学检测
1肥达氏反应（widal）：
正常值：h：
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