鸡感染REV和ALV-J后血清指标动态变化与生长抑制的关系.doc

鸡感染REV和ALV-J后血清指标动态变化与生长抑制的关系 朱国，刁秀国，成子强（山东农业大学动物科技学院 山东 泰安 271018）摘要：首次研究REV和ALV-J感染及混合感染引起血清指标动态变化与鸡群体重抑制的关系。三组1日龄哈伯德父母代肉种鸡，分别接种禽网状内皮组织增生症病毒（REV）、禽J亚群白血病病毒（ALV-J）和REV与ALV-J。定期称量体重，采外周血，通过生化自动分析仪检测鸡血清内总蛋白（TP）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）、甘油三酯（TG）、胆固醇（CHO）的动态变化。结果表明：前7周，血清学指标TP、TG、LDL-c浓度变化与生长抑制的变化呈现相关性，随体重的增加，TP、TG、LDL-c浓度有上升的趋势， HDL-c、CHO浓度变化与体重的变化不存在相关性。这种结果表明了病毒引起鸡的病理变化，从而影响鸡的新陈代谢。生理功能的变化是影响鸡生长抑制的部分因素，肿瘤性病毒感染造成的生长抑制较早地体现在血清指标的变化上。因此，检测7周内的血清TP、TG、LDL-c浓度的动态变化与鸡群体重抑制的关系，可作为这两种肿瘤性疾病早期诊断的依据。关键词：网状内皮组织增生病病毒；J亚群白血病病毒；血清指标；生长抑制；禽网状内皮组织增生症是REV引起火鸡、鸡、鸭、鹅等禽类以淋巴网状组织增生为特征的肿瘤性病理综合征1，2。除此之外，其最重要的特征就是引起鸡群严重的免疫抑制。J亚群白血病是由ALV-J引起的一种肿瘤性传染病，主要发生在肉种鸡3 。本病可垂直传播，也可水平传播4,传播迅速，死亡率可高达205。REV与ALV-J同属于反转录病毒，是目前已知能引起禽类肿瘤的三种病毒中的两种，关于ALV-J和REV引起生长抑制已有报道，但单独及混合感染生长抑制在血清学上的体现还未见报道。因此，本研究拟通过人工感染REV和ALV-J，定期检测体重和血清学指标，分析其相关性，找出与体重抑制密切相关的血清指标，为禽肿瘤性疾病的早期诊断提供依据。1 材料和方法1.1 试验鸡 健康1日龄哈伯德父母代肉种鸡120只，购自潍坊昱合公司。采血，经免疫荧光试验检测ALV-J和 REV为阴性。随机把鸡群分为3个实验组，1个对照组。严格隔离饲养，饲料中添加适量的维生素。1.2 病毒及接种 REV为SNV株（由山东农业大学崔治中教授惠赠），ALV-J为NX0101株（本实验室保存）。第1组于1日龄腹腔接种REV 0.3ml，相当于103.31TCID50/只，第2组腹腔接种ALV-J 0.2ml，相当于103.1TCID50/只,第3组同时腹腔接种REV与ALV-J，每只接种REV 0.3ml、ALV-J 0.2ml；第4组（对照组）注射生理盐水。严格隔离饲养，按正常免疫程序免疫，观察、记录临床表现。1.3 血样与病料的采集 分别于接种后1，3，5，7，9，11，13周称重、采血，1周颈收稿日期：基金项目：中华人民共和国博士后基金（2005038258）作者简介：朱国（1976）山东阳谷县人，硕士研究生，研究方向为动物分子病理学*通讯作者：成子强（1971-），男，副教授，博士，硕士生导师。研究方向为动物分子病理,E-mail:chziqiang静脉采血，之后翅静脉采血，自然状态下析出血清。取肝脏、肾脏、胰腺、肾上腺、胸腺、脾脏、法氏囊、肠等器官于中性福尔马林溶液中固定，石蜡包埋，常规切片，用于病理组织学观察。1.4 检测 利用抗原抗体反应检测HDL-c；保护法检测LDL-c；双缩脲法检测总蛋白；GK-GPO-PAP终点比色法检测甘油三酯；以HDAOS作为显色剂的酶法试剂检测CHO；全自动生化分析仪进行检测。1.5 数据处理 对所得数据用SPSS软件进行单因子方差分析，同时在单独感染组和对照组之间、单独感染组与混合感染组之间进行t检验，比较差异的显著性。2 结果2.1 感染病毒后对体重的影响图1感染REV与ALV-J后对不同日龄鸡体重的影响2.2 TP浓度的变化 攻毒组TP的浓度前期变化较大。在1、3周体重还没有差异性时，血清蛋白已经出现明显的差异性，单独感染组和混合感染组与对照组比较差异极显著。7周后，攻毒组与对照组比较差异不显著，说明耐过的鸡血清TP逐渐恢复到正常值。