微生物实验培养基制备和灭菌省名师优质课获奖课件市赛课一等奖课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。谢谢,培养基制备与灭菌,目标要求,基本原理,试验器材,基本步骤,第1页,目标要求,掌握培养基配制原理及方法,学习高压蒸汽灭菌基本原理及方法,学习干热灭菌操作技术,第2页,基本原理,（一）,培养基配制：,培养基,是人工配制适合微生物生长繁殖或积累代谢产物营养基质。不一样种类培养基中，普通应含有碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养要素。,第3页,因为微生物营养类型复杂，不一样微生物对营养物质需求也不一样，所以，微生物培养基种类繁多比如按培养微生物不一样可分为牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌）、高氏一号合成培养基（培养放线菌）和马丁氏培养基（培养真菌）等；按物理状态不一样可分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基等。配制固体培养基时需加入,1.5%2.0%,琼脂作凝固剂。,不一样微生物对培养基 pH要求不一样，霉菌和酵母菌培养基 pH普通是偏酸性，而细菌和放线菌培养基 pH普通为中性或微碱性。,第4页,试验器材,仪器或其它用具：,搪瓷杯，试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，电磁炉、培养基分装器，高压蒸汽灭菌锅，精密pH试纸（pH 5.59.0），牛角匙，棉花（或橡胶塞），牛皮纸，记号笔，纱布，棉绳等。,溶液或试剂：,牛肉膏，蛋白胨，可溶性淀粉，葡萄糖，NaCl，K,2,HPO,4,，KNO,3,，MgSO,4,7H,2,O，FeSO,4,7H,2,O，琼脂，孟加拉红，链霉素，1mol/L NaOH，1mol/L HCl等。,第5页,操作步骤,称量 溶化 调pH 过滤 分装,加塞 包扎 灭菌 搁置斜面,无菌检验,第6页,称量,：,按培养基配方百分比依次准确地称取所需药品逐一放入搪瓷杯中,第7页,溶化,：,在电炉上加热溶解。,第8页,注：琼脂要在沸水中溶解，用玻棒不停搅拌，直至完全溶解（分装试管）。,也可先将一定量液体培养基分装于三角烧瓶中，然后按,1.5%,2.0%,量将琼脂直接加入各三角烧瓶中，在高温灭菌时即被溶化分装三角瓶),。,第9页,分装：,液体培养基分装试管高度以1/4左右为宜；固体培养基分装试管高度普通不超出1/5，灭菌后制成斜面,。,第10页,第11页,加 塞,第12页,包 扎,第13页,高压蒸汽灭菌,第14页,摆 斜 面,第15页,搁置斜面：,最好待培养基冷至50-60时摆斜面，以免形成大量冷凝水。搁置时要调整斜面倾斜度，以斜面长度不超出试管总长二分之一（图示）为宜。能够成扎摆放，凝固前切莫移动试管。,试管斜面搁置与其长度示意图,第16页,无菌检验：,将灭菌培养基放入37温箱中培养过夜，以检验灭菌是否彻底。,第17页,基本原理,（二）,灭菌：,是指采取强烈理化原因使任何物体内外部一切微生物永远丧失其生长繁殖能力办法。微生物试验要求在无菌条件下进行，为此，试验用器皿、培养基等都要预先包装并经灭菌后才可使用。微生物试验中惯用灭菌方法有干热灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线,（UV）,灭菌和过滤除菌等，可依据详细情况选取不一样灭菌方法。,第18页,高压蒸汽灭菌：,是将待灭菌物品放在一个密闭加压灭菌锅内，经过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内冷空气从排气阀中驱尽（即排气），然后关闭排气阀，继续加热，此时因为蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内压力，从而使沸点增高，得到高于100温度，造成菌体蛋白质凝固变性而到达灭菌目标。,普通采取0.103 MPa蒸汽压力，此时温度是121.1，维持1520 min。当灭菌物品中有易破坏成份时，可采取较低温度115（蒸汽压力0.075 MPa）下维持30 min左右.,第19页,手提式高压蒸汽灭菌锅,第20页,图示 手提式灭菌锅结构,1、安全阀；2、压力表；3、放气阀；4、软管；5、螺栓6、灭菌桶；7、筛架；8、水,第21页,第22页,第23页,锅内加适量水,第24页,装入待灭菌物品,第25页,插入排气软管；加盖，旋紧螺栓,第26页,加热，排气,第27页,升压保压：,排气后，继续加热使锅内蒸汽压迟缓上升。当锅内压力抵达0.103MPa时，调整热源开关，使锅内压力维持所需灭菌温度，同时计算灭菌时间。普通培养基和玻璃器皿灭菌需维持20min。,降压：,抵达要求灭菌时间后，关闭热源，锅内压力自然降至零压后，打开排气阀排气。,取料：,开启锅盖和取出灭菌物品时，锅体表面温度依然很高，逸出蒸汽也很烫。故取物品时要预防手及其它部位皮肤烫伤。,第28页,第29页,第30页,基本原理（三）,干热灭菌：,普通在电热干燥箱中利用热空气进行灭菌。与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160 170），时间长（1.5 2,h,）。但干热灭菌温度不能超出180，不然包器皿纸或棉塞就会烤焦，甚至引发燃烧。,干热灭菌仅适合用于对空玻璃器皿或金属器具消毒灭菌,第31页,第32页,操作步骤,玻璃器皿清洗 烘干 包装 放入,干燥箱 165，2h 关电源，冷却第33页,器皿包扎,第34页,移液管包扎及移液管筒,第35页,干热灭菌,干热灭菌,：165,，1.52.0h,第36页,试验安排,牛肉膏蛋白胨培养基,高氏一号培养基（同上）,马丁氏培养基（同上）,3个组：各,配1000ml，分装三角瓶（200ml/瓶）,1个组：,配1000ml，分装三角瓶（150ml/瓶）,2个组：各,配500ml，分装三角瓶（150ml/瓶）,第37页,试验安排（,4人/组,）,一、器皿包扎和灭菌,（1）培养皿12只（6只1包）,（2）1mL移液管6支,（3）干热灭菌（160,，2h）,二、制备无菌水,（1）250mL三角瓶：内装玻璃珠和90mL水,（2）试管6支：分装9mL水/支,（3）牛皮纸包扎，高压蒸汽灭菌(121,20min),第38页,