表1 鸡血清TP浓度（XSD）（单位：g/L）组别 1周 3周 5周 7周 9周 11周 13周1组 14.762.05A 13.421.15A 23.601.10A 24.761.10b 22.860.90 18.573.09 28.832.12组 12.301.15A 12.831.10A 25.560.98A 22.362.44 A 21.563.16 19.862.60 29.333.863组 15.100.17A 11.662.84A 21.202.33A 20.060.80A 23.820.10 19.903.14 25.166.394组 22.532.95 21.503.14 32.865.39 29.490.70 26.732.40 22.132.89 28.161.81注：REV组、ALV-J组和REVALV-J组分别与混合感染组和对照组做比较。与对照同一日龄同列肩注a为差异显著(p0.05)，A为差异极显著(p0.01)。REV组与ALV-J组同混合感染组同一日龄同列肩注b为差异显著(p0.05)，B为差异极显著（p0.05）。X为平均数，SD为标准差。下同。2.3 CHO浓度的变化 整个实验期间，胆固醇含量的变化各组间差异不显著，第5周胆固醇含量最高，以后呈下降趋势，鸡耐过后胆固醇趋于稳定。攻毒后影响到机体胆固醇代谢，但差异不显著。攻毒后3周出现大的转折，可能是病毒对机体的影响造成的。表2 鸡血清CHO浓度（XSD）（单位：mmol/L）组别 1周 3 周 5周 7周 9周 11周 13周1组 2.730.24 1.540.15 3.400.85 3.210.17 2.240.08 1.630.13 1.630.132组 2.460.30 1.740.40 3.670.38 3.470.19 2.520.23 1.620.35 1.620.123组 3.030.51 1.910.41 3.020.51 3.530.06 2.220.01 1.710.27 1.670.184组 3.150.67 2.020.14 3.910.52 3.450.19 2.760.58 2.100.18 2.100.182.4 TG浓度的变化 实验过程中，攻毒后血清TG 在1、3、5周明显增高，攻毒组大于对照组的浓度，单独感染与混合感染比较差异不显著。5、7周呈现下降趋势，7周以后，各组间浓度变化差异不显著，出现交叉，呈平稳发展。表3 鸡血清TG浓度（XSD）（单位：mmol/L）组别 1周 3周 5周 7周 9周 11周 13周1 组 0.320.03 0.270.01a 0.210.02B 0.180.03 0.180.01 0.160.03 0.250.022 组 0.340.03 0.290.02a 0.340.05A 0.190.06 0.230.05 0.150.01 0.400.01ab3 组 0.300.02 0.250.02a 0.350.05A 0.160.04 0.170.02 0.190.03 0.340.154 组 0.270.04 0.210.01 0.190.02 0.170.02 0.170.01 0.17 0.01 0.290.012.5 HDL-c浓度的变化 第5周，攻ALV-J组与混合感染组和对照组差异显著，REV组与对照组差异显著。总的来说攻毒组鸡血清中HDL-c的含量低于对照组。 表4 鸡血清HDL-c的浓度（XSD）（单位：mmol/L）组别 1周 3周 5周 7周 9周 11周 13周1组 2.260.24 0.960.13 2.000.20a 2.520.19 1.550.11 1.440.08 2.120.172组 1.860.25 1.270.41 2.640.19ab 2.290.20 1.660.36 1.540.19 2.180.273组 2.460.09 1.320.11 2.020.24 2.440.11 1.640.12 1.300.22 2.140.224组 2.540.06 1.520.09 3.160.51 2.740.06 1.590.28 1.550.18 2.220.132.6 LDL-c的含量变化 前7周，感染组的比对照组高，差异极显著，虽然913周感染组浓度也较对照组高，但差异已不显著。单独感染组和混合感染组也出现极显著差异性。由此看来，可能疾病对LDL-c的影响更大。表5 鸡血清LDL-c的浓度（XSD）（单位：mmol/L）组别 1周 3周 5周 7周 9周 11周 13周1组 0.580.01Ab 0.390.11AB 0.710.20A 0.840.09Ab 0.500.03 0.450.11 0.560.032组 0.400.09B 0.370.02aB 0.960.17AB 0.840.09Ab 0.520.26 0.370.02 0.550.183组 0.650.06A 0.630.08A 0.610.02a 0.920.09A 0.490.05 0.660.14 0.640.094组 0410.01 0.280.06 0.560.04 0.690.01 0.500.06 0.400.05 0.570.082.7 器官病变与组织切片的观察 剖检可见：肝脏肿大，部分有肿瘤结节，显微镜下多数肝内出现增生的淋巴细胞，肝细胞坏死较严重，中央静脉周围充满大量的炎性细胞，血管内充满红细胞，部分血管血栓。肠道90以上变薄，弥漫型出血，肠粘膜脱落，显微镜下多有淋巴细胞浸润。胰腺出血，由乳白色变为粉红色，显微镜下腺细胞呈片状坏死。肾上腺眼观病变不明显，镜下可见淋巴细胞呈灶性增生，腺细胞呈片状坏死。肾脏肿胀、苍白，显微镜下可见肾小球萎缩，部分崩解；肾小管上皮细胞肿胀、核碎裂、细胞崩解，只剩基底膜肾小管间质增宽。3 讨论对于REV与ALV-J，鸡群单独感染和混合感染都能引起生长抑制6。目前鸡群多存在二重感染或多重感染，特设单独感染与混合感染做比较。本实验中17周，攻毒组TP与LDL-c浓度相对于对照组差异极显著，攻毒组间差异不显著。但TP浓度在3、5、7周混合感染组偏低于单独感染组。TG的浓度攻毒组与对照组在3、5周时差异显著。HLD-c、CHO整个过程差异不显著。因此，17周，TP、TG、LDL-c浓度变化与体重抑制存在相关性，随着体重的增加TP、TG、LDL-c浓度有上升的趋势。TP、TG、LDL-c可以作为临床检测的一个指标，是病毒对鸡的生长抑制最早体现。而HDL-c、CHO不具有临床价值。混合感染组与单独感染的体重和血清变化没有明显差异性，不能作为鉴别诊断的依据。血清中蛋白的含量降低，主要是因为攻毒后鸡食欲降低，摄入的碳水化合物和蛋白质不足。又由于肝细胞坏死较严重，同时肠粘膜脱落，致使消化功能紊乱，致使机体合成与吸收作用减弱，造成血液总蛋白含量下降。攻毒组的免疫器官重量明显低于对照组，IgG的含量生成减少，也是造成总蛋白下降的原因6，7。胰岛素可以促进氨基酸进入细胞，从而促进蛋白质合成，攻毒鸡胰腺腺细胞呈片状坏死，胰岛素分泌减少，也降低了蛋白质合成。HDL由肝和肠合成与分泌，与TG浓度成反比，它的下降造成血浆内TG的上升8。LDL是许多组织吸收胆固醇酯和胆固醇的中介体，LDL-c的升高，促进血清内胆固醇减少，引起血清内胆固醇含量降低。胆固醇是体内所有其他类固醇的前体，例如皮质类固醇、性激素和维生素D的前体8。肝与肠的炎症性变化，使胆固醇合成的量减少。胆固醇在血清中含量的降低，将影响上诉激素在体内的产生，抑制鸡的生长与性成熟，从而对鸡的体重有抑制作用。本实验从临床早期诊断的角度研究了感染肿瘤性病毒后，鸡的生长抑制与血清学指标的关系。同时，血清指标与肿瘤的出现存在相关性，肿瘤鸡比同期未形成肿瘤鸡的血清指标偏低，这些数据可作为检测肿瘤存在的一个依据。参考文献1 Witter R L. Reticuloendothelisis. In B W Calnek. Diseases of Poultry (10th)M.USA, Iowa State University Press,1997,467484.2 崔治中,孙怀昌,朱承如.鸡白血病及禽网状内皮增生病感染情况的调查J.中国畜禽传染病,1987,1:3738.3 Pay L N, Gillespie A M, Howes K. Myeloid leukemia and transmission of HPRS-103 strain of avian leukosis virus Jleukemia, 1992, 6: 11671176.4 Payne L N, Brown S R, Bumstead N, et al. A novel subgroup of exogenous avian leucosis virus in chickenJ.J Gen Virol.1991,72:801807.5 Payne L N, Fadly A M, Leukosis/Sarcoma group A. Calnek B W. Diseases of PoultryM.Ames. USA Iowa State University Press, 1997, 414466.6 王建新,崔治中,张纪元,等.J亚群禽白血病病毒与禽网状内皮增生症病毒共感染对肉鸡生长和免疫功能的抑制作用J.中国兽医学报2003,3:211213.7 孙淑红,崔治中,邱玉玉.网状内皮增生病病毒感染SPF鸡对疫苗应的抑制作用J.中国病毒学,2006,21(1):3437.8 宋慧萍(主译),哈珀生物化学M.北京:科学出版社,2003,241265.The Relationship between Serum Indexes Dynamic Changes and Body Weight Suppression in Breeder Broiler Infected with REV and ALV-JLIU Cheng-jun1,WANG Yong-zhi2,MENG Fan-jun3,WU Wei4,ZHU Guo5,DIAO Xiu-guo5 (1.Liaocheng Pasturage Bureau of Shandong, Liaocheng,Shandong,252000,China；2.Jinan HealthSchool of Shandong,Jinan,Shandong,276400,China;3.Yishui Pasturage Bureau of Shandong,Yishui,Shandong, 250022,China；4.Weifang Entry-Exit Inspection Quarantine and Bureau of P.R.C, Weifang,Shandong, 261041,China；5.College of Animal Science & Technology Shandong Agricultural University,Taian Shandong ,271018, China)Abstract: The Relationship between serum Indexes dynamic changes and body weight suppression in breeder broiler infected with REV and ALV-J was first studied in the experiment. one-day-old HBD breeder broilers were inoculated with REV and ALV-J as well as both REV and ALV-J respectively. Body weights and peripheral blood were studied periodically, and serum gross protein (TP), high density lipoprotein cholesterol (HDL-c), low density lipoprotein (LDL-c), triglyceride (TG) and cholesterol (CHO) were detected by biochemical automatic analyzer. The result showed that dynamic Changes of TP、TG、LDL-c correlated with body weight suppression in the first seven weeks. With the increase of body weight, concentration of TP、TG、LDL-c increase. After that period, there was no dependability between them. While concentration of HDL-c、CHO didnt correlate with body weight suppression. It showed that infection of virus cause pathological changes in breeder broilers and affected their metabolism, The changes of physiologic function was a partial factor which affected growth. Because growth suppression caused by virus can be seen from the dynamic changes of serum indexes in early stage, relationship between serum Indexes dynamic changes and body weight suppression in breeder broiler within 7 weeks can be detected as a basis for early diagnosis.Key words: Reticulendotheliosis virus; Avian leukosis virus subgroup J; Serum index Dynamic changes